Eliminación de respuestas inmunitarias contra vectores virales.

Un péptido inmunogénico aislado que comprende (i) un epítopo de célula T limitado al CMH de clase II de una proteína de un vector viral y (ii) un motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C,

en el que dicho motivo de óxido-reducción está directamente adyacente a dicho epítopo de célula T, o está separado de dicho epítopo de célula T mediante un conector de a lo sumo 7 aminoácidos, para su uso en la prevención o la supresión, en un receptor de terapia génica o de vacunación génica, de una respuesta inmunitaria contra dicha proteína de vector viral.

Eliminación de respuestas inmunitarias contra vectores virales Campo de la invención

La presente invención se refiere a péptidos inmunogénicos y a su uso en la prevención y/o la supresión de respuestas inmunitarias contra vectores virales tal como los que se usan en terapia génica y en vacunación génica.

Antecedentes de la invención

Los virus brindan un gran potencial como fuente de vectores para terapia génica y para vacunación génica. Varios virus se utilizan actualmente para terapia génica, tanto experimental como en el ser humano, incluyendo virus de ARN (gamma retrovirus y lentivirus) y virus de ADN (adenovirus, virus adenoasociados, herpes virus y poxvirus). Varios factores determinan la elección del vector viral, tales como el tiempo durante el cual se requiere la expresión transgénica, la célula diana que debe ser transducida, si la célula diana se está dividiendo o no, el riesgo relacionado con eventos multi insercionales y el riesgo de inducir una respuesta inmunitaria orientada al vector. Para una revisión reciente véase, por ejemplo, Flotte (27), J. Cell. Physiol. 213, 31-35.

La terapia génica está siendo ahora considerada para el tratamiento de un creciente número de enfermedades. Éstas incluyen: (1) trastornos autosómicos recesivos de un solo gen, tales como la fibrosis quística, la hemofilia A y B, la enfermedad granulomatosa crónica, la inmunodeficiencia combinada severa ligada al cromosoma X, y la hiperlipemia familiar; (2) síndromes autosómicos dominantes; (3) muchas formas de cáncer; (4) enfermedades infecciosas; (5) síndromes inflamatorios crónicos y (6) dolor intratable. En el futuro también podrá ser factible la terapia de enfermedades asociadas con múltiples defectos o con mecanismos patogenéticos, tales como la diabetes mellitus.

La vacunación génica se ha desarrollado para hacer frente a la mala protección que confieren las proteínas solubles de diversos patógenos, incluyendo virus tales como el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). Se pensó que la liberación intracelular de antígenos podría dirigir un procesamiento eficaz en el complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) tanto de clase I como de clase II para mejorar la activación de células T CD8+ y CD4+, respectivamente.

La respuesta inmunitaria del hospedador contra proteínas de vectores virales se reconoció pronto como un factor limitante en terapia génica. Las células transducidas con vectores virales generan células T específicas, lo que conduce a inflamación y a lisis celular, anulando de este modo la expresión transgénica. Sekaly (28), J. Exp. Med., 25, 7-12 ha comunicado los resultados de un reciente ensayo de vacunación génica anti VIH utilizando vectores recombinantes de adenovirus que expresaban los genes gag, pal o Net del VIH. Sorprendentemente, se demostró que la presencia de una respuesta inmunitaria preexistente contra las proteínas del vector viral tenía resultados perjudiciales sobre el resultado de la vacunación. De este modo, en ambas situaciones (es decir, ya sea una respuesta inmunitaria preexistente o una respuesta inmunitaria no preexistente) la respuesta inmunitaria contra las proteínas relacionadas con vectores parece ser ominosa.

La respuesta inmunitaria contra adenovirus proporciona uno de los mejores ejemplos de esto, ya que los vectores derivados de adenovirus se utilizan en el contexto tanto en terapia génica como en vacunación génica. El adenovirus es muy inmunogénico en el ser humano y en mamíferos. Tras la inyección, los adenovirus generan una respuesta inmunitaria innata aguda, lo que produce inflamación y citotoxicidad, que es frecuentemente transitoria. Sin embargo, esta respuesta desencadena una respuesta adaptativa que conduce a la activación de células T CD4+ y CDS+. Esto se observa incluso con vectores de los que se han eliminado las proteínas más inmunogénicas.

