Anticuerpos anti-properdina.

Un anticuerpo anti-properdina o parte de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a SEQ ID NO:

2 y bloquea la activación alternativa de la vía de alternativa sin afectar a la activación de la vía clásica en un mamífero, para uso en un método para mejorar una enfermedad o afección asociada con una activación excesiva o incontrolada del complemento de la vía alternativa en el mamífero.

Anticuerpos anti-properdina CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a anticuerpos específicos para properdina y al uso de tales anticuerpos para inhibir la función de la vía alternativa del complemento en un mamífero.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El sistema del complemento es el responsable de iniciar y amplificar la respuesta inflamatoria a la infección microbiana y otras lesiones agudas. Una activación inapropiada del complemento ha sido implicada en situaciones patológicas. Por ejemplo, el sistema del complemento ha sido implicado en la contribución a la patogénesis de varias afecciones agudas y crónicas, incluyendo la aterosclerosis, isquemia-reperfusión después de un infarto de miocardio agudo, nefritis púrpura de Henoch Schonlein, vasculitis compleja inmune, artritis reumatoide, arteritis, aneurisma, accidente cerebrovascular, cardiomiopatía, choque hemorrágico, lesión por aplastamiento, insuficiencia orgánica múltiple, choque hipovolémico e isquemia intestinal, rechazo de trasplantes, cirugía cardiaca, PTCA, aborto espontáneo, lesión neuronal, lesión de la médula espinal, miastenia grave, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, síndrome de Guillain Barre, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, síndrome de dificultad respiratoria aguda, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, lesión pulmonar aguda relacionada con la transfusión, lesión pulmonar aguda, enfermedad de Goodpasture, infarto de miocardio, inflamación de baipás post-cardiopulmonar, baipás cardiopulmonar, choque séptico , rechazo de trasplantes, xenotrasplante, lesiones por quemaduras, lupus eritematoso sistémico, nefritis membranosa, enfermedad de Berger, psoriasis, penfigoide, dermatomiositis, síndrome anti-fosfolípido, enfermedad inflamatoria del intestino, hemodiálisis, leucoféresis, plasmaféresis, precipitación LDL de oxigenación de la membrana extracorpórea inducida por heparina, oxigenación por membrana extracorpórea y degeneración macular.

El complemento se puede activar a través de tres cascadas enzimáticas distintas, a las que se alude como la "clásica", "lectina/MBL" y vías "alternativas" (CP, MBL, y AP, respectivamente). Estas vías se muestran esquemáticamente en la Fig. 1. La CP generalmente se desencadena por anticuerpos unidos a un patógeno extraño. Por lo tanto, esta vía requiere una exposición previa a ese patógeno para la generación de anticuerpos específicos. Existen tres proteínas plasmáticas implicadas específicamente en el CP: C1, C2 y C4. MBL es una variación de CP, y se activa por la presencia de lectina/MASP-2, pero la cascada es similar a la CP.

En contraposición con la CP y MBL, la AP se desencadena espontáneamente por superficies extrañas (p. ej., bacterias, levaduras, tejido dañado) u otras superficies anormales tales como las superficies artificiales de dispositivos médicos (p. ej., la superficie de una máquina en donde se hace circular la sangre). Existen tres proteínas plasmáticas específicas para AP: factores B, D y P (properdina). Las tres vías convergen en C3 y comparten proteínas C3 a C5-9 que están implicadas en las últimas etapas de las cascadas de activación. Anafilotoxinas C3a y C5a se producen a causa de la activación del complemento. El complejo del complemento terminal, conocido como C5b-9, también conocido como el complejo de ataque a la membrana (MAC), es el producto terminal de la vía.

