Vacunas para la protección de amplio espectro contra enfermedades causadas por Neisseria meningitidis.

Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso en un método de tratamiento de un mamífero,

en donde dicho tratamiento provoca una inmunidad de amplio espectro contra una enfermedad causada por una cepa de Neisseria meningitidis, en donde dicha primera preparación comprende vesículas de membrana externa (VME), microvesículas (MV) o tanto VME como MV de una primera cepa de Neisseria meningitidis que es un miembro de un primer serogrupo, un primer serotipo y un primer serosubtipo,

en donde dicha segunda preparación comprende las VME, las MV o tanto las VME como las MV de una segunda cepa de Neisseria meningitidis que es un miembro de un segundo serogrupo, un segundo serotipo y un segundo serosubtipo, en donde dicha tercera preparación comprende las VME, las MV o tanto las VME como las MV de una tercera cepa de Neisseria meningitidis que es un miembro de un tercer serogrupo, un tercer serotipo y un tercer serosubtipo, y

en donde el serogrupo, el serotipo y el serosubtipo de la primera, la segunda y la tercera cepa de Neisseria meningitidis son diferentes, y en donde la primera, la segunda y la tercera preparación se usan en una cantidad suficiente para provocar una respuesta inmunitaria contra epítopes presentes en dichas preparaciones; comprendiendo el método la administración en serie de la primera, la segunda y la tercera preparación, de tal manera que la segunda preparación se administra después de que dicho mamífero se haya sensibilizado inmunológicamente por exposición a la primera preparación y la tercera preparación se administra después de que dicho mamífero se haya sensibilizado inmunológicamente por exposición a la segunda preparación, en donde la administración de la primera, la segunda y la tercera preparación es suficiente para provocar una respuesta inmunitaria en dicho mamífero, confiriendo dicha respuesta inmunitaria inmunoprotección contra una enfermedad causada por al menos una cepa de Neisseria meningitidis, y

en donde dichas primera, segunda y tercera preparaciones son eficaces para provocar una respuesta de anticuerpos bactericida contra al menos una cepa de Neisseria meningitidis que expresa un epítope del serosubtipo no incluido en la primera, la segunda o la tercera preparación.

Vacunas para la protección de amplio espectro contra enfermedades causadas por Neissería meningitidis Campo de la invención

Esta invención se refiere a vacunas de amplio espectro para la prevención de enfermedades causadas por Neissería meningitidis, especialmente del serogrupo B.

Antecedentes de la invención

Neissería meningitidis es un bacteria Gram-negativa que coloniza las vías respiratorias superiores de seres humanos y a nivel mundial es responsable de brotes epidémicos esporádicos y cíclicos, en especial, de meningitis y septicemia. Las tasas de ataque y morbilidad son más altas en niños de 2 años de edad.

Al igual que otras bacterias Gram-negativas, Neissería meningitidis posee generalmente una membrana citoplasmática, una capa de péptidoglucano, una membrana externa que, junto con el polisacárido capsular, constituye la pared bacteriana, y formaciones pilosas (pili) que se proyectan hacia el ambiente exterior. Estas estructuras de la superficie median en la infección e interaccionan con el sistema inmunitario del hospedador. Por ejemplo, una primera etapa en la infección con Neissería es la adherencia a células diana, que se piensa que está mediada por los pili y, posiblemente, por otras adesinas tales como Opc. Se han descrito componentes de proteínas, fosfolípidos y polisacáridos de la membrana externa que provocan una respuesta inmunitaria.

Neissería meningitidis spp. puede dividirse en grupos serológicos, tipos y subtipos basándose en reacciones con anticuerpos policlonales (Frasch, C. E. and Chapman, 1973, J. Infecí. Dis. 127: 149-154) o monoclonales (Hussein, A., MONOCLONAL ANTIBODIES AND N. MENINGITIDIS. Proefschrift. Utrecht, Países Bajos, 1988) que interaccionan con diferentes antígenos de superficie. La seroagrupación se basa en variaciones inmunológicamente detectables en el polisacárido capsular. Se conocen aproximadamente 12 serogrupos: A, B, C, X, Y, Z, 29-E, W-135, H, I, K y L (Ashton, F. E. et al., 1938, J. Clin. Microbiol. 17: 722-727; Branham, S. E., 1956, Can. J. Microbiol. 2:175- 188; Evans, A. C., 192, Lab. Bull. 1245: 43-87; Shao-Qing, et al., 1972, J. Biol. Stand. 9: 37-315; Slaterus, K W., 1961, Ant. v. Leeuwenhoek, J. Microbiol. Serol. 29: 265-271). Actualmente, el serogrupo B (MenB) es responsable de casi de la mitad al 8 % de las enfermedades invasivas descritas causadas por Neissería meningitidis.

