Eliminación de respuestas inmunitarias contra vectores virales.

Un péptido inmunogénico aislado que comprende (i) un epítopo de célula T limitado al CMH de clase II de una proteína de un vector viral y (ii) un motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C,

en el que dicho motivo de óxido-reducción está directamente adyacente a dicho epítopo de célula T, o está separado de dicho epítopo de célula T mediante un conector de a lo sumo 7 aminoácidos, para su uso en la prevención o la supresión, en un receptor de terapia génica o de vacunación génica, de una respuesta inmunitaria contra dicha proteína de vector viral.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2009/051803.

Solicitante: Life Sciences Research Partners VZW.

Nacionalidad solicitante: Bélgica.

Dirección: Herestraat 49, bus 913 3000 Leuven BELGICA.

Inventor/es: SAINT-REMY, JEAN-MARIE.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K39/12 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L;   composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Antígenos virales.
  • A61K39/39 A61K 39/00 […] › caracterizados por los aditivos inmunoestimulantes, p. ej. por los adyuvantes químicos.
  • A61K48/00 A61K […] › Preparaciones medicinales que contienen material genético que se introduce en las células del cuerpo vivo para tratar enfermedades genéticas; Terapia génica.
  • C07K14/075 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Adenoviridae.
  • C12N15/86 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Vectores virales.
  • C12N9/02 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.; Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Oxidorreductasas (1.), p. ej. luciferasa.

PDF original: ES-2545885_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Eliminación de respuestas inmunitarias contra vectores virales Campo de la invención

La presente invención se refiere a péptidos inmunogénicos y a su uso en la prevención y/o la supresión de respuestas inmunitarias contra vectores virales tal como los que se usan en terapia génica y en vacunación génica.

Antecedentes de la invención

Los virus brindan un gran potencial como fuente de vectores para terapia génica y para vacunación génica. Varios virus se utilizan actualmente para terapia génica, tanto experimental como en el ser humano, incluyendo virus de ARN (gamma retrovirus y lentivirus) y virus de ADN (adenovirus, virus adenoasociados, herpes virus y poxvirus). Varios factores determinan la elección del vector viral, tales como el tiempo durante el cual se requiere la expresión transgénica, la célula diana que debe ser transducida, si la célula diana se está dividiendo o no, el riesgo relacionado con eventos multi insercionales y el riesgo de inducir una respuesta inmunitaria orientada al vector. Para una revisión reciente véase, por ejemplo, Flotte (27), J. Cell. Physiol. 213, 31-35.

La terapia génica está siendo ahora considerada para el tratamiento de un creciente número de enfermedades. Éstas incluyen: (1) trastornos autosómicos recesivos de un solo gen, tales como la fibrosis quística, la hemofilia A y B, la enfermedad granulomatosa crónica, la inmunodeficiencia combinada severa ligada al cromosoma X, y la hiperlipemia familiar; (2) síndromes autosómicos dominantes; (3) muchas formas de cáncer; (4) enfermedades infecciosas; (5) síndromes inflamatorios crónicos y (6) dolor intratable. En el futuro también podrá ser factible la terapia de enfermedades asociadas con múltiples defectos o con mecanismos patogenéticos, tales como la diabetes mellitus.

La vacunación génica se ha desarrollado para hacer frente a la mala protección que confieren las proteínas solubles de diversos patógenos, incluyendo virus tales como el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). Se pensó que la liberación intracelular de antígenos podría dirigir un procesamiento eficaz en el complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) tanto de clase I como de clase II para mejorar la activación de células T CD8+ y CD4+, respectivamente.

La respuesta inmunitaria del hospedador contra proteínas de vectores virales se reconoció pronto como un factor limitante en terapia génica. Las células transducidas con vectores virales generan células T específicas, lo que conduce a inflamación y a lisis celular, anulando de este modo la expresión transgénica. Sekaly (28), J. Exp. Med., 25, 7-12 ha comunicado los resultados de un reciente ensayo de vacunación génica anti VIH utilizando vectores recombinantes de adenovirus que expresaban los genes gag, pal o Net del VIH. Sorprendentemente, se demostró que la presencia de una respuesta inmunitaria preexistente contra las proteínas del vector viral tenía resultados perjudiciales sobre el resultado de la vacunación. De este modo, en ambas situaciones (es decir, ya sea una respuesta inmunitaria preexistente o una respuesta inmunitaria no preexistente) la respuesta inmunitaria contra las proteínas relacionadas con vectores parece ser ominosa.