La Fig. 2 ¡lustra un esquema de activación de AP. Como resultado de una activación al ralentí de C3, se genera C3b. En el esquema, se ha supuesto que se ha realizado esa activación al ralentí de C3 y la escisión de C3 genera la misma C3b activada con la C3a liberada. La C3b activada une oligómeros de properdina presentes en la sangre al complejo (P)n(C3b)n generado. Factor B que tiene mayor afinidad a C3b unida a properdina produce el complejo PC3bB, que luego es escindido por el factor D para generar PC3bBb. Esta convertasa activa escinde C3 adicional para producir C3b y liberar C3a. La misma convertasa C3 con moléculas C3b adicionales forma la convertasa C5. La convertasa C5 o la convertasa C3 escinde C5 para producir C5b y C5a. La molécula de C5b se inserta en la bicapa lipídica y forma el núcleo para la deposición de MAC.

Es bien aceptado que la vía alternativa sirve como el bucle de amplificación de las tres vías. Para bloquear la función de bucle de amplificación, se han desarrollado y testado los anticuerpos para las tres proteínas específicas para AP. Se han desarrollado anticuerpos monoclonales de factor P que inhiben ambas vías del complemento. También se han desarrollado anticuerpos anti-factor B y D. Aunque se han desarrollado anticuerpos monoclonales anti- properdina, estos anticuerpos monoclonales inhiben tanto la vía clásica como la vía alternativa (patente de EE.UU. n° 6.333.34).

Los anticuerpos policlonales desarrollados contra TSR5 demuestran que TSR5 está implicado en la unión de C3b y la activación de AP (Perdikoulis, M.V., U. Kishore y K.B. Reid, Expression and y characterisation of the

thrombospondin type I repeats of human properdin, Biochim Biophys Acta, 21. 1548 (2): págs. 265-77). Mientras que la inhibición de la unión de P y la hemolisis AP era sólo del 4-5%, estos autores sugirieron que TSR5 es importante para la función de properdina. Como comparación, los anticuerpos policlonales contra TSR1 y TSR2 demostraron una falta de inhibición en ambos ensayos. Esta publicación enseña que TSR1 y TSR2 son funcionalmente no activos.

Un estudio más reciente enseña que se requiere la inhibición total de la unión de properdina a C3b para la inhibición de la C3a, C5a y MAC (patente de EE.UU. n° 6.333.34). Esta invención enseña que dichos anticuerpos inhiben la vía clásica del complemento directamente al inhibir la actividad convertasa C3 de la vía clásica. Aunque la patente enseña el uso de la circulación extracorpórea como un sistema modelo con sangre humana entera, estos estudios no enseñan el efecto de anticuerpos monoclonales anti-properdina en la activación de monocitos y plaquetas. Se sabe que los monocitos activados liberan TNF y forman conjugados con plaquetas. La invención no enseña si anticuerpos monoclonales anti-properdina inhibirán la activación de monocitos y plaquetas. Se podría predecir que la inhibición de la formación de anafilotoxina debería tener efectos positivos en la inhibición de la activación celular; sin embargo, es posible que tales anticuerpos activarán las células a través de mecanismos no específicos.

La Solicitud de Patente Publicada de EE.UU. N° 26/93599 enseña que la inhibición de la unión de properdina a C3b no es esencial para la inhibición de la formación de C3b y C5b-9. En la solicitud de patente, se utilizaron anticuerpos monoclonales completamente humanos que inhibían la unión de properdina a C3b e inhibían la producción de C3a, C5a y C5b-9 en sangre entera. Por desgracia, estos anticuerpos monoclonales completamente humanos activaban plaquetas, causaron la formación de agregados de plaquetas de leucocitos y agregaron monómeros de properdina formando estructuras oligoméricas superiores haciendo a estos anticuerpos inútiles para aplicaciones terapéuticas. La solicitud de patente no proporciona evidencia / datos algunos que soporten que el anticuerpo monoclonal totalmente humano inhibe la oligomerización del monómero de properdina. Se sabe que la sangre contiene dímeros, trímeros y tetrámeros de properdina. No se han reseñado monómeros. No está claro cómo el monoclonal totalmente humano de la solicitud de patente publicada de EE.UU. N°. 26/93599 previene la oligomerización de monómero de properdina. La invención parece ser hipotética y no fundada en hechos. Además de ello, se observó que el anticuerpo monoclonal de la Solicitud de Patente Publicada de EE.UU. N° 26/93599 potenciaba en realidad la formación de oligómeros, posiblemente explicando la activación de las plaquetas observada en la circulación extracorpórea.