La serotipificación se basa en diferencias antigénicas definidas por anticuerpos monoclonales sobre una proteína de membrana externa denominada Porina B (PorB). Actualmente se conocen anticuerpos que definen aproximadamente 21 serotipos (Sacchi et al., 1998, Clin. Diag. Lab. Immunol. 5: 348). La serosubtipificación se basa en variaciones antigénicas definidas por anticuerpos sobre una proteína de membrana externa denominada Porina A (PorA). Actualmente se conocen anticuerpos que definen aproximadamente 18 serosubtipos. La serosubtipificación es especialmente importante en cepas de Neissería meningitidis, donde la inmunidad puede ser específica del serosubtipo. Gran parte de la variabilidad entre las proteínas PorA se produce en dos supuestos bucles (bucles I y IV) de ocho, expuestos en la superficie. Los bucles variables I y IV se han denominado VR1 y VR2, respectivamente. Dado que existen más variantes de secuencias VR1 y VR2 de PorA aún no definidas por anticuerpos específicos, se ha propuesto una nomenclatura alternativa basada en la tipificación de secuencias de aminoácidos de VR deducida a partir de la secuenciación de ADN (Sacchi et al., 2, J. Infect. Dis. 182: 1169; véase también la página web Tipificación multilocus de secuencias (MuIti Locus Sequence Typing). También pueden utilizarse lipopolisacáridos como antígenos de tipificación, dando lugar a los inmunotipos denominados: L1, L2, etc.

Neissería meningitidis también puede dividirse en grupos o subgrupos clónales, utilizando diversas técnicas que caracterizan directa o indirectamente el genoma bacteriano. Estas técnicas incluyen la electroforesis de enzimas multilocus (MLEE), basada en la variación de la movilidad electroforática de una enzima, que refleja los polimorfismos subyacentes en un locus genético particular. Caracterizando las variantes de diversas de dichas proteínas, se puede deducir la distancia genética entre dos cepas a partir de la proporción de emparejamientos erróneos. De manera similar, la clonalidad entre dos aislados puede deducirse si los dos tienen patrones idénticos de variantes electroforéticas en el número de loci. Más recientemente, la tipificación multilocus de secuencias (MLST) ha desbancado a la MLEE como el método de elección para la caracterización de los microorganismos. El uso de la MLST, la distancia genética entre dos aislados, o la clonalidad se deducen a partir de la proporción de emparejamientos erróneos en las secuencias de ADN de 11 genes conservativos en cepas de Neissería meningitidis (Maiden etal., 1998, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 95: 314).

Dada la frecuencia y la importancia económica de las infecciones invasivas por Neissería meningitidis, no es sorprendente que se hayan efectuado muchos intentos para desarrollar tratamientos. Aunque estas infecciones pueden tratarse con antibióticos, aproximadamente del 1 al 2 % de los pacientes tratados mueren, y muchos supervivientes quedan con secuelas neurológicas permanentes, tales como amputación, pérdida auditiva neurosensorial y parálisis. Además, los microorganismos pueden desarrollar resistencia a los antibióticos. Por lo tanto, la prevención con vacunas es un modo preferible para contener la propagación de la infección.

Dado que la cápsula del polisacárido es una de las estructuras más externas de Neisseria meningitidis patógena, esta ha sido un enfoque primario de intentos para desarrollar vacunas. Se han usado diferentes preparaciones de polisacáridos capsulares para controlar los brotes y epidemias de los serogrupos A, C, Y W-135, así como vacunas mono, di, tri o tetravalentes (Gold et al., 1969-197, Bull. WHO 45: 272-282; Gotschlich et al., 1969, J. Exp. Meal. 129: 134-136; Hankins, 1982, Proc. Soc. Biol. Med. 169: 54-57; Patente de Estados Unidos N2 6.8.589). Sin embargo, las vacunas de polisacáridos capsulares adolecen de: una mala o ninguna respuesta al polisacárido C en niños menores de 2 años; termolabilidad del polisacárido A; dificultades con respecto a la inducción de la tolerancia inmunológica después de la vacunación o revacunación con el polisacárido C (Granoff et al., 1998, J. Infect. Dis. 16: 528-53; MacDonald et al., 1998, JAMA 28: 1685-1689; MacDonald et al., 2, JAMA 283: 1826-1827). Para sortear estas propiedades inmunológicas, polisacáridos de los serogrupos A y C se han acoplado de forma covalente a proteínas transportadoras para constituir vacunas conjugadas. A diferencia de las vacunas de polisacáridos simples estas vacunas conjugadas son muy inmunogénicas en lactantes, después de la reinyección provocan aumentos realzables en las concentraciones de anticuerpos anticapsulares en suero y sensibilizan la capacidad de generar respuestas de anticuerpos memoria frente a una inyección posterior de polisacárido simple (Campagne et al. 2, Pediat. Infect. Dis. J. 19: 144-15; Maclennan et al., 2, JAMA 283: 2795-281). Las vacunas conjugadas con propiedades similares han sido muy eficaces en la prevención de enfermedades invasivas causadas por otras bacterias encapsuladas, tales como Haemophilus influenzae de tipo b, o Streptococcus pneumoniae.