La respuesta inmunitaria adaptativa contra adenovirus implica varios componentes: anticuerpos específicos, células T CD4+ y CDS+. Las proteínas virales se procesan y presentan por las células presentadoras de antígeno (CPA) del hospedador en forma de péptidos unidos al (CMH) de clase I y II. Por tanto, dicha presentación da como resultado la activación de células T específicas pertenecientes al subtipo CDS+ o CD4+, respectivamente. La función de las células T CDS+ es lisar células que expresan péptidos del CMH de clase I derivados de virus. La función de las células T CD4+ es multifacética: ayudando a las células B a madurar y a transformarse en células formadoras de anticuerpos, ayudando a las células T CDS+ a adquirir una maduración completa y al desarrollo de un ambiente inflamatorio. Como tal, las células T específicas CD4+ juegan un papel importante en la elaboración de una respuesta inmunitaria específica frente a virus.

Hohn H. et al., (1999) J. Immunol. 163, 5715-5722, divulgan en la Tabla VI epítoposde células T de la proteína HPV E7 que contiene una secuencia CxxC.

Él documento US715789 describe un antígeno gripal fusionado a una proteína de estrés, por ejemplo, a PDI. El documento W2/892 describe proteínas de fusión Tiorredoxina-HPV É7.

Sundar et al., (1985) Int. J. Cáncer 35, 351-357, describen Tregs (células T reguladoras) específicas para antígenos virales.

Dobrzynski et al., (26) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 13, 4592-4597, abordan las respuestas inmunitarias contra un vector de transferencia génica en protocolos de terapia génica, y proponen como solución a este problema una primera introducción del transgén en un vector viral adenoasociado, seguido de la introducción de un vector adenoviral. Este

artículo menciona la activación células T CD4+ reguladoras como un mecanismo para el aumento observado en la expresión transgénica.

Fomenko D. (23) Biochem. 42, 11214-11225, divulga que no se puede considerar que todos los motivos C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C actúen como motivos de oxidación-reducción (redox). El motivo CxxC es también característico de algunas proteínas de dedos de cinc y de otras citocinas (citocinas CXCR).

Heemskerk et al., (26) J. Immunol. 177, 8851 -8859, describen clones de célula T CD4(+) específicos de adenovirus que reconocen antígenos endógenos e inhiben la replicación viral in vitro a través de interacciones afines. El epítopo reconocido por estas células T CD4+ citotóxicas se presentan en las moléculas de CMH de clase II.

Carlier et al., (212) PlosOne 7, e45366, caracterizan adicionalmente células como las divulgadas en la presente solicitud y explican que la citotoxicidad se produce a través de una ruta apoptótica independiente de perforina.

Los adenovirus son ubicuos y se han descrito más de 5 serotipos. De este modo, muchos sujetos ya están inmunizados, lo que limita el uso de vectores derivados de dichos virus.

Por consiguiente, en el escenario de la terapia génica así como de la vacunación génica, es muy recomendable encontrar modos para prevenir y/o suprimir respuestas inmunitarias contra proteínas de vectores virales.

Sumario de la invención

La invención, en su más amplio sentido, es como se define en las reivindicaciones independientes.

La presente invención se refiere, en un primer aspecto, a péptidos inmunogénicos aislados, como se detalla en las reivindicaciones, para su uso en la prevención o supresión en un receptor de un vector viral, para terapia génica o vacunación génica, a las respuestas inmunitarias contra dicho vector viral. Más particularmente, la divulgación se refiere al uso de al menos un péptido inmunogénico aislado como se detalla en las reivindicaciones para la elaboración de un medicamento para prevenir o suprimir una respuesta inmunitaria contra un vector viral, en un receptor de dicho vector para terapia génica o vacunación génica.

En un aspecto adicional, la invención se refiere a al menos un péptido inmunogénico aislado, como se detalla en las reivindicaciones, para su uso en la prevención, en un receptor de terapia génica o de vacunación génica, de la activación de células T CD4+ efectoras por una proteína de vector viral.

