Inmunoterapia dirigida a patógenos intracelulares.

Un péptido inmunogénico que comprende (i) un epítopo de célula T derivado de un antígeno asociado a un patógeno intracelular no viral y (ii) un motivo C-(X)2-[CT] o [CT]-(X)2-C,

en el que dicho motivo está adyacente a dicho epítopo de célula T o está separado de dicho epítopo de célula T por un conector,

para su uso en la prevención o en el tratamiento de una infección con dicho patógeno intracelular no viral.

detaiiada de ia invención

Definiciones

El término péptido cuando se usa en el presente documento se refiere a una molécula que comprende una secuencia de aminoácidos de entre 2 y 200 aminoácidos, conectados por enlaces peptídicos, pero que pueden en una realización particular comprender estructuras no aminoacídicas (como por ejemplo un compuesto de unión orgánico). Los péptldos de acuerdo con la Invención pueden contener cualquiera de los 20 aminoácidos convencionales o versiones modificadas de los mismos, o pueden contener aminoácidos no de origen natural Incorporados por síntesis química de péptldos o por modificación química o enzimàtica.

El término "epítopo" cuando se usa en el presente documento se refiere a una o varias partes (que pueden definir un epítopo conformaclonal) de una proteina o un factor que es/son específicamente reconocidos y unidos por un anticuerpo o una parte del mismo (Fab', Fab2', etc.) o un receptor presentado en la superficie celular de una célula B o T, y que es capaz, por dicha unión, de Inducir una respuesta inmunitaria.

El término "antígeno" cuando se usa en el presente documento se refiere a una estructura de una macromolécula que comprende uno o más hapteno o haptenos (que provocan una respuesta inmunitaria solamente cuando se unen a un vehículo) y/o que comprenden uno o más epítopos de células T. Normalmente, dicha macromolécula es una proteina o un péptido (con o sin pollsacárldos) o está hecho de una composición proteica y comprende uno o más epítopos; dicha macromolécula puede denominarse como alternativa en el presente documento "proteina antigénica o péptido antigénico".

La frase "epítopo de céiuia T" o epítopo-céiuia T" en el contexto de la presente invención se refiere a un epítopo de célula T dominante, subdominante o Inferior, es decir, una parte de una proteina o un factor antigénico que se reconoce específicamente y que se une por un receptor en la superficie celular de un célula T. Si un epítopo es dominante, sub-domlnante o menor depende de la reacción Inmunitaria provocada frente al epítopo. La dominancia depende de la frecuencia a la que tales epítopos se reconocen por las células T y son capaces de activarlos, entre todos los posibles epítopos de célula T de una proteina. En particular, un epítopo de célula T es un epítopo unido por las moléculas del CMH de clase I o del CMH de clase II.

El término "CMH" se refiere a "antígeno mayor de hlstocompatlbllldad". En seres humanos, los genes del CMH se conocen como genes HLA ("antígeno leucocitario humano"). Aunque no hay una convención seguida consistentemente, algunas referencias bibliográficas usan HLA para referirse a las moléculas de proteínas de HLA, y CMH para referirse a los genes que codifican las proteínas de HLA. Como tal los términos "CMH" y "HLA" son equivalentes cuando se usan en el presente documento. El sistema HLA en el hombre tiene su equivalente en el ratón, es decir, el sistema H2. Los genes de HLA más Intensamente estudiados son los nueve denominados genes clásicos del CMH: HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DPA1, HLA-DPB1, HLA-DQA1, HLA-DQB1, HLA-DRAy HLA-DRB1. En humanos, el CMH está dividido en tres reglones: Clase I, II y III. Los genes A, B y C pertenecen al CMH de clase I, mientras que los seis genes D pertenecen a la clase II. Las moléculas del CMH de clase I están hechas de una única cadena polimorfica que contiene 3 dominios (alfa 1, 2 y 3), que se asocia con la beta 2 mlcroglobullna en la superficie celular. Las moléculas de clase II están hechas de 2 cadenas pollmórflcas, conteniendo cada una 2 cadenas (alfa 1 y 2 y beta 1 y 2).

