Composiciones y métodos para la terapia y diagnóstico de infecciones por citomegalovirus.

Un anticuerpo anti CMV aislado o fragmento del mismo, en el que dicho anticuerpo o fragmento del mismo comprende:

(a) una región VH que comprende

(i) una región VH CDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SSNGIH (SEC ID Nº: 57);

(ii) una región VH CDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de VISSDANDKQYADSVKG (SEC ID Nº: 58);

(iii) una región VH CDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de DGTCSGGNCYSGLIDY (SEC ID Nº: 59); y

(b) una región VL que comprende

(i) una región VL CDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de RASQSVGGYLA (SEC ID Nº: 43);

(ii) una región VL CDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de ASIRAT (SEC ID Nº: 64);

(iii) una región VL CDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de HQRSNWPPLT (SEC ID Nº: 65); o

(a) una región VH que comprende

(i) una región VH CDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de GFTFSS (SEC ID Nº: 60);

(ii) una región VH CDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de VISSDANDKQ (SEC ID Nº: 61);

(iii) una región VH CDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de DGTCSGGNCYSGLIDY (SEC ID Nº: 59); y

(b) una región VL que comprende

(i) una región VL CDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de RASQSVGGYLA (SEC ID Nº: 43);

(ii) una región VL CDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de ASIRAT (SEC ID Nº: 64);

(iii) una región VL CDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de HQRSNWPPLT (SEC ID Nº: 65).

Composiciones y métodos para la terapia y diagnóstico de infecciones por citomegalovirus Campo de la invención La presente invención se refiere en general a la terapia, diagnóstico y control de infección por citomegalovirus (CMV) . La invención se refiere más específicamente a anticuerpos específicos de CMV humano (HCMV) y a su fabricación y uso. Dichos anticuerpos son útiles en composiciones farmacéuticas para la prevención y tratamiento de infección por CMV, y para el diagnóstico y control de infección por CMV.

Antecedentes de la invención El CMV se asocia con morbilidad y mortalidad generalizadas. La infección con citomegalovirus (CMV) es común, y se ha estimado que entre el 50 % y el 85 % de personas en los Estados Unidos han tenido una infección por CMV cuando llegan a 40 años de edad. Aunque la infección por CMV generalmente no produce síntomas en adultos sanos, los grupos de alto riesgo, incluyendo receptores con trasplante de órganos inmunocomprometidos e individuos infectados por VIH, están en riesgo de desarrollar una enfermedad asociada con CMV. Además, el CMV es una causa importante de infección congénita en el mundo desarrollado, que conduce a retraso mental y discapacidades del desarrollo.

El CMV es un miembro de la familia de herpesvirus en cualquier especie. En seres humanos, el CMV, también denominado HCMV, se designa como herpesvirus humano 5 (HHV-5) . El CMV es el mayor miembro de la familia del herpesvirus, con un genoma de ADN bicatenario de más de 240 kpb, capaz de codificar más de 200 productos proteicos potenciales. El CMV también se denomina un Betaherpesvirinae, ya que es un virus del herpes que infecta a células mononucleares y linfocitos. Los seres humanos son el único hospedador natural para infección por CMV, aunque otros mamíferos se infectan con otras formas del CMV.

El cuidado médico para pacientes que padecen enfermedad asociada con CMV consiste en apoyo nutricional, tratamiento complementario para síndromes de órganos finales (particularmente neumonía en pacientes inmunocomprometidos) y terapia antiviral específica. Al menos tres terapias antivirales están aprobadas por la Administración de Fármacos y Alimentos de los Estados Unidos (FDA) para tratamiento o prevención de infección por CMV. Estas incluyen los nucleósidos: ganciclovir (GCV) y cidofovir, así como foscarnet. GCV se usa habitualmente como terapia preventiva en receptores de trasplantes con alto riesgo de desarrollar enfermedad. También se ha usado aciclovir como profilaxis para trasplante de órganos sólidos, pero la biodisponibilidad es escasa, y no hay datos que apoyen su uso en niños. También se han usado inmunoglobulinas como inmunización pasiva para la prevención de enfermedad asociada con CMV. En general, aunque estos agentes han mostrado eficacia en el tratamiento o prevención de infección por CMV, los nucleósidos, en particular, se asocian con efectos secundarios graves, incluyendo anemia y otros problemas sanguíneos. En consecuencia, su uso en niños está limitado.

Claramente, existe la necesidad en la técnica de nuevos agentes útiles para el tratamiento y prevención de infección por CMV sintomática y enfermedades asociadas, particularmente para el tratamiento de niños.