El polisacárido (PS) capsular de Neisseria meningitidis serogrupo B es un inmunógeno muy pobre en seres humanos (Wyle et al., 1972, J. Infect. Dis. 126: 514-522; Zollinger, et al., 1979, J. Clin. Invest. 63: 836-834; Jennings et al., 1981, J. Immunol. 127: 14-18). Otros intentos para mejorar la inmunogenicidad del polisacárido a través de la conjugación con proteínas no han tenido éxito (Jennings et al., 1981, J. Immunol. 127: 14-18). Para mejorar la inmunogenicidad, el polisacárido de la capsula meningocócica del serogrupo B (MenB PS) se ha modificado químicamente (el grupo N-propionilado se sustituyó por el grupo N-acetilo del polisacárido B) y se ha acoplado covalentemente a un conjugado de proteína transportadora (N-Pr-MenB PS-proteína). La vacuna induce en ratones altos títulos de anticuerpos IgG que son bactericidas y protectores (este concepto se describe y se reivindica en la Patente de Estados Unidos N2 4.727,136, presentada el 23 de febrero de 1988 por Jennings et al.). Esta vacuna también es inmunogénica en primates subhumanos, induciendo anticuerpos séricos que activan la bacteriolisis mediada por complemento (Fusco et al., 1997, J. Infect. Dis. 175: 364-372). En seres humanos, se sabe que dichos anticuerpos confieren protección contra el desarrollo de enfermedades... [Seguir leyendo]

1. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso en un método de tratamiento de un mamífero, en donde dicho tratamiento provoca una inmunidad de amplio espectro contra una enfermedad causada por una cepa de Neisseria meningitidis, en donde dicha primera preparación comprende vesículas de membrana externa (VME), microvesículas (MV) o tanto VME como MV de una primera cepa de Neisseria meningitidis que es un miembro de un primer serogrupo, un primer serotipo y un primer serosubtipo,

en donde dicha segunda preparación comprende las VME, las MV o tanto las VME como las MV de una segunda cepa de Neisseria meningitidis que es un miembro de un segundo serogrupo, un segundo serotipo y un segundo serosubtipo, en donde dicha tercera preparación comprende las VME, las MV o tanto las VME como las MV de una tercera cepa de Neisseria meningitidis que es un miembro de un tercer serogrupo, un tercer serotipo y un tercer serosubtipo, y

en donde el serogrupo, el serotipo y el serosubtipo de la primera, la segunda y la tercera cepa de Neisseria meningitidis son diferentes, y en donde la primera, la segunda y la tercera preparación se usan en una cantidad suficiente para provocar una respuesta inmunitaria contra epítopes presentes en dichas preparaciones; comprendiendo el método la administración en serie de la primera, la segunda y la tercera preparación, de tal manera que la segunda preparación se administra después de que dicho mamífero se haya sensibilizado inmunológicamente por exposición a la primera preparación y la tercera preparación se administra después de que dicho mamífero se haya sensibilizado inmunológicamente por exposición a la segunda preparación, en donde la administración de la primera, la segunda y la tercera preparación es suficiente para provocar una respuesta inmunitaria en dicho mamífero, confiriendo dicha respuesta inmunitaria inmunoprotección contra una enfermedad causada por al menos una cepa de Neisseria meningitidis, y

en donde dichas primera, segunda y tercera preparaciones son eficaces para provocar una respuesta de anticuerpos bactericida contra al menos una cepa de Neisseria meningitidis que expresa un epítope del serosubtipo no incluido en la primera, la segunda o la tercera preparación.

2. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 en el que la primera preparación comprende las MV y la segunda preparación comprende las MV.

3. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2 en el que la tercera preparación comprende las MV.

4. Una primera, una segunda y tercera preparación para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 o 2 en el que la tercera preparación comprende las VME.

5. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la primera preparación comprende las VME y la segunda preparación comprende las VME.

6. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la primera preparación comprende las MV y la segunda preparación comprende las VME.

7. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la primera preparación comprende las VME y la segunda preparación comprende las MV.

8. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con cualquier reivindicación anterior en donde la inmunoprotección conferida es contra al menos cuatro cepas de Neisseria meningitidis.

9. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con la reivindicación 8 en donde la inmunoprotección conferida es contra más de una cepa de Neisseria meningitidis del serogrupo B.

1. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 en donde la inmunoprotección conferida es contra un miembro de Neisseria meningitidis del serogrupo B.

11. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con cualquier reivindicación anterior en donde las preparaciones de VME y/o de MV se administran junto con excipientes farmacéuticamente aceptables.

12. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con la reivindicación 11 en donde los excipientes comprenden un adyuvante.

13. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con la reivindicación 12 en donde el adyuvante se selecciona del grupo que consiste en fosfato de aluminio, hidróxido de aluminio, alumbre y MF59.

14. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con cualquier reivindicación anterior en donde la administración se realiza por inyección, por aerosol o por vía oral.

15. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con cualquier reivindicación anterior en donde el mamífero es un ser humano.

16. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con la reivindicación 15 en donde 5 el ser humano es inmunológicamente intacto con respecto a Neisseria meningitidis.

17. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con la reivindicación 16 en donde el ser humano es un niño menor de cinco años.

18. Una primera, una segunda y una tercera preparación para su uso de acuerdo con una cualquiera de las

reivindicaciones 1 a 17 en donde dichas preparaciones se prepararan por extracción con detergente utilizando un detergente distinto de desoxicolato.