Las moléculas del CMH de clase I se expresan vlrtualmente en todas las células nucleadas. Los fragmentos peptídlcos presentados en el contexto de las moléculas del CMH de clase I se reconocen por los células T CD8+ (células T cltotóxlcas o CTL). Las células T CD8+ frecuentemente maduran en efectores citotóxicos que pueden Usar las células que llevan el antígeno estimulante. Las moléculas del CMH de clase II se expresan principalmente en llnfocltos activados y en células presentadoras de antígeno. Las células T CD4+ (células T ayudantes o HTL) se activan con el reconocimiento de un único fragmento peptídico presentado por una molécula del CMH de clase II, normalmente encontrado en una célula presentadora de antígeno como un macrófago o una célula dendrítica. Las células T CD4+ prollferan y secretan cltoclnas que apoyan una respuesta mediada por anticuerpos a través de la producción de IL-4 o IL-10 o bien apoyan una respuesta mediada por células a través de la producción de IL-2 e IFN-gamma.

Los HLA funcionales se caracterizan por una hendidura de unión profunda a la que se unen los péptidos endógenos así como extraños potenclalmente antlgénlcos. La hendidura se caracteriza adicionalmente por una forma y unas propiedades físico-químicas bien definidas. Los sitios de unión del HLA de clase I están cerrados, donde los extremos de los péptidos están Inmovilizados en los extremos de la hendidura. También están envueltos en una red de enlaces de hidrógeno con restos de HLA conservados. En vista de estas restricciones, la longitud de los péptidos unidos se limita a 8-10 restos. Sin embargo, se ha demostrado que los péptidos de hasta 12 restos de aminoácidos también son capaces de unirse al HLA de clase I. La superposición de las estructuras de diferentes complejos de HLA confirma un modo general de unión en el que los péptidos adoptan una conformación relativamente lineal, extendida.

Por el contrario a los sitios de unión del HLA de clase I, los sitios de la clase II están abiertos por ambos extremos. Esto permite a los péptidos extenderse desde la región de unión real, de esta manera "colgando" de ambos extremos. Los HLA de clase II pueden por lo tanto unir llgandos peptídicos de longitud variable, que varía de 9 a más de 25 restos de aminoácidos. Similar al HLA de clase I, la afinidad de un ligando de clase II se determina por un componente "constante" y uno "variable". La parte constante de nuevo resulta de una red de enlaces de hidrógeno formados entre restos conservados en la hendidura del HLA de clase II y la cadena principal de un péptido de unión. Sin embargo, este patrón de enlaces de hidrógeno no está confinado a los restos N- y C-terminales del péptido sino que se distribuye a lo largo de la cadena entera. Lo último es Importante porque restringe la conformación de los péptidos que forman complejos en un modo de unión estrictamente lineal. Esto es común para todos los alotipos de clase II. El segundo componente que determina la afinidad de unión de un péptido es variable debido a ciertas posiciones de polimorfismo dentro de los sitios de unión de clase II. Diferentes alotipos forman diferentes bolsillos complementarlos dentro de la hendidura, de esta manera contando para la selección dependiente de subtipos de los péptidos, o la especificidad. De manera Importante, las restricciones en los restos de aminoácidos retenidos dentro de los bolsillos de clase II son en general más "suaves" que las de la clase I. Hay mucha más reactividad cruzada de los péptidos entre diferentes alotipos del HLA de clase II. La secuencia de los +/- 9 aminoácidos de un epítopo de célula T del CMH de clase II que se ajustan a la hendidura de la molécula de CMH II se numeran normalmente de P1 a P9. Los aminoácidos N-termlnales adicionales del epítopo se numeran P-1, P-2 y así sucesivamente, los aminoácidos C-termlnales del epítopo se numeran P+1, P+2 y así sucesivamente.

La frase "compuesto orgánico que tiene una actividad reductora" cuando se usa en el presente documento se refiere a compuestos, más en particular a secuencias de aminoácidos, capaces de reducir enlaces disulfuro en las proteínas. Una frase como alternativa usada para estas secuencias de aminoácidos es "motivo redox".

La frase "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad del péptido de la Invención o un derivado del mismo, que produce el efecto terapéutico o preventivo deseado en un paciente. Por ejemplo, con referencia a una enfermedad o un trastorno, es la cantidad que reduce en algún grado uno o más síntomas de la enfermedad o trastorno y más particularmente devuelve a la normalidad, parcial o completamente, los parámetros fisiológicos o bioquímicos asociados con o causantes de la enfermedad o el trastorno. De acuerdo con una realización particular de la presente Invención, la cantidad terapéuticamente eficaz es la cantidad el péptido de la Invención o el derivado del mismo, que dará lugar a una mejora o una restauración de la situación fisiológica normal. Por ejemplo, cuando se usa para tratar terapéuticamente a un mamífero afectado por... [Seguir leyendo]

1. Un péptido ¡nmunogénico que comprende (i) un epítopo de célula T derivado de un antígeno asociado a un patógeno intracelular no viral y (¡i) un motivo C-(X)2-[CT] o [CT]-(X)2-C, en el que dicho motivo está adyacente a dicho epítopo de célula T o está separado de dicho epítopo de célula T por un conector,

para su uso en la prevención o en el tratamiento de una infección con dicho patógeno intracelular no viral.

