Vacunas incluyendo antígeno de cuatro cepas de virus de la gripe.

Una vacuna que comprende una hemaglutinina de: (i) una cepa H1N1;

(ii) una cepa H3N2; (iii) una cepa de tipo B / Victoria / 2 / 87; y (iv) una cepa de tipo B / Yamagata / 16 / 88, en la que los virus se cultivaron en un cultivo celular y las cepas no han sido subcultivadas a través de huevos en cualquier fase entre el aislamiento del paciente y la replicación en el cultivo celular, y en la que la vacuna además comprende un adyuvante que comprende una emulsión de aceite en agua.

Vacunas incluyendo antfgeno de cuatro cepas de virus de la gripe CAMPO TÉCNICO

Esta Invención se encuentra en el campo de las vacunas para proteger contra la Infección por virus de la gripe, y en particular, vacunas que Incluyen antlgenos derivados de más de tres cepas virales.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

El solicitante se ha dado cuenta de que muchas de las deficiencias en las vacunas trivalentes actuales son causadas por el uso de huevos durante su fabricación. La fabricación a base de huevo no está bien adaptada para el aumento de la cantidad de antlgeno necesaria en una época en particular, tanto en términos de tiempo de espera como de capacidad. La fabricación actual a base de huevo necesita que el virus se adapte a crecer en huevos, lo cual añade una fase que consume tiempo en el comienzo de la fabricación y presenta una presión de selección que reduce el aparejamiento entre las cepas de la vacuna y las cepas circulantes. Por otra parte, las cepas del virus de la gripe B no crecen bien en los huevos, y las recomblnantes de alto crecimiento no se encuentran disponibles. El requisito indispensable para el crecimiento del huevo en los procedimientos actuales está bien demostrado por el malapareamiento de H3N2 en la temporada 23 / 4, que se presentaron sobre todo porque las cepas similares a Fuji pertinentes no se habían aislado originalmente utilizando huevos. Para superar estas deficiencias, se puede utilizar el cultivo celular para el crecimiento viral en lugar de huevos. Por lo tanto, las vacunas de la invención se producen a partir de virus que crecen en cultivo celular en vez de en huevos, como se define en las reivindicaciones.

La incapacidad de la tecnología a base de huevo para aumentar la cantidad de antígeno producido en una temporada en particular se podría también resolver mediante la reducción de la cantidad de antígeno en una vacuna. Una forma de reducir la cantidad es utilizar un adyuvante. Por lo tanto, las vacunas de la invención incluyen un adyuvante que comprende una emulsión de aceite en agua.

En algunas realizaciones, las vacunas contienen sustancialmente la misma masa de hemaglutinina (HA) para cada una de las cepas de virus de la gripe (por ejemplo, aproximadamente 1: 1: 1: 1). La masa de HA por cepa puede ser de 15 pg por dosis, o en algunas realizaciones puede ser menor de 15 pg por dosis (por ejemplo, menos de 1 pg por dosis) o más de 15 pg por dosis (por ejemplo, > 2 pg / dosis,> 25 pg / dosis, etc., como aproximadamente 3 pg / dosis). En otras realizaciones, las vacunas contienen diferentes masas de HA para diferentes cepas.

En algunas realizaciones, las vacunas no son vacunas no divididas o de virus inactivos completos, sino que son vacunas de glicoproteínas vivas o purificadas.

La invención también proporciona un método para la preparación de una vacuna de la invención que comprende las etapas de: (i) cultivo de cuatro cepas diferentes de virus de la gripe en cultivo celular; (li) preparación de una composición de antígeno de cada uno de los virus cultivados en la etapa (i); y (i¡¡) combinación de las composiciones de antígeno (por ejemplo, con un portador farmacéutico), para dar lugar a la vacuna.

Selección de la cepa

Las cepas de virus de la gripe para su uso en vacunas cambian de temporada a temporada. En el actual período entre pandemias, las vacunas trivalentes incluyen dos cepas de la gripe A (H1N1 y H3N2) y una cepa de gripe B. Las vacunas de la invención incluyen, al menos, cuatro cepas de virus de la gripe. Las diferentes cepas se cultivan, normalmente, por separado y se mezclan después de que los virus hayan sido cosechados y se hayan preparado los antígenos. Por lo tanto, un proceso de la invención puede incluir la etapa de mezclar los antígenos de más de una cepa de la gripe.

El virus de la gripe A muestra actualmente dieciséis subtipos HA: H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H1, H11, H12, H13, H14, H15 y H16. La invención puede proteger contra uno o más subtipos NA del virus de la gripe A N1, N2, N3, N4, N5, N6, N7, N8 o N9. En las vacunas que incluyen sólo dos cepas del virus gripal, estas serán una cepa H1N1 y una cepa H3N2.