Sumario de la invención La invención proporciona un anticuerpo anti-CMV aislado o fragmento del mismo, en el que el anticuerpo incluye: I:

(a) una región VH que incluye (i) una región VH CDR1 que incluye la secuencia de aminoácidos de SSNGIH (SEC ID Nº: 57) ; (ii) una región VH CDR2 que incluye la secuencia de aminoácidos de VISSDANDKQYADSVKG (SEC ID Nº: 58) ; (iii) una región VH CDR3 que incluye la secuencia de aminoácidos de DGTCSGGNCYSGLIDY (SEC ID Nº: 59) ; y (b) una región VL que incluye (i) una región VL CDR1 que incluye la secuencia de aminoácidos de RASQSVGGYLA (SEC ID Nº: 43) ; (ii) una región VL CDR2 que incluye la secuencia de aminoácidos de ASIRAT (SEC ID Nº: 64) ; (iii) una región VL CDR3 que incluye la secuencia de aminoácidos de HQRSNWPPLT (SEC ID Nº: 65) ; o VISKDGTNAHYADSVRG (SEC ID Nº: 68) ; II: (a) una región VH que incluye (i) una región VH CDR1 que incluye la secuencia de aminoácidos de GFTFSS (SEC ID Nº: 60) ; (ii) una región VH CDR2 que incluye la secuencia de aminoácidos de VISSDANDKQ (SEC ID Nº: 61) ; (iii) una región VH CDR3 que incluye la secuencia de aminoácidos de DGTCSGGNCYSGLIDY (SEC ID Nº: 59) ; y (b) una región VL que incluye (i) una región VL CDR1 que incluye la secuencia de aminoácidos de RASQSVGGYLA (SEC ID Nº: 43) ; (ii) una región VL CDR2 que incluye la secuencia de aminoácidos de ASIRAT (SEC ID Nº: 64) ; (iii) una región VL CDR3 que incluye la secuencia de aminoácidos de HQRSNWPPLT (SEC ID Nº: 65) .

La invención proporciona además un anticuerpo anti-CMV aislado incluyendo una secuencia de cadena pesada que incluye la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 56 y una secuencia de cadena ligera que incluye la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 63.

El anticuerpo anti-CMV de la invención se une con un epítopo de la proteína de envoltura de glucoproteína b (gB) del virus CMV. En un aspecto de la invención, el epítopo comprende el sitio 1 de determinante antigénico 2 de gB, gp116.

La invención proporciona una composición que incluye uno o más de los anticuerpos descritos en el presente documento. En ciertas realizaciones, la composición también incluye un tratamiento anti-viral. Son ejemplos no limitantes de tratamientos antivirales ganciclovir, foscarnet, cidofovir, valganciclovir e inmunoglobulina intravenosa (IVIG) . En otras realizaciones, la composición incluye además un segundo anticuerpo anti-CMV.

La invención proporciona además un anticuerpo anti-CMV, tal como los descritos en el presente documento, en el que el anticuerpo está unido operativamente con un agente terapéutico o un marcador detectable.

La invención proporciona un método para el tratamiento o prevención de una infección por CMV en un sujeto, que incluye administrar al sujeto la composición descrita en el presente documento. En un aspecto, este método incluye además administrar un tratamiento anti-viral. Los tratamientos anti-virales incluyen, pero sin limitación, los siguientes ejemplos: ganciclovir, foscarnet, cidofovir, valganciclovir, e inmunoglobulina intravenosa (IVIG) . En otro aspecto del método anterior, la composición que contiene un anticuerpo anti-CMV se administra antes de o después de la exposición a CMV a una dosis suficiente para neutralizar la infección por CMV.

Se proporcionan métodos adicionales de la invención para determinar la presencia de una infección por CMV en un paciente, incluyendo las etapas de: (a) poner en contacto una muestra biológica obtenida del paciente con un anticuerpo descrito en el presente documento; (b) detectar una cantidad del anticuerpo que se une con la muestra biológica; y (c) comparar la cantidad de anticuerpo que se une con la muestra biológica con un valor de control, y a partir de esto determinar la presencia del virus de la gripe en el paciente.

La invención también proporciona un kit que incluye un anticuerpo descrito en el presente documento.

Como alternativa, o además, la invención desvela un anticuerpo monoclonal humano aislado, en el que el anticuerpo monoclonal se une con un epítopo en el dominio extracelular del complejo de glucoproteína gB de un citomegalovirus (CMV) . En un aspecto preferido, el CMV es un CMV humano (HCMV) . En otro aspecto preferido, el anticuerpo se aísla de una célula B de un donante humano.

