Fragmentos de PTEC.

Péptido que consiste en 6 a 20 residuos aminoácidos y que deriva de la secuencia de aminoácidos VFKGTLKYGYTTAWWLGIDQSIDFEIDSAI (SEC ID nº 23),

en el que dicho péptido comprende la secuencia de aminoácidos WWLGID (SEC ID nº 24).

Fragmentos de PTEC.

La presente invención se refiere a péptidos que pueden infiuir sobre la actividad /n v/vo de la PTEC.

Las enfermedades asociadas a la ateroesclerosis, tales como las enfermedades cardiovasculares (ECV), así como el ictus y la enfermedad de oclusión arterial periférica, son algunas de las causas principales de muerte en los Estados Unidos, Europa y en grandes zonas de Asia. Respecto al año 1990, la mortalidad por ECV se habrá Incrementado en 90% para 2020.

Se consideran diversos factores de riesgo como responsables de la formación de las lesiones ateroesclerótlcas. Los perfiles de llpoproteínas circulantes, la hipertensión arterial y el abuso de la nicotina son particularmente significativos a este respecto.

En algunos estudios epidemiológicos detallados se ha descubierto una correlación positiva entre el nivel de colesterol en suero y la Incidencia de enfermedad cardiaca coronarla. Los niveles elevados de llpoproteína de baja densldad-colesterol (LCLc) comportan un riesgo cardiovascular elevado y se correlacionan directamente con un riesgo Incrementado de ateroesclerosis. Se utilizan comúnmente las estatlnas, tales como los Inhibidores de la HMG-CoA reductasa, las cuales consiguen reducir los niveles circulantes de LDLc. Sin embargo, a pesar de la reducción de los sucesos coronarlos gracias al tratamiento agresivo con estatlnas, el considerable riesgo cardiovascular residual sigue constituyendo un reto. De esta manera, se necesitan urgentemente nuevos terapéuticos.

Además del nivel de LDL-colesterol, el nivel de la llpoproteína de alta densldad-colesterol (HDLc) vasoprotectora desempeña un papel importante en la estimación del perfil de riesgo de enfermedad cardiovascular. Los estudios epidemiológicos han demostrado una relación inversa entre los niveles de HDLc y la ateroesclerosis. Los niveles de HDLc son factores predlctlvos fuertes Independientes de los valores de LDLc. Por lo tanto se considera que los niveles de HDLc presentan efectos ateroprotectores. Por lo tanto, la elevación de los niveles de HDLc es un objetivo Importante y una diana adicional.

La monoterapla con estatlnas no eleva eficazmente los niveles de HDLc y el tratamiento y la prevención de la ateroesclerosis con este tipo de compuesto farmacológico no resulta suficiente. Las opciones actuales para elevar los niveles de HDLc son los fibratos y la macina. Resulta especialmente eficaz la nìacìna; sin embargo, su uso se encuentra limitado por efectos adversos que llevan a un bajo cumplimiento por parte del paciente. Se requiere urgentemente un método eficaz y seguro para elevar los niveles de HDLc complementarlo a la reducción de LDL con estatlnas. A este respecto la Inhibición de PTEC como monoterapìa o como terapia adyuvante resulta un objetivo atractivo.

La proteina de transferencia de ásteres de colesterol (PTEC) es una glucoproteína plasmática que es responsable de la transferencia de lípldos neutros, Incluyendo el áster de colesterllo y los trlgllcérldos (TG), entre llpoproteínas. Los ásteres de colesterllo procedentes de los HDL ateroprotectores son transferidos a la lipoproteína apollpoproteína (apo) B pro-aterogénlca (LDL y VLDL) en Intercambio por TG. Esto conduce a niveles más bajos de HDL y eleva los niveles de LDL y VLDL.

Se considera que la PTEC, muy probablemente dependiente del nivel basai metabòlico, es una diana terapéutica valiosa para el objetivo de Incrementar el nivel plasmático de HDL.

Muchas especies no presentan PTEC. En especies con susceptibilidad a la ateroesclerosis, tales como el conejo y el ser humano, la actividad de la PTEC es elevada. Otras especies que son resistentes a la aterosclerosls no poseen PTEC y presentan niveles elevados de HDLc.

En experimentos animales con conejos y hámsters, la Inhibición transitoria de PTEC con anticuerpos monoclonales antl-PTEC, ollgonucleótldos antlsentldo o Inhibidores de PTEC ha conducido a un Incremento de los niveles de HLD.

Se han descrito varias clases de Inhibidores de PTEC, algunos de los cuales ya se encuentran en ensayo clínico avanzado (por ejemplo el dalcetraplb (Stein E.A, Eur. Heart J. 31(4):480-8, 2010), el anacetraplb (Cannon C.P., N. Engl. J. Med. 363(25):2406-15, 2010) y el torcetrapib (Nissen S E., N. Engl. J. Med. 356(13):1304-16, 2007)).

