Composición portadora de administración rápida de ácidos nucleicos.

Composición para la administración de ARNip, que comprende:

un ARNip,

y

una composición portadora para la administración de ARNip, que comprende (A) una diacilfosfatidilcolina, (B) por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo que consiste en colesterol y lípidos catiónicos que presentan un esqueleto de colesterol, y (C) una amina primaria alifática.

Composición portadora de administración rápida de ácidos nucleicos

Campo técnico

La presente invención se refiere a una composición portadora para la administración de ARNip que puede administrar eficientemente un ARNip en las células al administrar un ARNip en células de origen animal u organismos y que también presenta una baja toxicidad y una elevada seguridad, y a una composición para la administración de ARNip.

Antecedentes de la técnica Se han descubierto diversos tipos de ácidos nucleicos que ejercen funciones fisiológicamente activas dentro de las células mediante los recientes desarrollos biotecnológicos. Por ejemplo, es conocido que el ARN de interferencia pequeño (ARNip) induce la degradación del ARNm de un gen diana existente dentro de las células e inhibe la expresión del gen diana (interferencia de ARN) . La función inhibidora de la expresión del gen diana debido a la interferencia del ARN resulta útil para mitigar o tratar síntomas de enfermedad causados por la expresión irregular de genes o grupos génicos particulares, y se prevé el desarrollo de agentes terapéuticos que utilicen el ARNip. Para utilizar ácidos nucleicos, incluyendo el ARNip, como agentes terapéuticos resulta importante que el ARNip funcione en la célula diana y, por lo tanto, resulta esencial establecer técnicas eficientes para administrar los ácidos nucleicos en las células diana.

La utilización de un portador (vector) es conocida como técnica para administrar moléculas de ácidos nucleicos o genes exógenos en el interior de células. Entre los vectores se incluyen vectores víricos y vectores no víricos. Los vectores víricos presentan una elevada eficiencia de transferencia génica; sin embargo, existen diversos aspectos de seguridad desconocidos, incluyendo la patogenicidad, la inmunogenicidad y la citotoxicidad. Por lo tanto, se espera al desarrollo de vectores no víricos, más seguros.

Como portador no vírico de administración de ácidos nucleicos que induce la administración de un ácido nucleico, tal como el ARNip, en las células, se ha informado, por ejemplo, de un lípido catiónico con una estructura específica en el documento de patente nº 1. Sin embargo, el lípido catiónico informado en el documento de patente nº 1 presenta la desventaja de que muestra toxicidad al administrarlo en células en cultivo u organismos vivos. Además, el documento de patente nº 2 da a conocer una composición que contiene un compuesto anfifílico y un policatión como composición portadora que presenta una toxicidad comparativamente reducida y puede administrar el ARNip en las células. Sin embargo, la composición dada a conocer en el documento de patente nº 2 además presenta un problema de seguridad, ya que su citotoxicidad se vuelve no despreciable en el caso de que se introduzca una

cantidad suficiente de ARNip en las células.

El documento de patente WO 2005007196 diestearoilfosfatidilcolina, colesterol, N, N-dimdiestearilglicerol. da etil-2, a 3-d conocer ioleiloxi-pr moléculas opilamina:PE de G-di ARNip miristilgli que cerol compo renden PEG-

A partir de la técnica anterior, se ha deseado el desarrollo de una composición portadora para la administración de ARNip que presenta una toxicidad baja y pueda administrar eficientemente un ARNip en las células.

[Documento de patente 1] publicación de patente japonesa no examinada nº 2002-529439 [Documento de patente 2] publicación de patente japonesa no examinada nº 2005-508394.

Exposición de la invención Problema técnico Un objetivo de la presente invención es resolver los problemas anteriormente indicados de la técnica anterior. Concretamente, un objetivo de la presente invención es proporcionar una composición portadora para la administración de ARNip que pueda administrar eficientemente ARNip en las células al administrar un ARNip en células de origen animal o animales y que además presente una toxicidad baja y una seguridad elevada, y una composición para la administración de ARNip que contenga la composición portadora y ARNip. Además, otro objetivo de la presente invención es proporcionar una composición para introducir un ARNip en las células que pueda administrar eficientemente el ARNip en las células con una seguridad elevada.

Medios para resolver el problema Se ha investigado exhaustivamente con el fin de conseguir el objetivo mencionado anteriormente y se ha descubierto que una composición que contiene (A) una diacilfosfatidilcolina, (B) colesterol y/o lípidos catiónicos con un esqueleto de colesterol y (C) una amina primaria alifática, presenta una toxicidad baja y una seguridad elevada,

puede administrar eficientemente ARNip en las células y por lo tanto resulta útil como portador para la administración de ARNip. También se ha descubierto que resulta posible obtener una seguridad más excelente y propiedades de introducción de ARNip mediante la utilización de una composición que contiene los componentes (A) a (C) tras la conformación en una forma liposómica. La presente invención se ha completado realizando mejoras adicionales basándose en estos resultados.

La presente invención proporciona las formas de realización siguientes.

