Caracterización de equipo de cromatografía reutilizable.

Procedimiento para determinar si un empaquetado de columna de cromatografía reutilizable,

que se usa al menos por segunda vez en una etapa de purificación de una purificación de un polipéptido, tiene una eficacia de separación reducida en dicha etapa de purificación de dicha purificación de dicho polipéptido, caracterizado por que dicho procedimiento comprende las siguientes etapas:

a) identificar y determinar los datos experimentales de un cambio inerte de al menos un parámetro fisicoquímico de una fase móvil que pasa a través de dicho empaquetado de columna de cromatografía reutilizable del al menos segundo uso,

b) determinar los parámetros de una función de fórmula I ajustando los datos experimentales del cambio inerte del parámetro fisicoquímico del al menos segundo uso,

c) determinar la diferencia entre los datos experimentales del cambio inerte del parámetro fisicoquímico del al menos segundo uso y la función de fórmula I con los parámetros determinados en la etapa b),

d) calcular la diferencia entre el valor máximo y el valor mínimo de la diferencia determinada en la etapa c) y normalizar dicha diferencia,

e) determinar la eficacia de separación reducida de dicho empaquetado de columna de cromatografía reutilizable cuando el valor absoluto de la diferencia calculada en la etapa d) es más de 0,1,

en el que la función de fórmula I es**Fórmula**

con la amplitud P1, el valor de partida A0, el valor medio m, la desviación estándar s, y con**Fórmula**

Caracterización de equipo de cromatografía reutilizable

El procedimiento informado en el presente documento está en el campo de la cromatografía, en especial en el campo de la cromatografía en columna preparativa. En el presente documento se informa de un procedimiento para la determinación directa de la calidad del empaquetado de una columna de cromatografía basada en datos en proceso. Con este procedimiento se puede lograr un ahorro en el tiempo de proceso y en recursos ya que se puede eliminar la adquisición de datos adicionales únicamente con el propósito de la determinación de la integridad de la columna.

Antecedentes de la invención

Hoy en día, casi todos los polipéptidos usados en medicamentos se preparan de forma recombinante. Debido a los requisitos y directrices reguladoras estrictas, los subproductos han de retirarse de la preparación polipeptídica terapéutica tanto como sea posible. Por lo tanto, se emplea al menos una etapa de cromatografía en el procesamiento posterior del polipéptido bruto a granel después de la producción recombinante. Como la dimensión del equipo de cromatografía con respecto al campo del proceso de fermentación, en especial la capacidad de separación de las columnas de cromatografía, es limitada, se han de procesar una multitud de lotes con el fin de poder proporcionar la cantidad requerida de polipéptido terapéutico purificado.

Para garantizar que cada lote de polipéptido terapéutico purificado tenga el mismo efecto farmacéutico, se ha de cumplir para cada lote una lista de parámetros analíticos. Esto sólo se puede lograr si las etapas del proceso de purificación funcionan de forma consistente y eficaz. Pero, si una etapa del proceso de purificación no funciona de forma apropiada, el producto obtenido muy probablemente no pasará las pruebas analíticas y, en el peor caso, no se podrá usar este lote. Por lo tanto, es necesario proporcionar procedimientos para determinar el rendimiento y la eficacia de las etapas de purificación.

Teeters, M.A. y Quiñones-García, I. (J. Chrom. A 169 (25) 53-64) informan de la evaluación y monitorización del comportamiento del empaquetado de las columnas de cromatografía en una escala de proceso usando las respuestas al pulso basado en la conductividad y las entradas de etapa derivadas de experimentos con trazadores y transiciones en proceso, en especial de las distribuciones del tiempo de residencia medido. Norling et al. (Norling, L., et al. J. Chrom. A 169 (25) 79-89) informan del impacto de múltiples reutilizaciones del medio de cromatografía de intercambio aniónico en la retirada de virus. Se informa del uso de datos de proceso para evaluar el rendimiento cromatográfico en columnas de purificación de proteínas en una escala de producción por Larson et al. (Larson, T.M., et al., Biotechnol. Prog. 19 (23) 485-492). Moscariello, J., et al. J. Chrom. A 98 (21) 131-141 informan de la caracterización del rendimiento de columnas en una escala industrial. Se informa de la resolución y la eficacia de la columna en cromatografía por Vink, H., J. Chrom. 69 (1972) 237-242. Sarker, M. y Guiochon, G., J. Chrom. A 72 (1995) 27-44 informan de un estudio del comportamiento de empaquetamiento de columnas de compresión axial para cromatografía preparativa.