En un aspecto adicional, la invención también abarca al menos un péptido inmunogénico aislado como se detalla en las reivindicaciones para su uso en la inducción, en un receptor de terapia génica o de vacunación génica, de células T CD4+ reguladoras que sean citotóxicas contra células que presentan una proteína de vector viral.

En un aspecto adicional, la invención también se refiere a al menos un péptido inmunogénico aislado como se detalla en las reivindicaciones para su uso en la prevención, en un receptor de terapia génica o de vacunación génica, de la activación... [Seguir leyendo]

1. Un péptido inmunogénico aislado que comprende (i) un epítopo de célula T limitado al CMH de clase II de una proteína de un vector viral y (ii) un motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C, en el que dicho motivo de óxido-reducción está directamente adyacente a dicho epítopo de célula T, o está separado de dicho epítopo de célula T mediante un conectorde a lo sumo 7 aminoácidos, para su uso en la prevención o la supresión, en un receptor de terapia génica o de vacunación génica, de una respuesta inmunitaria contra dicha proteína de vector viral.

2. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1, para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho vector viral es un adenovirus, un virus adenoasociado, un herpesvirus, un poxvirus, un retrovirus o un lentivirus.

3. El péptido de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho motivo de óxido-reducción C-(X)2- [CST] o [CST]-(X)2-C no se produce de manera natural dentro de una región de 11 aminoácidos en el extremo N- o C-terminal adyacente al epítopo de célula T en dicha proteína de vector viral, o en el que dicho motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C está situado en el extremo N del epítopo de célula T.

4. El péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para el uso de acuerdo con la reivindicación 1 en donde dicho péptido inmunogénico comprende adicionalmente una secuencia de direccionamiento endosómico.

5. El péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 para el uso de acuerdo con la reivindicación 1 en el que al menos una X en dicho motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C es Gly, Ala, Ser o Thr, o en el que al menos una X en dicho motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C es His o Pro, o en el que al menos una C en dicho motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C está metilada.

6. Un método in vitro para obtener una población de células T CD4+ reguladoras específicas de antígeno de proteína de vector viral que son citotóxicas contra células que presentan un epítopo de célula T limitado al MHC de clase II de dicha proteína de vector viral, comprendiendo el método las etapas de:

proporcionar células de sangre periférica;

poner en contacto dichas células in vitro con un péptido inmunogénico que comprende (i) un epítopo de célula T limitado al MHC de clase II de una proteína de vector viral y, directamente adyacente a dicho epítopo de célula T o separado de dicho epítopo de célula T mediante un conector de hasta 7 aminoácidos (ii) un motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C; y

expandir dichas células en presencia de Interleucina 2 (IL-2).

7. Una población de células T CD4+ reguladoras específicas de antígeno de proteína de vector viral que son citotóxicas contra células que presentan dicho antígeno como un epítopo de célula T limitado al MHC de clase II, que puede obtenerse mediante el método de acuerdo con la reivindicación 6.

8. Una población de células T reguladoras específicas de antígeno de proteína de vector viral que son citotóxicas contra células que presentan dicho antígeno como un epítopo de célula T limitado al MHC de clase II de acuerdo con la reivindicación 7 para su uso en la prevención o la supresión, en un receptor de terapia génica o vacunación génica, de una respuesta inmunitaria contra dicha proteína de vector viral.

9. Un péptido inmunogénico aislado que comprende un epítopo de célula T limitado al MHC de clase II de una proteína de vector viral y, directamente adyacente a dicho epítopo de célula T o separado de dicho epítopo de células T mediante un conector de hasta 7 aminoácidos, un motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST] (X)2-C.

1. Un vector viral aislado caracterizado por que comprende al menos una proteína de vector viral que comprende un epítopo de célula T limitado al MHC de clase II y, directamente adyacente a dicho epítopo de célula T o separado de dicho epítopo de célula T mediante un conector de al menos 7 aminoácidos, un motivo de óxido-reducción C-(X)2-[CST] o [CST]-(X)2-C.