1. Una composición para la administración de ARNip, que comprende:

un ARNip y una composición portadora para la administración de ARNip, que comprende (A) una diacilfosfatidilcolina, (B) por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo que consiste en colesterol y lípidos catiónicos que presentan un esqueleto de colesterol, y (C) una amina primaria alifática.

2. La composición para la administración de ARNip según el ítem 1, en la que el componente (A) es una diacilfosfatidilcolina cuya fracción grupo acilo presenta entre 4 y 23 átomos de carbono.

3. La composición para la administración de ARNip según el ítem 1 o 2, en la que el componente (B) es colesterol.

4. La composición para la administración de ARNip según cualquiera de los ítems 1 a 3, en la que el

componente (C) es una alquilamina que presenta entre 10 y 20 átomos de carbono. 25

5. La composición para la administración de ARNip según el ítem 1, en la que el componente (A) es por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo que consiste en dimiristoilfosfatidilcolina, dipalmitoilfosfatidilcolina y diestearoilfosfatidilcolina, el componente (B) es colesterol, y el componente (C) es estearilamina.

6. La composición para la administración de ARNip según cualquiera de los ítems 1 a 5, en la que la proporción 35 molar de componente (A) :componente (B) :componente (C) es 5-9:1-5:1.

7. La composición para la administración de ARNip según cualquiera de los ítems 1 a 6, en la que la composición portadora para la administración de ARNip es una preparación de liposomas en la que se forma una membrana liposómica a partir de los componentes (A) a (C) .

8. La composición para la administración de ARNip según cualquiera de los ítems 1 a 6, que es una preparación de liposomas.

9. La composición según cualquiera de los ítems 1 a 8 para la utilización en medicina. 45

10. La composición según cualquiera de los ítems 1 a 8 para la utilización en la inhibición de la expresión de un gen diana en células presentes en los organismos vivos.

11. Utilización de una composición portadora que comprende: (A) una diacilfosfatidilcolina, (B) por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo que consiste en colesterol y lípidos catiónicos que presentan un esqueleto de colesterol, y (C) una amina primaria alifática y un ARNip, en la preparación de una composición según cualquiera de los ítems 1 a 10.

12. Un procedimiento para la introducción de un ARNip, que comprende la etapa de introducir el ARNip en

células en cultivo o en células separadas de organismos vivos mediante la puesta en contacto con las células de la composición para la administración de ARNip según el ítem 1.

Efectos de la invención La composición portadora para la administración de ARNip y la composición para la administración de ARNip de la invención presenta la ventaja de que puede administrar eficazmente un ARNip en las células, ejerciendo de esta manera una función útil de los ácidos nucleicos en las células y además presenta una toxicidad baja y una seguridad elevada. Por lo tanto, la composición portadora para la administración de ARNip y la composición para la administración de ARNip resultan útiles para el tratamiento de diversas enfermedades mediante la introducción de 65 un ARNip, particularmente el tratamiento de enfermedades intratables que resultan difíciles de tratar con un compuesto de bajo peso molecular.

La composición portadora para la administración... [Seguir leyendo]

1. Composición para la administración de ARNip, que comprende:

un ARNip, y una composición portadora para la administración de ARNip, que comprende (A) una diacilfosfatidilcolina, (B) por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo que consiste en colesterol y lípidos catiónicos que presentan un esqueleto de colesterol, y (C) una amina primaria alifática.

2. Composición para la administración de ARNip según la reivindicación 1, en la que el componente (A) es una diacilfosfatidilcolina cuya fracción grupo acilo presenta 4 a 23 átomos de carbono.

3. Composición para la administración de ARNip según la reivindicación 1 o 2, en la que el componente (B) es el 15 colesterol.

4. Composición para la administración de ARNip según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el componente (C) es una alquilamina que presenta 10 a 20 átomos de carbono.

5. Composición para la administración de ARNip según la reivindicación 1, en la que el componente (A) es por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo que consiste en dimiristoilfosfatidilcolina, dipalmitoilfosfatidilcolina y diestearoilfosfatidilcolina, el componente (B) es el colesterol, y el componente (C) es la estearilamina.

6. Composición para la administración de ARNip según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que la proporción molar de componente (A) :componente (B) :componente (C) es 5-9:1-5:1. 30

7. Composición para la administración de ARNip según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que composición portadora para la administración de ARNip es una preparación de liposomas en la que se forma una membrana liposómica de los componentes (A) a (C) .

8. Composición para la administración de ARNip según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que es una preparación de liposomas.

9. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para la utilización en medicina.

10. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para la utilización en la inhibición de la expresión de un gen diana en células existentes en los organismos vivos.

11. Utilización de una composición portadora que comprende: (A) una diacilfosfatidilcolina, (B) por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo que consiste en colesterol y lípidos catiónicos que presentan un esqueleto 45 de colesterol, y (C) una amina primaria alifática y un ARNip, en la preparación de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.

12. Procedimiento para la introducción de un ARNip, que comprende la etapa de introducir el ARNip en células cultivadas o en células separadas a partir de organismos vivos mediante la puesta en contacto de la composición 50 para la administración de ARNip según la reivindicación 1 con las células.