Sumario de la invención

Con el procedimiento como se informa en el presente documento, se puede determinar una determinación de la disminución en la eficacia de separación y/o calidad del empaquetado de un empaquetado de columna de cromatografía reutilizable sin la necesidad de usar e inyectar un compuesto trazador adicional antes de la separación de la solución polipeptídica en bruto para la determinación de la integridad del material de la columna o la necesidad de datos históricos de esta etapa de purificación.

El primer aspecto como se informa en el presente documento es un procedimiento para determinar si un empaquetado de columna de cromatografía reutilizable, que se usa al menos por segunda vez en una etapa de purificación de una purificación de un polipéptido, tiene una eficacia de separación reducida, por ejemplo, en comparación con la eficacia de separación cuando se usó por primera vez en la misma etapa de purificación de la misma purificación del mismo polipéptido, que comprende las siguientes etapas:

a) identificar y determinar los datos experimentales de un cambio inerte de al menos un parámetro fisicoquímico de una fase móvil que pasa a través de dicho empaquetado de columna de cromatografía reutilizable,

b) determinar los parámetros de una función de fórmula I ajustando los datos experimentales del cambio inerte del parámetro fisicoquímico del al menos segundo uso,

c) determinar la diferencia entre los datos experimentales del cambio inerte del parámetro fisicoquímico del al menos segundo uso y la función de fórmula I con los parámetros determinados en la etapa b),

d) calcular la diferencia entre el valor máximo y el valor mínimo de la diferencia determinada en la etapa c) y normalizar dicha diferencia,

e) determinar la eficacia de separación reducida de dicho empaquetado de columna de cromatografía reutilizable cuando el valor absoluto de la diferencia calculada en la etapa d) es más de ,1,

en el que la función de fórmula I es

1 + erf

{x-m <s-V2

+ AO,

con la amplitud P1, el valor de partida A, el valor medio m, la desviación estándar s, y con

(-i)V"*1 (2« + l)«! `

Otro aspecto como se informa en el presente documento es un procedimiento para la purificación cromatográfica de un polipéptido, en el que está comprendido al menos una etapa de cromatografía con un empaquetado de columna de cromatografía reutilizable, que comprende las siguientes etapas:

a) identificar y determinar los datos experimentales de un cambio inerte de al menos un parámetro fisicoquímico de una fase móvil que pasa a través de dicho empaquetado de columna de cromatografía reutilizable,

b) determinar los parámetros de una función de fórmula I ajustando los datos experimentales del cambio inerte del parámetro fisicoquímico del al menos segundo uso,

c) determinar la diferencia entre los datos experimentales del cambio inerte del parámetro fisicoquímico del al menos segundo uso y la función de fórmula I con los parámetros determinados en la etapa b),

d) calcular la diferencia entre el valor máximo y el valor mínimo de la diferencia determinada en la etapa c) y normalizar dicha diferencia,

en el que la función de fórmula I es

yl = P1

J 2

1 + erf

'x-mV*

\

Vs

V2

))

+ A,

con la amplitud P1, el valor de partida A, el valor medio m, la desviación estándar s, y con

(-i)Vn+1

(2 n + l)n!

y

- adicionalmente usar el empaquetado de columna de cromatografía reutilizable cuando el valor absoluto de la diferencia calculada en la etapa d) es de ,5 o menor, o

realizar una caracterización adicional del polipéptido purificado cuando el valor absoluto de la diferencia calculada en la etapa d) es más de ,5 pero menos de ,2, o

- cambiar el empaquetado de columna de cromatografía reutilizable cuando el valor absoluto de la diferencia calculada en la etapa d) es de ,2 o más.

En un modo de realización, dicho cambio inerte de al menos un parámetro fisicoquímico de dicha fase móvil que pasa a través de dicho empaquetado de columna de cromatografía reutilizable es un cambio de señal significativo efectuado por el cambio de la concentración de una sustancia que no interacciona con el empaquetado de columna reutilizable contenido en dicha fase móvil. En otro modo de realización, dicha determinación de los datos experimentales es una determinación con el tiempo de los datos experimentales de un parámetro fisicoquímico de un cambio inerte. En otro modo de realización, dicho cambio inerte de al menos un parámetro fisicoquímico de una fase móvil que pasa a través de dicho empaquetado de columna de cromatografía reutilizable es un cambio de la fase móvil de un 1 % de una solución que contiene un agente desnaturalizante a un 1% de una solución que no contiene dicho agente desnaturalizante o de un 1 % de una solución que no contiene dicho agente desnaturalizante a un 1 % de una solución que contiene un agente desnaturalizante. En otro modo de realización, el agente desnaturalizante se selecciona de hidróxido de sodio, cloruro de guanidinio, urea o disolvente orgánico. En un modo de realización, dicha etapa c) es determinar las diferencias entre los datos experimentales del cambio inerte del parámetro fisicoquímico del al... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para determinar si un empaquetado de columna de cromatografía reutilizable, que se usa al menos por segunda vez en una etapa de purificación de una purificación de un polipéptido, tiene una eficacia de separación reducida en dicha etapa de purificación de dicha purificación de dicho polipéptido, caracterizado porque dicho procedimiento comprende las siguientes etapas:

