INMUNÓGENOS DE VIH-1 DEFICIENTES EN INTEGRASA Y MÉTODOS PARA CARGAR CÉLULAS DENDRÍTICAS CON DICHOS INMUNÓGENOS.

Inmunógenos de VIH-1 deficientes en integrasa y métodos para cargar células dendríticas con dichos inmunógenos.

La presente invención se refiere a un método para obtener una célula dendrítica cargada con antígeno in vitro que comprende poner en contacto una célula dendrítica inmadura con un inmunógeno, preferiblemente un inmunógeno de VIH, y simultáneamente, durante al menos parte de dicho paso, colocar dicha célula dendrítica inmadura en condiciones adecuadas para la maduración que comprenden la incubación de dicha célula dendrítica con un medio que comprende un agente de maduración de células dendríticas seleccionado entre el ligando de TLR4 LPS, y una mezcla de citocinas proinflamatorias seleccionadas entre IL-1β, IL-6 y TNF-α, y la prostaglandina PGE2. La invención se refiere también a inmunógenos de VIH-1 que carecen de una proteína integrasa funcional.

INMUNÓGENOS DE VIH-I DEFICIENTES EN INTEGRASA y MÉTODOS PARA CARGAR CÉLULAS DENDRÍTICAS CON DICHOS INMUNÓGENOS

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a métodos para obtener una célula presentadora de antígeno cargada con antígeno, en particular una célula dendrítica cargada con un inmunógeno de VIH-I. La invención también se refiere a inmunógenos de VIH-I que carecen de una proteína integrasa funcional ya los usos de los mismos.

ESTADO DE LA TÉCNICA

Las células dendríticas (CD) son las células presentadoras de antígeno más potentes en el sistema inmune, que unen la inmunidad innata y adaptativa. Capturan patógenos en la mucosa y después migran al tejido linfoide secundario, donde adquieren el fenotipo maduro requerido para inducir eficazmente respuestas inmunes adaptativas. Después de alcanzar las áreas de células T de los ganglios linfáticos, las CD maduras pueden presentar péptidos derivados de patógenos en asociación con moléculas del sistema de antígeno leucocítico humano (HLA) a células T indiferenciadas. El sistema HLA es el complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) en seres humanos. Este proceso inicia una respuesta inmune celular que implica células auxiliares T CD4+, linfocitos T citotóxicos CD8+ (LTC) y una respuesta inmune humoral con la activación de células B. No obstante, también se ha propuesto que las CD contribuyen a la propagación de VIl-I-I durante la exposición a V1H-1 in vivo. Las CD están entre las primeras células diana que encuentran y son infectadas por V1H-I , ya que son abundantes en los sitios más comunes para la entrada del virus tal corno las mucosas genital y anal. Desde aquí se mueven a los tejidos linfoides donde interaccionan e infectan células T C04+, la diana principal de VIH-I. Véase, Granelli-Piperno A, el al., 1. Virol. 1998; 72:2733-2737.

Varios trabajos han demostrado que tras la maduración, las CD mejoran su eficacia para transmitir VIH-I mediante {ral1s-infección, un proceso donde las CD retienen y transfieren viriones infecciosos sin llegar a infectarse ellas mismas. En general, todas las señales de maduración aumentan los marcadores fenotípicos para moléculas de HLA y coestimuladoras, pero la capacidad funcional de las CO maduras resultantes varía. Por

consiguiente, dependiendo de su estado de maduración cualitativo, las CD son capaces de polarizar varias respuestas de cé lulas T.

La capacidad de CD maduras de transferir VIH también está muy influ ida por los estímulos de maduración y los subconjuntos de CO resultantes. Sin embargo, estudios previos han observado que las CO maduradas con lipopolisacárido (LPS) , tanto CO derivadas de monocitos (COm) como CO mieloides derivadas de sangre, capturan cantidades mayores de VIH-l comparadas con CO derivadas de monocitos inmaduras (COi) o CO mieloides inmaduras. También se ha encontrado que esto se correlaciona con una mayor capacidad para transferir VIH-I a células diana susceptibles.

