Diagnóstico de cáncer de mama.

Procedimiento de diágnostico de cáncer o para predecir el desarrollo de un cáncer en un paciente,

en el que dicho cáncer es cáncer de mama, que comprende determinar la actividad de RANKL y la cantidad del ligando de RANKL, la osteoprotegerina (OPG), en una muestra de dicho paciente.

Diagnóstico de cáncer de mama

La presente invención se refiere al campo del diagnóstico de cáncer de mama.

El cáncer de mama es uno de los cánceres más comunes en seres humanos y afectará de media a una de cada ocho mujeres a lo largo de su vida en los Estados Unidos y en Europa. La Women's Health Initiative (WHI) y Million Woman Study han mostrado que la terapia de reemplazo hormonal (TRH) está asociada con un aumento del riesgo de la frecuencia y mortalidad del cáncer de mama. En particular, los derivados sintéticos de la progesterona (progestinas) tales como el acetato de medroxiprogesterona (MPA), usado por millones de mujeres para la TRH y en anticonceptivos, aumenta notablemente el riesgo de desarrollar cáncer de mama.

El activador del receptor del ligando NF-kB (RANKL, también conocido como ODF, TRANCE, OPGL, TNFSF11) y de su receptor RANK (TRANCE-R, TNFRSF11A), son esenciales para el desarrollo y la activación de osteoclastos. La inhibición de RANKL está a punto aprobarse posiblemente para millones de pacientes para la prevención de la pérdida ósea. RANK y RANKL se han clonado y caracterizado (documentos US 6.17.729, EP 873 998, EP 911 342, US 5.843.678, WO 98/46751, WO 98/5421). Tanto la expresión de RANKL como la de RANK se han observado en cánceres de mama primarios en seres humanos y en líneas celulares de cáncer de mama y se ha propuesto que el sistema RANKL/RANK puede regular la metástasis ósea de tumores epiteliales14 sin un efecto sobre la proliferación o susceptibilidad a la muerte.

Terpos y col., Blood 12 (3) (23): 164-169, describen marcadores para el pronóstico del desarrollo del mieloma múltiple, un cáncer que causa lesiones óseas e interfiere con la producción de células sanguíneas en la médula ósea.

Hashimoto y col., Cáncer & Chemotherapy 7 (31) (24): 127-133 (resumen), mencionan que los marcadores metabólicos óseos, incluyendo RANKL y OPG solubles, reflejan actividad osteoclástica y osteoblástica, proporcionando información sobre la gravedad y el pronóstico de las enfermedades óseas.

El documento WO 25/6627 A2 se refiere a procedimientos para determinar el riesgo de fractura ósea no traumática midiendo el nivel de RANK. Las herramientas para el uso en dicho procedimiento son, por ejemplo, anticuerpos contra RANK o contra RANKL.

El documento WO /43553 A1 desvela procedimientos de cribado de mujeres para el cáncer de mama determinando un nivel de un marcador relacionado con estrógenos. Los marcadores determinados en este procedimiento son una enzima aromatasa, actividad aromatasa, un subproducto de la síntesis de estrógenos y una proteína efectora que actúa aguas arriba de la síntesis de estrógenos, obtenida de fluidos ductales mamarios.

Beleut y col., Proceedings of the National Academy of Sciences of The United States of America 17 (7) (21): 2989-2994, proporcionan una investigación de los mecanismos que conducen a la proliferación de la glándula mamaria. Predominantemente, la progesterona dirige la proliferación de las células epiteliales mamarias.

Leibbrandt y col., revisan en el artículo European Journal of Clinical Investigation 39 (1) (29): 842-85, las funciones de RANK, RANKL y OPG en osteoblastos y osteoclastos.

Reid y col., Molecular Molecular Cáncer 8 (49) (29): 1-1, desvelan la estimulación de la producción de OPG por las células endoteliales.

Bo-Ying y col., Annals of Surgical Oncology 17 (6) (21): 1675-1681, describen la identificación de un determinado polimorfismo en el gen de TNFRSF11B que está implicado en el aumento de la metástasis ósea del cáncer de próstata.

Park y col. (23) contiene una discusión del papel de la OPG y RANKL en metástasis óseas de cáncer de mama.

Chen y col. (26) desvelan que la expresión de RANKL/RANK/OPG aumenta en el carcinoma de próstata metastásico agresivo.

Es un objetivo de la presente solicitud proporcionar procedimientos diagnósticos y medios para identificar el cáncer.

La presente invención se refiere al papel específico de RANKL en el cáncer, a su uso para diagnosticar y predecir el cáncer y al desarrollo del cáncer.

De acuerdo con un primer aspecto, la presente invención proporciona un procedimiento para detectar un cáncer o predecir si un paciente desarrollará cáncer, en el que dicho cáncer es cáncer de mama, que comprende determinar la actividad de RANKL y la cantidad de OPG en una muestra de dicho paciente. La presente invención se define adicionalmente en las reivindicaciones.

