Factor de viabilidad neuronal y uso del mismo.

Un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID Nº 4.

Factor de viabilidad neuronal y uso del mismo Sector de la técnica

La presente invención se refiere a métodos y composiciones para la detección y tratamiento de enfermedades neurodegenerativas. En particular, la invención se refiere a polipéptidos que pueden proteger frente a la degeneración neuronal, a moléculas de ácido nucleico que codifican dichos polipéptidos y a anticuerpos que reconocen dichos polipéptidos.

Estado de la técnica

La expresión "trastorno neurodegenerativo" abarca una serie de afecciones gravemente debilitantes que se caracterizan por degeneración neuronal.

Como ejemplo de dicho trastorno neurodegenerativo, la retinitis pigmentosa (RP) es una degeneración de la retina genéticamente heterogénea caracterizada por la degeneración secuencial de una población de neuronas que corresponden a los fotorreceptores de los conos y los bastones.

Los fotorreceptores son una subserie especializada de neuronas de la retina que son responsables de la visión. Los fotorreceptores consisten en bastones y conos que son las células fotosensibles de la retina. Cada bastón y cono elabora un cilio especializado, denominado segmento externo, que alberga la maquinaria de la fototransducción. Los batanes contienen un pigmento visual absorbente de luz específico, la rodopsina. Hay tres clases de conos en los seres humanos, caracterizados por la expresión de distintos pigmentos visuales: los pigmentos de los conos azules, de los conos verdes y de los conos rojos. Cada tipo de proteína de pigmento visual está adaptado para absorber luz de forma máxima a diferentes longitudes de onda. La rodopsina de los bastones media la visión escotópica (en luz débil), mientras que los pigmentos de los conos son responsables de la visión fotópica (en luz brillante). Los pigmentos rojos, azules y verdes también constituyen la base de la visión de los colores en los seres humanos. Los pigmentos visuales presentes en los bastones y en los conos responden a la luz y generan un potencial de acción en las células de salida, las neuronas bipolares de los bastones, que después se transmite por las neuronas ganglionares de la retina para producir un estímulo visual en la corteza visual.

En los seres humanos, varias enfermedades de la retina implican una degeneración progresiva y finalmente la muerte de los fotorreceptores, que conduce inexorablemente a la ceguera. La degeneración de los fotorreceptores, tal como la producida por distrofias hereditarias de la retina (por ejemplo, trastornos degenerativos de la retina), degeneración macular relacionada con la edad y otras maculopatías, o desprendimiento de retina, se caracteriza por una atrofia progresiva y pérdida de función de los segmentos externos de los fotorreceptores. Además, la muerte de los fotorreceptores o la pérdida de la función de los fotorreceptores dan como resultado una diferenciación parcial de neuronas retinianas de segundo orden (células bipolares de los bastones y células horizontales) en pacientes con distrofias de la retina, reduciéndose de esta manera la eficacia global de la propagación de la señal eléctrica generada por los fotorreceptores. Los cambios secundarios en el epitelio pigmentado y en la glía ocasionados por la degeneración de los fotorreceptores producen cambios vasculares que conducen a isquemia y gliosis.

Los factores tróficos que son capaces de rescatar a los fotorreceptores de la muerte celular y/o de restaurar la función de los fotorreceptores disfuncionales (atróficos o distróficos) pueden representar terapias útiles para el tratamiento de dichas afecciones. Por ejemplo, el documento WO02Ó81513 ha descrito el uso de los factores de viabilidad de conos derivado de bastones 1 y 2 (RdCVFI y RdCVF2) para el tratamiento de trastornos degenerativos de la retina. El gen RdCVF, también denominado tioredoxina de tipo 6 (Txnl6) y, más recientemente, Nucleoredoxina (NxnH), codifica la proteína Q8VC33 UniProt, que tiene una similitud limitada con la superfamilia de la tioredoxina y que ejerce actividad trófica sobre los fotorreceptores de los conos (LEVEILLARD et al., Nat. Genet. vol. 36(7), p:755- 759, 2004).

Sin embargo, existe la necesidad de identificar factores tróficos de neuronas, en particular fotorreceptores de conos que refuercen el tratamiento y el diagnóstico de trastornos degenerativos, en particular trastornos degenerativos de la retina.

Objeto de la invención

Los inventores han identificado ahora una nueva isoforma del polipéptido RdCVF2 (denominado "RdCVF2v") descrito en la solicitud de patente internacional W002081513.

La presente invención se refiere a un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID N° 4.

La presente invención también se refiere a una molécula de ácido nucleico aislada que codifica dicho polipéptido.

La presente invención también se refiere al tratamiento de un trastorno neurodegenerativo.

Descripción detallada de la invención

Definiciones

Como se usa en el presente documento, el término "RdCVF2" se refiere a cualquier isoforma del factor de viabilidad de conos derivado de bastones 2.

Como se usa en el presente documento, el término "RdCVF2v" se refiere a un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID N° 4.