En la patente US n° 5.512.548 y en el documento WO 93/011782, se han descrito pollpéptldos y análogos de los mismos que pueden Inhibir la PTEC, que cataliza la transferencia de ásteres de colesterol de HDL a VLDL y LDL y, por lo tanto, presentan actividad antl-ateroesclerótlca en caso de administrarse en un paciente. Según dichos documentos, dicho Inhibidor de pollpéptldo PTEC deriva de apoC-l de diverso origen, en el que especialmente los fragmentos N-termlnales hasta el aminoácido n° 36 han sido Identificados como Inhibidores de la PTEC.

También en el documento US 5.880.095 A, se da a conocer un péptldo de unión a PTEC que es capaz de Inhibir la

actividad de PTEC en un individuo. La proteína inhibidora de PTEC comprende un fragmento N-terminal de apoC-lll porcino.

En los documentos US 2006/0276400 y WO 96/034888 se dan a conocer péptidos que se derivan de PTEC y que comprenden epítopos de células T y/o de células B. Estos péptidos son capaces de inducir /n v/vo la formación de anticuerpos específicos de PTEC.

En los documentos US 2004/0087481 y US n° 6.410.022 B1, se dan a conocer péptidos que, debido a la inducción de una respuesta ¡nmunitaria específica de PTEC, pueden utilizarse para el tratamiento y la prevención de enfermedades cardiovasculares, tales como, por ejemplo, la ateroesclerosis. Estos péptidos comprenden un epítopo de células T ayudantes que no deriva de PTEC y por lo menos un epítopo de células B que procede de PTEC y puede derivar directamente de ésta última. El epítopo de las células T ayudantes deriva ventajosamente del toxoide tetánico y se une covalentemente a por lo menos un epítopo de células B de la PTEC. Mediante la utilización de un epítopo de las células T ayudantes que es extraño al organismo, resulta posible inducir anticuerpos en el cuerpo de un individuo que están dirigidos contra aquella parte peptídica que consiste en por lo menos un epítopo de célula B de PTEC.

En el documento WO 2006/029982 se describen mimótopos de PTEC que deben utilizarse para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento o a la prevención de la aterosclerosis.

Ya se han realizado propuestas para un enfoque de vacuna para la PTEC. Se han tratado conejos con una vacuna que contiene un péptido derivado del extremo C de la PTEC como antígeno. Los conejos inmunizados presentaban una actividad de PTEC reducida y niveles de lipoproteínas alterados con valores incrementados de HDL y reducidos de LDL. Además, los animales de ensayo tratados del modelo de ateroesclerosis también mostraron lesiones ateroscleróticas reducidas en comparación con los animales de control (Rittershaus C.W., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 20:2106-12, 2000).

Los resultados de un estudio clínico de fase II con la vacuna CETi-1, llevado a cabo por la compañía biotecnología americana Avant, han sido publicados (BioCentury Extra del miércoles, 22 de octubre de 2003). En este estudio de fase II, tal como en el estudio precedente de fase I, se demostró un perfil de seguridad muy bueno sin ningún efecto secundario cuestionable, permitiendo extraer la conclusión de que no se esperan efectos secundarios de un enfoque de vacunación con anti-PTEC. Sin embargo, con respecto a la eficacia, la vacuna de Avant resultó decepcionante, ya que no condujo a niveles incrementados de HDL significativamente superiores a los alcanzados con un tratamiento de placebo.

Un objetivo de la presente invención consiste en proporcionar unos medios y procedimientos para reducir la actividad de la PTEC en un individuo.

La presente invención se refiere a un péptido que consiste en 6 a 20 residuos aminoácidos y que deriva de la secuencia de aminoácidos VFKGTLKYGYTTAWWLGIDQSIDFEIDSAI (SEC ID n° 23), en el que dicho péptido comprende la secuencia de aminoácidos WWLGID (SEC ID n° 24).

Inesperadamente ha resultado que los péptidos que comprenden la secuencia de aminoácidos WWLGID son capaces de inducir en un mamífero, en particular en el ratón, anticuerpos dirigidos contra PTEC. Estos anticuerpos son capaces de unirse a la PTEC y además reducen la actividad de dicha proteína. Es bien conocido que en mamíferos con actividad de PTEC, la reducción de esta actividad mediante, por ejemplo, vacunación (Thomas ef a/., Human Vaccines 5:79-84, 2009) o inhibidores de molécula pequeña (Luscher ef a/., Eur. Heart J. 33:857-865, 2012; Krauss ef a/., J. Lipid Res. 53:540-547,... [Seguir leyendo]

1. Péptido que consiste en 6 a 20 residuos aminoácidos y que deriva de la secuencia de aminoácidos VFKGTLKYGYTTAWWLGIDQSIDFEIDSAI (SEC ID n° 23), en el que dicho péptido comprende la secuencia de aminoácidos VVWLGID (SEC ID n° 24).