La respuesta inmunitaria contra adenovirus proporciona uno de los mejores ejemplos de esto, ya que los vectores derivados de adenovirus se utilizan en el contexto tanto en terapia génica como en vacunación génica. El adenovirus es muy inmunogénico en el ser humano y en mamíferos. Tras la inyección, los adenovirus generan una respuesta inmunitaria innata aguda, lo que produce inflamación y citotoxicidad, que es frecuentemente transitoria. Sin embargo, esta respuesta desencadena una respuesta adaptativa que conduce a la activación de células T CD4+ y CDS+. Esto se observa incluso con vectores de los que se han eliminado las proteínas más inmunogénicas.

La respuesta inmunitaria adaptativa contra adenovirus implica varios componentes: anticuerpos específicos, células T CD4+ y CDS+. Las proteínas virales se procesan y presentan por las células presentadoras de antígeno (CPA) del hospedador en forma de péptidos unidos al (CMH) de clase I y II. Por tanto, dicha presentación da como resultado la activación de células T específicas pertenecientes al subtipo CDS+ o CD4+, respectivamente. La función de las células T CDS+ es lisar células que expresan péptidos del CMH de clase I derivados de virus. La función de las células T CD4+ es multifacética: ayudando a las células B a madurar y a transformarse en células formadoras de anticuerpos, ayudando a las células T CDS+ a adquirir una maduración completa y al desarrollo de un ambiente inflamatorio. Como tal, las células T específicas CD4+ juegan un papel importante en la elaboración de una respuesta inmunitaria específica frente a virus.

Hohn H. et al., (1999) J. Immunol. 163, 5715-5722, divulgan en la Tabla VI epítoposde células T de la proteína HPV E7 que contiene una secuencia CxxC.

Él documento US715789 describe un antígeno gripal fusionado a una proteína de estrés, por ejemplo, a PDI. El documento W2/892 describe proteínas de fusión Tiorredoxina-HPV É7.

Sundar et al., (1985) Int. J. Cáncer 35, 351-357, describen Tregs (células T reguladoras) específicas para antígenos virales.

Dobrzynski et al., (26) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 13, 4592-4597, abordan las respuestas inmunitarias contra un vector de transferencia génica en protocolos de terapia génica, y proponen como solución a este problema una primera introducción del transgén en un vector viral adenoasociado, seguido de la introducción de un vector adenoviral. Este

artículo menciona la activación células T CD4+ reguladoras como un mecanismo para el aumento observado en la expresión transgénica.

Fomenko D. (23) Biochem. 42, 11214-11225, divulga que no se puede considerar que todos los motivos C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C actúen como motivos de oxidación-reducción (redox). El motivo CxxC es también característico de algunas proteínas de dedos de cinc y de otras citocinas (citocinas CXCR).

Heemskerk et al., (26) J. Immunol. 177, 8851 -8859, describen clones de célula T CD4(+) específicos de adenovirus que reconocen antígenos endógenos e inhiben la replicación viral in vitro a través de interacciones afines. El epítopo reconocido por estas células T CD4+ citotóxicas se presentan en las moléculas de CMH de clase II.

Carlier et al., (212) PlosOne 7, e45366, caracterizan adicionalmente células como las divulgadas en la presente solicitud y explican que la citotoxicidad se produce a través de una ruta apoptótica independiente de perforina.

Los adenovirus son ubicuos y se han descrito más de 5 serotipos. De este modo, muchos sujetos ya están inmunizados, lo que limita el uso de vectores derivados de dichos virus.

Por consiguiente, en el escenario de la terapia génica así como de la vacunación génica, es muy recomendable encontrar modos para prevenir y/o suprimir respuestas inmunitarias contra proteínas de vectores virales.

Sumario de la invención

La invención, en su más amplio sentido, es como se define en las reivindicaciones independientes.

La presente invención se refiere, en un primer aspecto, a péptidos inmunogénicos aislados, como se detalla en las reivindicaciones, para su uso en la prevención o supresión en un receptor de un vector viral, para terapia génica o vacunación génica, a las respuestas inmunitarias contra dicho vector viral. Más particularmente, la divulgación se refiere al uso de al menos un péptido inmunogénico aislado como se detalla en las reivindicaciones para la elaboración de un medicamento para prevenir o suprimir una respuesta inmunitaria contra un vector viral, en un receptor de dicho vector para terapia génica o vacunación génica.