a) identificar y determinar los datos experimentales de un cambio inerte de al menos un parámetro fisicoquímico de una fase móvil que pasa a través de dicho empaquetado de columna de cromatografía reutilizable del al menos segundo

uso,

b) determinar los parámetros de una función de fórmula I ajustando los datos experimentales del cambio inerte del parámetro fisicoquímico del al menos segundo uso,

c) determinar la diferencia entre los datos experimentales del cambio inerte del parámetro fisicoquímico del al menos segundo uso y la función de fórmula I con los parámetros determinados en la etapa b),

d) calcular la diferencia entre el valor máximo y el valor mínimo de la diferencia determinada en la etapa c) y normalizar dicha diferencia,

e) determinar la eficacia de separación reducida de dicho empaquetado de columna de cromatografía reutilizable cuando el valor absoluto de la diferencia calculada en la etapa d) es más de ,1,

en el que la función de fórmula I es

yi

(

l + erf

{x-m

y\

Jj

+ A,

con la amplitud P1, el valor de partida A, el valor medio m, la desviación estándar s, y con

(-i yv"*1

(2» + l)n! `

2. Procedimiento para la purificación cromatográfica de un polipéptido, en el que está contenido al menos una etapa de cromatografía que usa un empaquetado de columna de cromatografía reutilizable, caracterizado por que dicho procedimiento comprende las siguientes etapas:

a) identificar y determinar los datos experimentales de un cambio inerte de al menos un parámetro fisicoquímico de una fase móvil que pasa a través de dicho empaquetado de columna de cromatografía reutilizable del al menos segundo

uso,

b) determinar los parámetros de una función de fórmula I ajustando los datos experimentales del cambio inerte del parámetro fisicoquímico del al menos segundo uso,

c) determinar la diferencia entre los datos experimentales del cambio inerte del parámetro fisicoquímico del al menos segundo uso y la función de fórmula I con los parámetros determinados en la etapa b),

d) calcular la diferencia entre el valor máximo y el valor mínimo de la diferencia determinada en la etapa c) y normalizar dicha diferencia,

en el que la función de fórmula I es

/

\

1 + er

+ A,

con la amplitud P1, el valor de partida A, el valor medio m, la desviación estándar s, y con

(-1 fx2n+i

(2» +1)«!

y

y

-adicionalmente usar el empaquetado de columna de cromatografía reutilizable cuando el valor absoluto de la diferencia calculada en la etapa d) es de ,5 o menos, o

-realizar una caracterización y/o evaluación adicional del polipéptido purificado cuando el valor absoluto de la diferencia calculada en la etapa d) es más de ,5 pero menos de ,2, o

- cambiar el empaquetado de columna de cromatografía reutilizable cuando el valor absoluto de la diferencia calculada en la etapa d) es de ,2 o más.

3. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque dicho cambio inerte de al menos un parámetro fisicoquímico de una fase móvil que pasa a través de dicho empaquetado de columna de cromatografía reutilizable es un cambio efectuado por el cambio de la concentración de una sustancia en la fase móvil que no interacciona con el empaquetado de columna reutilizable.

4. Procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que dicho cambio inerte es un cambio en la conductividad o en la adsorción a 28 nm.

5. Procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que dicho cambio inerte de al menos un parámetro fisicoquímico de una fase móvil que pasa a través de dicho empaquetado de columna de cromatografía reutilizable es un cambio de desde un 1% de una solución que contiene un agente desnaturalizante a un 1 % de una solución que no contiene dicho agente desnaturalizante, o viceversa.

6. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 5, caracterizado por que dicho agente desnaturalizante está seleccionado de hidróxido de sodio, cloruro de guanldlnio, urea o disolvente orgánico.

7. Procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que dicho cambio inerte es un cambio sigmoide.

8. Procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que dicho cambio inerte es un cambio con el tiempo.