2. Péptido según la reivindicación 1, caracterizado por que la secuencia de aminoácidos del péptido se selecciona de entre el grupo que consiste en YTTAWWLGIDQS (SEC ID n° 1), YGYTTAWWLGIDQSID (SEC ID n° 7), TTAWWLGIDQS (SEC ID n° 8), TAVWVLGIDQS (SEC ID n° 9), AWWLGIDQS (SEC ID n° 10), WWLGIDQS (SEC ID n° 11), YTTAWWLGIDQ (SEC ID n° 13), YTTAWWLGID (SEC ID n° 14), TTAVWVLGIDQ (SEC ID n° 18) y TTAWWLGID (SEC ID n° 19).

3. Péptido según la reivindicación 1 o 2, caracterizado por que el péptido comprende en su extremo C y/o N un residuo de cisteína.

4. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 destinado a ser utilizado para prevenir y/o tratar la ateroesclerosis y las enfermedades asociadas a la aterosclerosis.

5. Péptido según la reivindicación 4, caracterizado por que la enfermedad asociada a la ateroesclerosis se selecciona de entre el grupo que consiste en enfermedad oclusiva arterial periférica, enfermedad cardiaca coronaria, traumatismo cerebral e ictus apoplécticos.

6. Péptido según la reivindicación 4 o 5, caracterizado por que el péptido se administra a un individuo en una cantidad de 0,5 a 500 pg, preferentemente 1 a 100 pg, por inmunización.

7. Vacuna que comprende por lo menos un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

8. Vacuna según la reivindicación 7, caracterizada por que por lo menos un péptido se acopla a o se fusiona con un vehículo farmacéuticamente aceptable, preferentemente KLH (hemocianina de lapa californiana).

9. Vacuna según la reivindicación 7 u 8, caracterizada por que por lo menos un péptido se formula para la

administración intradèrmica, subcutánea o intramuscular.

10. Vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, caracterizada por que por lo menos un péptido se formula con un adyuvante, preferentemente hidróxido de aluminio.

11. Vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, caracterizada por que la vacuna comprende dicho por lo menos un péptido en una cantidad de 0,5 a 500 pg, preferentemente 1 a 100 pg, por inmunización.

12. Vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 11 destinada a ser utilizada para prevenir y/o tratar la ateroesclerosis y enfermedades asociadas a la ateroesclerosis.

13. Vacuna según la reivindicación 12, caracterizada por que la enfermedad asociada a la ateroesclerosis se selecciona de entre el grupo que consiste en enfermedad oclusiva arterial periférica, enfermedad cardiaca coronaria, traumatismo cerebral e ictus apoplécticos.

14. Anticuerpo que se une a un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

15. Anticuerpo según la reivindicación 14, caracterizado por que el anticuerpo comprende una región variable de

cadena pesada ("VH") y una región variable de cadena ligera ("VL") de anticuerpo, comprendiendo cada región unas regiones determinantes de complementariedad, en el que las regiones determinantes de complementariedad de la región VH presentan una o más de las secuencias de aminoácidos NVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGHSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYITNSGSTTYNPSLKSRISITRDTSKNQ FFLQLNSVTTEDTATYYCTRGGPYWGQGTLVTVSA (SEC ID n° 104),

EVQLVESGGGLVEPGGSLKLSCVASGFTFSTYAMSWFRLTPERRLEVWAAISNGGSQNSYPDSVKGRFTVSRDNAK NTLYLQMSSLRSEDTAMYYCSRNGNYFDYWGQCTTLTVSS (SEC ID n° 105),

DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYISYSGTTTYNPSLKSRISITRHTSKNQ FFLQLNSVTTEDSATYYCTRLGYYFDYWGQGTTLTVSS (SEC ID n° 106) o

QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDCSMHVWKQAPGQGLKWMGWINTKTGEPTYADDFKGRFAFSLETSA STAYLQINILKNEDSATYFCAAHSGKDYAIDYWGQGTSVTVSS (SEC ID n° 107) y la región VL presenta una o más de las secuencias de aminoácidos

DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSITCKASQNVGTAVVWYQQKPGQSPKLLIYSASNRYTGVPDRFTGSGSGTDFTLTITN MQSEDLADYFCQQYSSYPLTFGAGTKLELK (SEC ID n° 108),

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSISYMHWYQQKPGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSME AEDAATYYCHQRSSYPTFGSGTKLEIK (SEC ID n° 109),

DIVMTQSPASLAMSVGQKVTMNCKSSQSLLSSKNQKNFLAWYQQKPGQSPKVLVYFASTRASGVPDRFIGSGSGTD

FTLTISSVQAEDLADYFCQQQYNTPLTFGAGTKLELK (SEC ID n° 110) o

DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHRNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTL RISRVEAQDLGVYFCFQGSRVPPTFGGGTKLEIK (SEC ID n° 111).