En un aspecto adicional, la invención se refiere a al menos un péptido inmunogénico aislado, como se detalla en las reivindicaciones, para su uso en la prevención, en un receptor de terapia génica o de vacunación génica, de la activación de células T CD4+ efectoras por una proteína de vector viral.

En un aspecto adicional, la invención también abarca al menos un péptido inmunogénico aislado como se detalla en las reivindicaciones para su uso en la inducción, en un receptor de terapia génica o de vacunación génica, de células T CD4+ reguladoras que sean citotóxicas contra células que presentan una proteína de vector viral.

En un aspecto adicional, la invención también se refiere a al menos un péptido inmunogénico aislado como se detalla en las reivindicaciones para su uso en la prevención, en un receptor de terapia génica o de vacunación génica, de la activación... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un péptido inmunogénico aislado que comprende (i) un epítopo de célula T limitado al CMH de clase II de una proteína de un vector viral y (ii) un motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C, en el que dicho motivo de óxido-reducción está directamente adyacente a dicho epítopo de célula T, o está separado de dicho epítopo de célula T mediante un conectorde a lo sumo 7 aminoácidos, para su uso en la prevención o la supresión, en un receptor de terapia génica o de vacunación génica, de una respuesta inmunitaria contra dicha proteína de vector viral.

2. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1, para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho vector viral es un adenovirus, un virus adenoasociado, un herpesvirus, un poxvirus, un retrovirus o un lentivirus.

3. El péptido de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho motivo de óxido-reducción C-(X)2- [CST] o [CST]-(X)2-C no se produce de manera natural dentro de una región de 11 aminoácidos en el extremo N- o C-terminal adyacente al epítopo de célula T en dicha proteína de vector viral, o en el que dicho motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C está situado en el extremo N del epítopo de célula T.

4. El péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para el uso de acuerdo con la reivindicación 1 en donde dicho péptido inmunogénico comprende adicionalmente una secuencia de direccionamiento endosómico.

5. El péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 para el uso de acuerdo con la reivindicación 1 en el que al menos una X en dicho motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C es Gly, Ala, Ser o Thr, o en el que al menos una X en dicho motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C es His o Pro, o en el que al menos una C en dicho motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C está metilada.

6. Un método in vitro para obtener una población de células T CD4+ reguladoras específicas de antígeno de proteína de vector viral que son citotóxicas contra células que presentan un epítopo de célula T limitado al MHC de clase II de dicha proteína de vector viral, comprendiendo el método las etapas de:

proporcionar células de sangre periférica;

poner en contacto dichas células in vitro con un péptido inmunogénico que comprende (i) un epítopo de célula T limitado al MHC de clase II de una proteína de vector viral y, directamente adyacente a dicho epítopo de célula T o separado de dicho epítopo de célula T mediante un conector de hasta 7 aminoácidos (ii) un motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C; y

expandir dichas células en presencia de Interleucina 2 (IL-2).

7. Una población de células T CD4+ reguladoras específicas de antígeno de proteína de vector viral que son citotóxicas contra células que presentan dicho antígeno como un epítopo de célula T limitado al MHC de clase II, que puede obtenerse mediante el método de acuerdo con la reivindicación 6.

8. Una población de células T reguladoras específicas de antígeno de proteína de vector viral que son citotóxicas contra células que presentan dicho antígeno como un epítopo de célula T limitado al MHC de clase II de acuerdo con la reivindicación 7 para su uso en la prevención o la supresión, en un receptor de terapia génica o vacunación génica, de una respuesta inmunitaria contra dicha proteína de vector viral.

9. Un péptido inmunogénico aislado que comprende un epítopo de célula T limitado al MHC de clase II de una proteína de vector viral y, directamente adyacente a dicho epítopo de célula T o separado de dicho epítopo de células T mediante un conector de hasta 7 aminoácidos, un motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST] (X)2-C.

1. Un vector viral aislado caracterizado por que comprende al menos una proteína de vector viral que comprende un epítopo de célula T limitado al MHC de clase II y, directamente adyacente a dicho epítopo de célula T o separado de dicho epítopo de célula T mediante un conector de al menos 7 aminoácidos, un motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C.


 

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