Epítopos de IL-17A e IL-17F y sus anticuerpos específicos.

Un anticuerpo neutralizante que se une a IL-17A humana y a IL-17F humana que se une a un epítopo de la IL-17A humana que comprende SER41,

TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54, ARG72, HIS73, ASP84, HIS86, VAL128, HIS129 y VAL131 de la SEQ ID NO: 21, donde el anticuerpo no es un anticuerpo que comprende la secuencia dada en la SEQ ID NO: 1 para la CDR-H1, la secuencia dada en la SEQ ID NO: 2 para la CDR-H2, la secuencia dada en la SEQ ID NO: 3 para la CDR-H3, la secuencia dada en la SEQ ID NO: 4 para la CDR-L1, la secuencia dada en la SEQ ID NO: 5 para la CDR-L2 y la secuencia dada en la SEQ ID NO: 6 para la CDR-L3, donde las SEQ ID NOs se muestran en la Figura 1.

Epítopos de IL-17A e IL-17F y sus anticuerpos específicos La presente invención se refiere a epítopos neutralizantes de IL-17A e IL-17F y a anticuerpos que se unen a dichos epítopos. La presente invención también se refiere a los usos terapéuticos de las moléculas de anticuerpo y a los métodos para producirlas.

La interleucina 17 (IL-17) , también conocida como CTLA-8 ó IL-17A, es una citocina pro-inflamatoria que estimula la secreción de un amplio rango de otras citocinas procedentes de diversas células no inmunes. La IL-17A es capaz de inducir la secreción de IL-6, IL-8, PGE2, MCP-1 y G-CSF por células adherentes como los fibroblastos, la queratinocitos, células epiteliales y endoteliales y también es capaz de inducir la expresión superficial de ICAM-1, la proliferación de células T y el crecimiento y la diferenciación de progenitores humanos de CD34+ en neutrófilos cuando se co-cultivan en presencia de fibroblastos irradiados (Fossiez et al., 1998, Int. Rev. Immunol. 16, 541-551) . La IL-17A se produce predominantemente en células T activadas por memoria a través de la unión a un receptor superficial distribuido uniformemente (IL-17R) (Yao et al., 1997, Cytokine, 9, 794-800) . También puede actuar a través de la unión a un complejo de IL-17RA y IL-17RC (Toy et al., 2006, J. Immunol. 177 (11) : 36-39) . Las células productoras de IL-17 denominadas 'células TH17' han sido implicadas en la patogénesis de determinados cánceres (Weaver et al., 2006, Immunity, 24, 677-688; Langowski et al., 2006, 442, 461-465; Iwakura e Ishigame, 2006, J. Clin. Invest. 116, 5, 1218-1222) .

Se han identificado una serie de homólogos de IL-17 que presentan papeles tanto similares como distintos en la regulación de respuestas inflamatorias. Para una revisión de las familias de citocina IL-17/receptor véase Dumont, 2003, Expert Opin. Ther. Patents, 13, 287-303. Uno de dichos homólogos es el IL-17F, también denominado IL-24 y ML-1, que es idéntico en aproximadamente un 55% a la IL-17A y se cree que comparten los mismos receptores que la IL-17A (Kolls y Linden 2004, Immunity, 21, 467-476; Hymowitz, et al., 2001, EMBO J. 20 (19) , 5332-5341; Kuestner et al., 2007, Journal of Immunology, 179, 5462-5473) .

Tanto la IL-17A como la IL-17F pueden formar proteínas homodiméricas y heterodiméricas, todas las cuales pueden ser activadas por células T CD4+ humanas (Wright et al., 2007, J Biol Chem. 282 (18) , 13447-13455) .