La maduración con LPS de CO también aumenta la captura de exosomas, vesículas celulares secretadas de origen endocítico con un papel importante en comunicación intercelular. Los exosomas y VIH-I están bioquímicamente relacionados, con similitudes en tamaño, composición, biogénesis y liberación celular. Además, se ha descrito que los exosomas y VIH-I usan una ruta de entrada idéntica en CO maduradas con LPS, colocalizando en el mismo compartimente intracelular C081+. Por tanto, varias líneas de evidencia sugieren que las partículas de VIH-l pueden explotar la ruta de diseminación exosoma-antígeno intrínseca para que CO maduras medien la Iral1s-infección de linfocitos T. También se ha mostrado que los exosomas contribuyen al intercambio de antígeno y activación de células T.

Las CO pueden desempeñar un papel dual en la infección de VIH-I: aumentan la diseminación de VIH-I al tiempo que desencadenan una respuesta adaptativa contra la infección vírica. Aunque está bien documentado que la mayor captura vírica por las CO maduradas con LPS produce una Imns-infección aumentada a cé lulas diana, se sabe poco sobre las capacidades presentadoras de antígeno de este subconjunto de CO.

A pesar de los anterior, existe una necesidad larga y continua en la técnica para inmunógenos de VIH y métodos más eficaces para cargar células dendríticas con inmunógenos, particularmente con inmunógenos de VIH, que pueda apoyar mejor la preparación de vacunas terapéuticas de VIH autólogas más seguras y más eficaces.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

En un primer aspecto, la invención se refiere a un método, de aquí en adelante denominado el "primer método de la invención", para obtener una célula pre sentadora de antígeno cargada con antígeno in vi/ro que comprende poner en contacto una célula dendrítica inmadura con un inmunógeno que comprende dicho antígeno en condiciones adecuadas para el procesamiento del inmunógeno y presentación por la célula presentadora de antígeno. En un segundo aspecto, la invención se refiere a una célula presentadora de ant ígeno cargada con antígeno obtenible por el método según el primer aspecto de la invención.

En aspectos adicionales, la invención se refiere a una célula presentadora de antígeno según la invención para su uso en medicina así como para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad que requiere una respuesta inmune contra el antígeno que está cargado en la célula presentadora de antígeno.

En otro aspecto, la invención se refie re a una composición inmunogénica o una vacuna que comprende una célula presentadora de antígeno según la invención.

En otro aspecto, la invención se refiere a una partícula vírica de VIH-l que carece de una proteína integrasa funcional que contiene una deleción en la proteína integrasa o carece de la proteína integrasa.

En aspectos adicionales, la invención se refiere a un genoma vírico de VIH-I caracterizado por carecer parcial o completamente de la región codificante de integrasa, un vector que comprende el genoma vírico de VIH-I caracterizado por carecer parcial o completamente la región codificante de integrasa o una cé lula que comprende un genoma vírico de VIH-l caracterizado por carecer parcial o completamente de la reg ión codificante de integrasa o un vector que comprende un genoma vírico de VIH-I caracterizado por carecer parcial o completamente de la región cod ificante de integrasa para su uso en medicina así como para su uso en el tratamiento o prevención de una infección por V1H o una enfennedad asociada con una infección por VIH.

En otro aspecto, la invención se refiere a un método (de aquí en adelante denominado "segundo método de la invención") para obtener una célula dendrítica cargada con un inmunógeno de V1H-1 i/1 vitro que comprende cargar una célula dendrítica con una partícula vírica de VTH que carece de una proteína integrasa funciona l.

En otro aspecto, la invención se refiere a una célula dendrítica cargada con una partícula vírica de VIH-I que carece de una proteína integrasa funcional obtenible por el segundo método de la invención.

En otro aspecto, la invención se refiere a una célula dendrítica según la invención para su uso en medicina así como para su uso en el tratamiento o prevención de una infección por VIH o una enfermedad asociada con una infección por V1H.

En otro aspecto, la invención se refiere a una composición inmunogénica O una vacuna que comprende una célula dendrítica según la invención.