De acuerdo con la presente invención, se ha descubierto que la ruta de RANK/RANKL está asociada con el

desarrollo del cáncer y que puede usarse para detectar el cáncer y predecir su aparición. Se encontró que RANKL era responsable de proteger a las células de mutaciones cancerosas ya que impide la muerte celular después de dichas mutaciones Inducidas por daño en el ADN. La supervivencia de las células, a pesar de las mutaciones transformantes, es una propiedad clave de las células cancerosas. El papel de RANKL recientemente descubierto en esta actividad permite correlacionar la actividad de RANKL y/o la concentración de OPG con el desarrollo del cáncer. Por lo tanto, se puede estimar la probabilidad de que un paciente tenga o desarrolle un cáncer. La presente invención también se refiere al procedimiento de identificación o predicción del riesgo de desarrollar células cancerosas en un sujeto determinando la actividad de RANKL o la concentración de OPG en una muestra del sujeto.

De acuerdo con la presente Invención, predecir no debe Interpretarse en un sentido absoluto, es decir, en el significado en el que se puede predecir con una certidumbre del 1 % que un paciente desarrollará definitivamente cáncer, pero la Invención se refiere a estimar el riesgo de un paciente para desarrollar cáncer. De manera similar, detectar un cáncer de mama tampoco reivindica que todos los pacientes con cáncer puedan Identificarse determinando la actividad de RANKL, pero el paciente puede tener una alta probabilidad de tener cáncer. Por lo tanto, determinar la actividad de RANKL puede ser una primera pista para identificar un cáncer de mama, posiblemente seguido de más ensayos invasivos.

La invención se basa en el resultado de que la actividad de RANKL - así como la concentración de POG, su ligando natural- puede correlacionarse con la aparición y el desarrollo del cáncer y, por lo tanto, en una realización preferida dicha correlación puede incluirse de acuerdo con el procedimiento de la invención. Por ejemplo, es posible correlacionar datos de un control negativo (por ejemplo, de pacientes que no desarrollan o desarrollaron cáncer) y/o de un control positivo (de pacientes que desarrollaron cáncer) y comparar dichos datos de control negativo o positivo con la actividad de RANKL de la muestra del paciente. Además, para mejorar la potencia del diagnóstico es posible controlar la actividad de RANKL, es decir, medir la actividad de RANKL en muestras del paciente de distintos momentos, por ejemplo, en determinados intervalos de al menos o como máximo, por ejemplo, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 7 semanas, 8 semanas, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 7 meses, 8 meses, 9 meses, 1 meses, 11 meses o 12 meses o más. Los cambios en la actividad de RANKL en dos o más momentos pueden indicar desarrollo del cáncer. En realizaciones particulares, se prefiere controlar los valores de la actividad de RANKL al mismo tiempo en el ciclo menstrual ya que la actividad de RANKL puede estar influenciada por hormonas sexuales femeninas. Por ejemplo, se prefiere que la actividad de RANKL de la muestra se mida a una cantidad fija de días después de la ovulación.

En realizaciones preferentes, el cáncer de mama es un cáncer de mama dependiente de hormonas del crecimiento. Dichas hormonas puede ser hormonas sexuales, tal como hormonas sexuales femeninas como progesterona o un estrógeno. Las células cancerosas pueden tener receptores hormonales, especialmente receptores de progesterona o receptores estrogénicos. Son ejemplos de receptores estrogénicos el ESR1 (que comprende cadenas alfa del RE), el ESR2 (que comprende cadenas beta del RE) o los receptores heteroméricos, tales como las cadenas mixtas alfa y beta del RE. La presencia de dichos receptores puede indicar una necesidad de señalización hormonal en la célula. En particular, esta señalización puede estar mediada por RANKL. La activación de RANKL por hormonas protege al cáncer o a la célula precancerosa de la muerte celular inducida por daño en el ADN. Por lo tanto estas hormonas pueden mantener el cáncer mediante la actividad aumentada de RANKL, que por lo tanto puede usarse para diagnosticar o predecir... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento de diágnostico de cáncer o para predecir el desarrollo de un cáncer en un paciente, en el que dicho cáncer es cáncer de mama, que comprende determinar la actividad de RANKL y la cantidad del ligando de RANKL, la osteoprotegerina (OPG), en una muestra de dicho paciente.

2. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque la actividad de RANKL es determinada determinando en la muestra la cantidad de RANKL y/o de RANK.

3. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque la actividad de RANKL es determinada determinando la señalización de uno cualquiera de RANK, IKK-alfa, IkB-alfa, P-NF-kappa-B y de Ciclina D1.

4. Procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la muestra comprende células mamarlas del paciente.

5. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 4, caracterizado porque las células comprenden receptores hormonales seleccionados del receptor de progesterona y de un receptor de estrógeno.

6. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 5, caracterizado porque el receptor de estrógeno es seleccionado de ESR1, ESR2 o de un receptor heterodlmérlco.

7. Procedimiento de la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque RANKL es determinado en una muestra de suero de dicho paciente.

8. Procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque el paciente es tratado por una hormona o con un anticonceptivo hormonal.

9. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 8, caracterizado porque el paciente recibe terapia de reemplazo hormonal, progesterona o una progestlna.

1. Procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que adicionalmente comprende determinar la concentración en suero de una hormona del ciclo menstrual o una progestina en una muestra del paciente.

11. El procedimiento de la reivindicación 1, caracterizado porque el riesgo de desarrollar cáncer de mama es estimado determinando al menos tanto la actividad de RANKL, como los niveles de progesterona y/o progestina, y adicionalmente la cantidad de OPG.

12. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el cáncer de mama de reciente aparición se diagnostica o predice determinando la relación de OPG con respecto a RANKL.

13. Un kit que comprende un agente de detección para RANKL, un agente de detección para OPG, y un agente de detección para progesterona o una progestlna.