Molecular Immunology 37 (2) 191-21 describe que se generó un panel de anticuerpos monoclonales y que luego se rastreó en cuanto a la inhibición de la vía alternativa.

El documento WO 3/74726 A2 describe proteínas asociadas a la respuesta inmune humana (IRAP), incluidos anticuerpos, y métodos para tratar trastornos asociados con la expresión aberrante de IRAP.

Compendio de la Invención

De acuerdo con la presente invención se proporciona un anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a SEQ ID NO: 2 y bloquea la activación alternativa de la vía de alternativa sin afectar a la activación de la vía clásica en un mamífero, para uso en un método para mejorar... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti-properdina o parte de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a SEQ ID NO: 2 y bloquea la activación alternativa de la vía de alternativa sin afectar a la activación de la vía clásica en un mamífero, para uso en un método para mejorar una enfermedad o afección asociada con una activación excesiva o incontrolada del complemento de la vía alternativa en el mamífero.

2. El anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1, para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo se une específicamente a SEQ ID NO: 2 para Inhibir la activación del complemento de la vía alternativa en una relación molar de anticuerpo a Factor P de aproximadamente 1:1.

3. El anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1, para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo es para la administración in vivo o ex vivo.

4. El anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1, para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo es monoclonal.

5. El anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1, para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo es un anticuerpo quimérico, humanizado, desinmunizado o humano.

6. El anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1, para uso de acuerdo con la

reivindicación 1, en donde el anticuerpo es producido por la línea de células de hibridoma depositada bajo el número

de acceso ATCC PTA-919.

7. El anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1, para uso de acuerdo con la

reivindicación 1, en donde el anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo se une al mismo epítopo que un

anticuerpo producido por la línea de células de hibridoma depositada bajo el número de acceso ATCC PTA-919.

8. El anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1, para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende las regiones variables murinas de un anticuerpo producido por la línea de células de hibridoma depositada bajo el número de acceso ATCC PTA-919 y regiones constantes humanas.

9. El anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1, para uso de acuerdo con la reivindicación 1, comprendiendo el anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo:

un dominio variable de la cadena pesada que incluye las secuencias de aminoácidos de las tres CDRs en SEQ ID NO:7, y

un dominio variable de la cadena ligera que incluye las secuencias de aminoácidos de las tres CDRs en SEQ ID NO: 8, en donde el anticuerpo se une a properdina humana.

1. El anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1, para uso de acuerdo con la reivindicación 1, exhibiendo el anticuerpo al menos una de las propiedades funcionales: el anticuerpo inhibe la unión de properdina a C3b, el anticuerpo reduce la formación de C3bB, el anticuerpo reduce la formación de convertasa C3, el anticuerpo reduce la producción de C3a y C5a, el anticuerpo reduce la formación del complejo C5b-9, el anticuerpo reduce la activación de neutrófilos, el anticuerpo reduce la activación de monocitos, el anticuerpo reduce la activación de plaquetas o el anticuerpo reduce la formación de conjugados de leucocitos-plaquetas.

11. El anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1, para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo se une específicamente a oligómeros de properdina y fomenta la disociación de los oligómeros de properdina a monómeros de properdina.

12. El anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1, para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde regiones variables de la cadena pesada CDR1, CDR2 y CDR3 del anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprenden las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 9, 1 y 11, respectivamente, y en donde las regiones variables de la cadena ligera CDR1, CDR2 y CDR2 del anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 12, 13 y 14, respectivamente.

13. Un anticuerpo anti-properdina monoclonal o parte de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a SEQ ID NO: 2 y bloquea la activación de la vía alternativa sin afectar a la activación de la vía clásica en un mamífero, para uso como un medicamento.