(MVDVLGGRRLVTREGTVVEAEVALQNQVVALYFAAGRCSPSRDFTPLLCDFYTEL

VSEARRPAPFEVVFVSADGSAEEMLDFMRELHGSWLALPFHDPYRQSQCGPIPPN

LGFSIHGAPVCQRFLPFTIGVSGIHMSQEPQDCELKKRYEITAIPKLVVIKQNGAVITN

KGRKQIRERGLACFQNWVEAADVFQNFSG)

La SEC ID N° 4 consiste en las siguientes secuencias, desde el extremo N al extremo C:

- la secuencia de aminoácidos que es común tanto para la isoforma larga como para la isoforma corta de RdCVF2 como se describe en el documento W002081513:

MVDVLGGRRLVTREGTVVEAEVALQNKVVALYFAAGRCSPSRDFTPL LCDFYTELVSEARRPAPFEVVFVSADGSAEEMLDFMRELHGSWLALP FHDPYR (SEC ID N° 1);

- una secuencia de aminoácidos que es única para esta isoforma variante:

QSQCGPIPPNLGFSIHGAPVCQRFLPFTIGVSGIHMSQEPQDC (SEC ID N° 2)

- la secuencia de aminoácidos que está presente es la isoforma larga pero no la isoforma corta de RdCVF2:

ELKKRYEITAIPKLVVIKQNGAVITNKGRKQIRERGLACFQNWVEAADV FQNFSG (SEC ID N° 3).

Se desvela un polipéptido que comprende:

a) la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID N° 1 o una variante de la misma, donde dicha variante tiene al menos una identidad del 90 % con la SEC ID N° 1 y

b) la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID N° 2 o una variante de la misma, donde dicha variante tiene al menos un 90 % de identidad con la SEC ID N° 2 y

c) la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID N° 3 o una variante de la misma, donde dicha variante tiene al menos un 90 % de identidad con la SEC ID N° 3

o un fragmento del mismo, donde dicho fragmento comprende la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID N° 2 o una variante de la misma que tiene al menos un 90 % de identidad con la SEC ID N° 2 y donde dicho fragmento de la misma presenta actividad de rescate de neuronas.

Como se usa en el presente documento, la expresión "polipéptido de la invención" se refiere a un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID N° 4.

Como se usa en el presente documento, la expresión "compuesto que se une selectivamente a un polipéptido de la invención" se refiere a un compuesto, tal como un anticuerpo o un aptámero, que se une a un polipéptido de la invención pero no a las otras isoformas de RdCVF. En otros términos, un compuesto que se une selectivamente a un polipéptido de la invención se une, al menos en parte, a la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID N° 2 o variante de la misma.

Como se usa en el presente documento, la expresión "molécula de ácido nucleico de la invención" se refiere a una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido de la invención.

Como se usa en el presente documento, la expresión "variante alélica" se refiere a una secuencia de nucleótidos que existe en un locus dado o a un polipéptido codificado por la secuencia de nucleótidos. Como se usan en el presente documento, las expresiones "gen" y "gen recombinante" se refieren a moléculas de ácido nucleico que comprenden una fase de lectura abierta que codifica un polipéptido de la invención.

Como se usa en el presente documento, la expresión "híbrida en condiciones rigurosas" pretende describir

condiciones para hibridación y lavado en las cuales típicamente se mantienen hibridadas entre sí secuencias de nucleótldos con al menos un 60 % (65 %, 70 %, preferentemente 75 %) de identidad. Dichas condiciones rigurosas se conocen por expertos... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID N° 4.

2. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 1, donde dicho polipéptido tiene una longitud no mayor de 250 aminoácidos.

3. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, que consiste en la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N° 4.

4. Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica un polipéptido como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

5. La molécula de ácido nucleico aislada de acuerdo con la reivindicación 4, donde dicha molécula de ácido nucleico tiene la secuencia de nucleótidos indicada en la SEC ID N° 5.

6. Un anticuerpo que se une selectivamente a un polipéptido como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde dicho anticuerpo reconoce un epítopo dentro de la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID N°2.

7. Un método para detectar la presencia de una molécula de ácido nucleico como se define en la reivindicación 4 o 5 en una muestra, que comprende las etapas de:

a) poner en contacto la muestra con una sonda o cebador de ácido nucleico que híbrida selectivamente con una molécula de ácido nucleico que codifica la SEC ID N° 2; y

b) determinar si la sonda de ácido nucleico o cebador se une a dicha molécula de ácido nucleico en la muestra.

8. El polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o molécula de ácido nucleico aislada de acuerdo con la reivindicación 4 o 5 para su uso en el tratamiento de una enfermedad degenerativa.

9. Una composición para su uso en el tratamiento de un trastorno neurodegenerativo, que comprende:

a) un polipéptido como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o una molécula de ácido nucleico aislada como se define en la reivindicación 4 o 5 y

b) un factor de viabilidad de conos derivado de bastones seleccionado del grupo que consiste en el factor de viabilidad de conos derivado de bastones 1 (RdCVFI) y el factor de viabilidad de conos derivado de bastones 2 (RdCVF2).

10. El polipéptido o la molécula de ácido nucleico aislada para su uso de acuerdo con la reivindicación 8, o la composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 9, donde dicho trastorno neurodegenerativo es un trastorno degenerativo de la retina.

11. El polipéptido o la molécula de ácido nucleico aislada para su uso de acuerdo con la reivindicación 8, o la composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 9, donde dicha enfermedad degenerativa de la retina es retinitis pigmentosa.