2. El péptido para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho antígeno asociado al patógeno intracelular no viral es una bacteria, una micobacteria o un parásito.

3. El péptido para su uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en el que dicho conector consta como mucho de 7 aminoácidos.

4. El péptido para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho conector consta como mucho de 4 aminoácidos.

5. El péptido para su uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4, en donde dicho péptido tiene una longitud de entre 12 y 50 aminoácidos.

6. El péptido para su uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 5, en donde dicho péptido tiene una longitud de entre 12 y 30 aminoácidos.

7. El péptido para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde dicho péptido ¡nmunogénico comprende adicionalmente una secuencia de direccionamiento endosómico.

8. El péptido para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicho motivo está situado en en el extremo N terminal del epítopo de célula T.

9. El péptido para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que:

- al menos una X en dicho motivo es Gly, Ala, Ser o Thr, o

- en el que al menos una X en dicho motivo es His o Pro, o

- en el que al menos una C en dicho motivo está metilada.

10. El péptido para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el motivo es C- X(2)-C.

11. El péptido para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que el epítopo es un epítopo de célula T del MHC de clase II.

12. Un método para obtener una población de células T citotóxicas específicas de antígeno asociado a un patógeno intracelular no viral, comprendiendo el método las etapas de:

- proporcionar células de sangre periférica;

- poner en contacto dichas células /n v/fro con un péptido ¡nmunogénico que comprende (i) un epítopo de célula T derivado de un antígeno asociado a un patógeno intracelular no viral y (¡i) un motivo C-(X)2-[CT] o [CT]-(X)2-C que está adyacente a dicho epítopo de célula T o está separado de dicho epítopo de célula T por un conector; y

- expandir dichas células en presencia de Interleucina 2 (IL-2).

13. Un método para obtener una población de células T citotóxicas específicas de antígeno asociado a un patógeno intracelular no viral, comprendiendo el método las etapas de:

- proporcionar un péptido ¡nmunogénico que comprende (i) un epítopo de célula T derivado de un antígeno asociado a un patógeno intracelular no viral y (¡i) un motivo C-(X)2-[C*T] o [C*T]-(X)2-C, estando el motivo adyacente a dicho epítopo de célula T o separado de dicho epítopo de célula T por un conector;

- administrar dicho péptido ¡nmunogénico a un sujeto no humano; y

- obtener dicha población de células T específicas de antígeno asociado a un patógeno intracelular no viral de dicho sujeto no humano.

14. Una población de células T citotóxicas específicas de antígeno asociado a un patógeno intracelular no viral obtenible por el método de acuerdo con las reivindicaciones 12 o 13, en la que dichas células tienen la capacidad de inducir apoptosis en las células que presentan antígeno (CPA), de producir IFN-gamma y de expresar CTLA-4.

15. Una población de células T citotóxicas específicas de antígeno asociado a un patógeno intracelular no viral de acuerdo con la reivindicación 14, para usar en la prevención o en el tratamiento de una infección con dicho patógeno intracelular no viral.

16. Un péptido ¡nmunogénico aislado que comprende un epítopo de célula T de un antígeno asociado a un patógeno ¡ntracelular no viral y, adyacente a dicho epítopo de célula T o separado de dicho epítopo de célula T por un conector, un motivo C-(X)2-[CT] o [CT]-(X)2-C.

5 17. El péptido de acuerdo con la reivindicación 16, en el que dicho conector consiste como mucho en 7 aminoácidos.

18. El péptido de acuerdo con las reivindicaciones 16 o 17, en el que dicho conector consta como mucho de 4 aminoácidos.

10 19. El péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18, en donde dicho péptido tiene una

longitud de entre 12 y 50 aminoácidos.

20. El péptido de acuerdo con las reivindicaciones 16 a 19, en donde dicho péptido tiene una longitud de entre 12 y 30 aminoácidos.

21. El péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 20, en el que el motivo es C-(X)2-C.

22. El péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 21, en el que el epítopo es un epítopo de célula T del MHC de clase II.