DEPÓSITO DE MJCROORGANISMOS

El plásmido pNL4-3Ll.1N (pNL4-3-Delta-lntegrasa) se depositó el 22 de julio, 20 lO, con el número de acceso OSM 23817 en la OSMZ (Colección Alemana de Microorganismos y Cultivos Celulares GmbH) , lnhoffensrraBe 7 8, D-38l24 Braunschweig, República Federal de Alemania.

DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Figura 1. Captura vírica y transmisión vírica de VlHNL4_3 y VIHNL4_3AIN en diferentes condiciones celulares. Panel izquierdo: Protocolo para el ensayo de captura de VIH-l de células dendríticas (CO) completamente maduras que se maduraron con LPS (COm LPS) o con ITIP (CDm ITlP) durante 48 horas antes de la incubación vírica; y para CD inmaduras (CDi) y CDi que se maduraron con LPS (CDi+LPS) o con lTlP (CDi+lTIP) durante la incubación vírica. Panel medio: Captura comparativa de VIHNL4_3 y VIHNL4_3AIN por cada condición celular descrita en el panel izquierdo. La determinación de V1H-1 asociado a CO por ELlSA de p24Gag se realizó después de 6 horas de incubación vírica a 3rc. Panel derecho: Transmisión de V1HNL4_3 y VIH NL4_3AIN capturado por cada condición celular a una línea celular indicadora TZM-bl. Los datos... [Seguir leyendo]

I.Un método para obtener una célula presentadora de antígeno cargada con antígeno in vi/ro que comprende poner en contacto una célula dendrítica inmadura con un inmunógeno que comprende dicho antígeno en condiciones adecuadas para el procesamiento del inmunógeno y presentación por la célula presentadora de antígeno, en donde dicho método comprende además colocar la célula dendrítica inmadura en condiciones adecuadas para la maduración de dicha célula dendrítica inmadura a una célula dendrítica madura en donde el paso de maduración de la célula dendrítica inmadura se lleva a cabo simultáneamente con el paso de poner en contacto la célula dendrítica inmadura con un inmunógeno durante al menos parte de dicho paso de contacto.

2.EI método según la reivindicación I en donde las condiciones adecuadas para la maduración de la célula dendrítica inmadura a una célula dendrítica madura comprende la incubación de dicha célula en un medio que comprende un agente de maduración de células dendríticas seleccionado del grupo que consiste en:

(i) un ligando de TLR4, en donde dicho ligando de TLR4 es LPS y

(ii) una mezcla de citocinas proinflamatorias que comprende una mezcla

de IL-l p, IL-6 Y TNF-a y, además, una prostaglandina.

3. El método según cualquiera de las reivindicaciones I o 2 en donde el inmunógeno es un inmunógeno de VIH.

4. El método según la reivindicación 3 en donde el inmunógeno de VIH es una partícula de V1H.

5. El método según la reivindicación 4 en donde la partícula vírica de VIH-l carece de una proteína integrasa funcional.

6. Una célula presentadora de antígeno cargada con antígeno obtenible por un método según cualquiera de las reivindicaciones l a 5.

7. Una composición inmunogénica o una vacuna que comprende una célula presentadora de antígeno según la reivindicación 6.

8. Uso de una célula presentadora de antígeno según la reivindicación 6 para la preparación de un medicamento

9. Uso de una célula presentadora de antígeno según la reivindicación 6 para la preparación de un medicamento para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad que requiere una respuesta inmune contra el antígeno que está cargado en la célula presentadora de antígeno.

10. Un método según la reivindicación 5 en donde la célula dendrítica que se carga con la partícula vírica de Y1H-I se ha obtenido por maduración de una célula dendrítica inmadura usando un agonista de TLR4, en donde dicho agonista de TLR4 es LPS.

11. Una célula dendrítica cargada con una partícula vírica de VIH-l que carece de una proteína integrasa funcional obtenible por el método según de la reivindicación 10.

12. Una composición inmunogénica o una vacuna que comprende una célula dendrítica según la reivindicación 11 .

13. Uso de una célula dendrítica según la reivindicación 1I para la preparación de un medicamento para su uso en el tratamiento o prevención de una infección por VIH O una enfermedad asociada con una infección por Vll-I.