La IL-17 puede contribuir a una serie de enfermedades mediadas por respuestas inmunes anormales, tal como la artritis reumatoide y la inflamación de las vías aéreas, así como el rechazo a trasplante de órganos y la inmunidad antitumoral. Los inhibidores de actividad de IL-17 son bien conocidos en la técnica, por ejemplo, una proteína de fusión de ratón de IL-17R:Fc humana, una IL-17R soluble de ratón y un anticuerpo monoclonal anti-IL-17, han sido usados para demostrar la función de la IL-17 en varios modelos de artritis reumatoide (Lubberts et al., J. Immunol. 2001, 167, 1004-1013; Chabaud et al., Arthritis Res. 2001, 3, 168-177) . Adicionalmente, se han usado anticuerpos policlonales neutralizantes para reducir la formación de adhesión peritoneal (Chung et al., 2002, J. Exp. Med., 195, 1471-1478) . Anticuerpos de IL-17A anti-humanos derivados de rata se describieron en el documento WO04/106377. Un anticuerpo anti-IL-17A humanizado con una afinidad de aproximadamente 220 pM se describió en el documento WO2006/054059. Un anticuerpo monoclonal anti-IL-17A completamente humano con una afinidad de aproximadamente 188 pM se describió en el documento WO2006/013107.

La solicitud internacional de patente WO2008/001063 describe un anticuerpo anti-IL-17A neutralizante de alta afinidad, el CA048_497. Otros anticuerpos neutralizantes que se unen a IL-17A han sido descritos en WO2007/070750 y WO2007/149032.

Los anticuerpos que se unen a IL-17F y a heterodímeros IL-17A/IL-17F se describieron en el documento WO2006/088833. Los anticuerpos que se unen específicamente al heterodímero IL-17A/IL-17F se describieron en el documento WO2005/010044.

El antagonismo de IL-17F ha sido asociado a la protección frente al asma (Kawaguchi et al., 2006, J.Allergy Clin. Immunol. 117 (4) : 795-801) y también se cree que la IL-17F desempeña un papel en la patología de la artritis (Lubberts 2003, Current Opinion in Investigational Drugs, 4 (5) , 572-577) .

Por consiguiente, los antagonistas duales de IL-17A e IL-17F pueden ser más efectivos que un único antagonista para tratar enfermedades mediadas por IL-17. Los anticuerpos que se unen a IL-17A e IL-17F se describieron en el documento WO2007/106769. La solicitud internacional de patente WO2008047134 (fecha de presentación internacional, 18 de octubre de 2007) describe un anticuerpo de alta afinidad, el CA048_496 que se une a IL-17A, IL17F y al heterodímero IL-17A/F humanos, cuya secuencia se proporciona en la presente memoria más adelante.

La presente invención proporciona nuevos epítopos neutralizantes en la IL-17A y la IL-17F, y anticuerpos que se unen a dichos epítopos, y/o interaccionan con ellos.

En una realización, la presente invención proporciona un epítopo neutralizante de la IL-17A que comprende o que consiste en uno o más de los residuos seleccionados del grupo que consiste en SER41, TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54, ARG72, HIS73, ASP84, HIS86, VAL128, HIS129 y VAL131 de la IL-17A humana (SEQ ID NO: 21) .

En una realización, el epítopo neutralizante proporcionado por la presente invención no comprende uno o más de los residuos de aminoácido seleccionados del grupo que consiste en ASP80, GLY81 y ASN82 de la IL-17A humana (SEQ ID NO: 21) .

La presente invención también proporciona un nuevo epítopo neutralizante de la IL-17F humana (SEQ ID NO: 22) que comprende o que consiste en los residuos: SER39, MET40, SER41, ARG42, ARG47, ASN53, ARG73, ASN74, LEU75, LYS83, GLU84, ASP85, ILE86, SER87, MET88, ASN89, VAL91, PRO92, GLN94, THR126, PRO127, VAL128.

La presente invención también proporciona un nuevo epítopo neutralizante de la IL-17F humana (SEQ ID NO: 22) que comprende o consiste en los siguientes residuos: SER39, MET40, SER41, ARG42, ARG47, ASN53, CYS72, ARG73, ASN74, LEU75, LYS83, GLU84, ASP85, ILE86, SER87, MET88, ASN89, SER90, VAL91, PRO92, GLN94, THR119, CYS122, VAL125, THR126, PRO127, VAL128.

En una realización, el epítopo neutralizante de la IL-17F humana (SEQ ID NO: 22) comprende además o consiste además en uno o más, por ejemplo, tres o cuatro, de los siguientes residuos: GLN71, CYS72, ILE86, ASN89, SER90 y VAL128, por ejemplo, de una primera cadena en un dímero de IL17f.