En ciertos aspectos de la presente divulgación, el epítopo del anticuerpo monoclonal humano aislado incluye la región AD-2 del complejo de gB de CMV. Específicamente, el epítopo incluye los aminoácidos en las posiciones 7088 de un polipéptido gB de CMV, en el que los números de posiciones de aminoácidos están de acuerdo con SEC ID Nº: 30. Como alternativa, el epítopo incluye los aminoácidos en las posiciones 65-93 de un complejo gB de CMV, en el que los números de posiciones de aminoácidos están de acuerdo con SEC ID Nº: 30. Un epítopo alternativo adicional incluye los aminoácidos en las posiciones 60-98 de un complejo de gB de CMV, en el que los números de posiciones de aminoácidos están de acuerdo con SEC ID Nº: 30.

En ciertos aspectos, el epítopo del anticuerpo descrito en el presente documento comprende completa o parcialmente la secuencia de aminoácidos NETIYNTTLKYGDWGVN (SEC ID Nº: 32) o NIX3NX4TX5X6X7X5X9X10X11X12X14 (SEC ID Nº: 33) en la que X1 = aminoácido E o T, X2 = T o V, X3 = S o R, X4 = T o L, X5 = L o A, X6 = K o S, X7 = Y o V, X8 = G o D, X9 = D o F, X10 = V o S, X11 = V o Q, X12 = G o ninguno, X13 = V o ninguno, y X14 = N o ninguno. En una... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti CMV aislado o fragmento del mismo, en el que dicho anticuerpo o fragmento del mismo comprende: 5

(I)

(a) una región VH que comprende (i) una región VH CDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SSNGIH (SEC ID Nº: 57) ;

(ii) una región VH CDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de VISSDANDKQYADSVKG (SEC ID Nº: 58) ;

(iii) una región VH CDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de DGTCSGGNCYSGLIDY (SEC

ID Nº: 59) ; y 15

(b) una región VL que comprende (i) una región VL CDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de RASQSVGGYLA (SEC ID Nº:

43) ; 20 (ii) una región VL CDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de ASIRAT (SEC ID Nº: 64) ;

(iii) una región VL CDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de HQRSNWPPLT (SEC ID Nº: 65) ; o (II) 25

(a) una región VH que comprende

(i) una región VH CDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de GFTFSS (SEC ID Nº: 60) ;

(ii) una región VH CDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de VISSDANDKQ (SEC ID Nº: 61) ;

(iii) una región VH CDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de DGTCSGGNCYSGLIDY (SEC ID Nº: 59) ; y

(b) una región VL que comprende (i) una región VL CDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de RASQSVGGYLA (SEC ID Nº: 43) ;

(ii) una región VL CDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de ASIRAT (SEC ID Nº: 64) ;

(iii) una región VL CDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de HQRSNWPPLT (SEC ID Nº:

65) . 40

2. El anticuerpo anti CMV de la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo comprende:

una secuencia de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 56 y una secuencia de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 63. 45

3. El anticuerpo anti CMV de la reivindicación 1 o 2, en el que dicho anticuerpo se une con un epítopo de la proteína de envoltura de glucoproteína b (gB) del virus CMV.

4. El anticuerpo anti CMV de la reivindicación 3, en el que dicho epítopo comprende el sitio 1 de determinante 50 antigénico 2 de gB, gp116.

5. Una composición que comprende el anticuerpo de la reivindicación 1, 2, 3 o 4.

6. La composición de la reivindicación 5, que comprende además un agente antiviral, en el que dicho agente antiviral 55 es opcionalmente ganciclovir, foscarnet, cidofovir, valganciclovir e inmunoglobulina intravenosa (IVIG) .

7. La composición de la reivindicación 5, que comprende además un segundo anticuerpo anti CMV.

8. El anticuerpo de la reivindicación 1, 2, 3 o 4, en el que dicho anticuerpo está unido operativamente con un agente 60 terapéutico o un marcador detectable.

9. La composición de la reivindicación 5 para uso en el tratamiento o prevención de una infección por CMV en un sujeto.

11. La composición para uso de la reivindicación 10, en la que dicho agente antiviral es ganciclovir, foscarnet, cidofovir, valganciclovir e inmunoglobulina intravenosa (IVIG) .

12. La composición para uso de la reivindicación 9, en la que dicha composición se administra antes de o después 5 de la exposición a CMV.

10. La composición para uso de la reivindicación 9, en la que la composición comprende además un agente antiviral.

13. La composición para uso de la reivindicación 9, en la que dicha composición se administra a una dosis suficiente para neutralizar la infección por CMV.

14. Un método para determinar la presencia de una infección por CMV en un paciente, que comprende las etapas de:

(a) poner en contacto una muestra biológica obtenida del paciente con el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 o 4; 15 (b) detectar una cantidad del anticuerpo que se une con la muestra biológica; y

(c) comparar la cantidad de anticuerpo que se une con la muestra biológica con un valor de control, y determinar a partir de la misma la presencia del virus de la gripe en el paciente.

15. Un kit de diagnóstico que comprende el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 o 4. 20