En una realización, el epítopo neutralizante de la IL-17F humana (SEQ ID NO: 22) comprende además o consiste además en un único resido: ARG47 por ejemplo de una segunda cadena en un dímero de IL17f.

En una realización, el epítopo neutralizante de la IL-17F humana (SEQ ID NO: 22) comprende además o consiste además en uno o más, por ejemplo, tres o cuatro, de los siguientes residuos: ARG37, SER39, SER41 y ARG47 por ejemplo a partir de una segunda cadena en un dímero de IL17f.

En una realización, el epítopo neutralizante de la IL-17F humana (SEQ ID NO: 22) comprende además o consiste además en uno o más, por ejemplo, tres o cuatro de los siguientes residuos: ASN33, GLN36, ARG37, SER39, SER41, ARG42, ILE44 y ARG47 por ejemplo a partir de una segunda cadena en un dímero de IL17f.

En una realización, el epítopo neutralizante de la IL-17F comprende además uno o más de los siguientes residuos: ILE129, HIS130, H131, V132, Q133.

En una realización se proporciona uno o más epítopos neutralizantes de IL-17F humana (SEQ ID NO: 22) que comprenden o constan cada uno de forma independiente de los aminoácidos V33 a V38, ambos inclusive, y/o del V87 al Q94, ambos inclusive.

En una realización el epítopo se define como los residuos de aminoácido localizados a 4 Ǻ, 3, 5 Ǻ ó 3, 0 Ǻ de una entidad de unión, tal como un anticuerpo o fragmento.

También se proporcionan fragmentos de epítopo de IL-17A que pueden usarse, si se requiere, como inmunógenos para obtener anticuerpos neutralizantes que se unen al epítopo neutralizante de la IL-17A. Por ejemplo, los fragmentos de epítopo que comprenden uno o más de los residuos de aminoácido de IL-17A proporcionados antes en la presente memoria, pueden usarse como inmunógeno.

También se proporcionan fragmentos de epítopo de IL-17F que pueden usarse, si se requiere, como inmunógenos para obtener anticuerpos neutralizantes que se unen al epítopo neutralizante de la IL-17F. Por ejemplo, los fragmentos de epítopo que comprenden uno o más de los residuos de aminoácido de IL-17F... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo neutralizante que se une a IL-17A humana y a IL-17F humana que se une a un epítopo de la IL-17A humana que comprende SER41, TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54, ARG72, HIS73, ASP84, HIS86, VAL128, HIS129 y VAL131 de la SEQ ID NO: 21, donde el anticuerpo no es un anticuerpo que comprende la secuencia dada en la SEQ ID NO: 1 para la CDR-H1, la secuencia dada en la SEQ ID NO: 2 para la CDR-H2, la secuencia dada en la SEQ ID NO: 3 para la CDR-H3, la secuencia dada en la SEQ ID NO: 4 para la CDR-L1, la secuencia dada en la SEQ ID NO: 5 para la CDR-L2 y la secuencia dada en la SEQ ID NO: 6 para la CDR-L3, donde las SEQ ID NOs se muestran en la Figura 1.

2, Un anticuerpo neutralizante según la reivindicación 1, que se une a un epítopo de IL-17F humana que comprende uno o más residuos seleccionados del grupo que consiste en SER39, MET40, SER41, ARG42, ARG47, ASN53, ARG73, ASN74, LEU75, LYS83, GLU84, ASP85, ILE86, SER87, MET88, ASN89, VAL91, PRO92, GLN94, THR126, PRO127 y VAL128 de la SEQ ID NO: 22.

3. Un anticuerpo neutralizante según la reivindicación 1 ó la reivindicación 2, que se une a IL-17A humana, a IL-17F humana y al heterodímero IL-17A/F humano.

4. Un anticuerpo neutralizante según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que tiene una afinidad de unión por IL-17A mejor que 500 pM.

5. Un anticuerpo neutralizante según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune o cáncer.

6. Un anticuerpo neutralizante para uso según la reivindicación 5, donde la enfermedad inflamatoria es artritis 20 reumatoide.