El virus de la gripe B no muestra en la actualidad subtipos de HA diferentes, pero las cepas del virus de la gripe B se dividen en dos linajes distintos. Estos linajes surgieron a finales de la década de 198 y tienen HAs que pueden ser antlgénlca y / o genéticamente distintos unos de otros [3], Las cepas del virus de la gripe B actuales son del tipo B / Victoria / 2 / 87 o del tipo B / Yamagata /16 / 88. Cuando una vacuna de la invención incluye dos cepas de la gripe B, se incluirán una cepa de tipo B / Victoria / 2 / 87 y una cepa de tipo B / Yamagata / 16 / 88. Estas cepas se distinguen normalmente antigénicamente, pero se han descrito las diferencias en las secuencias de aminoácidos para distinguir los dos linajes, por ejemplo, las cepas de tipo B / Yamagata /16 / 88 a menudo (pero no siempre) tienen proteínas HA con deleciones en el residuo del aminoácido 164, numerados en relación con la secuencia de 'Lee4' HA [4],

Por lo tanto, las vacunas de la invención incluyen hemaglutininas de: (I) una cepa H1N1; (ii) una cepa H3N2; (iii) una cepa de tipo B / Victoria / 2 / 87; y (iv) una cepa de tipo B / Yamagata /16 / 88.

En algunas realizaciones de la invención, al menos dos de las cepas del virus de la gripe B pueden tener hemaglutininas distintas pero neuraminidasas similares. Por ejemplo, ambas pueden tener una neuraminidasa de tipo B / Victoria / 2 / 87 [5] o pueden tener tanto una neuraminidasa de tipo B / Yamagata /16 / 88. Por ejemplo, dos neuraminidasas de tipo B / Victoria / 2 / 87 pueden tener una o más de las siguientes características secuenciales: (1) no una serina en el residuo 27, sino preferiblemente una leucina; (2) no un glutamato en el residuo 44, sino preferiblemente una lisina; (3) no una treonina en el residuo 46, sino preferiblemente una isoleucina; (4) no una prolina en el residuo 51, sino preferiblemente una serina; (5) no una arginina en el residuo 65, sino preferiblemente una histidina; (6) No una glicina en el residuo 7, sino preferiblemente un glutamato; (7) no una leucina en el residuo 73, sino preferiblemente una fenilalanina; y / o (8) no una prolina en el residuo 88, sino preferiblemente una glutamina. Del mismo modo, en algunas realizaciones, la neuraminidasa puede tener una deleción en el residuo 43, o puede tener una treonina; una deleción en el residuo 43, que surge de una deleción de trinucleótidos en el gen de NA, se ha descubierto como una característica de las cepas de tipo B / Victoria / 2 / 87, aunque las cepas recientes han recuperado Thr - 43 [5], Por el contrario, por supuesto, dos neuraminidasas de tipo B / Yamagata /16 / 88, por ejemplo S27, E44, T46, P51, R65, G7, L73, y / o P88 pueden compartir características opuestas. Estos aminoácidos están numerados en relación con la secuencia de la neuraminidasa 'Lee4' [6], Por lo tanto, una vacuna contra la A - A - B - B de la invención puede utilizar dos cepas B que son antigénicamente diferentes de HA (una de tipo B / Yamagata /16 / 88, una de tipo B / Victoria 121 87), pero están relacionados por NA (ambas de tipo B / Yamagata/16/88, o ambas de tipo B / Victoria 12187).

La invención no se limita a las vacunas 4 - valentes, y abarca vacunas 5 - valente, 6 - valente, 7 - valente, etc. Un ejemplo de vacuna 5 - valente puede incluir tres cepas de la gripe A (por ejemplo, una cepa H1 y dos cepas H3, como se discutió anteriormente), además de dos cepas de la gripe B. Por ejemplo, una vacuna A-A-A-B-B puede incluir antígenos (preferentemente hemaglutininas) de: (i) una cepa H1N1; (ii) una cepa H3N2 de tipo A / Moscow /1 / 99; (iii) una cepa H3N2 de tipo A / Fujian / 411 / 22; (iv) una cepa de tipo B / Victoria / 2 / 87; y (v) una cepa de tipo B / Yamagata /16 / 88. Una vacuna A-A-A-A-B-B puede incluir antígenos (preferentemente hemaglutininas) de: (i) una cepa H1N1; (ii) una cepa H3N2 de tipo A / Moscow /1 / 99; (iii) una cepa H3N2 de tipo A / Fujian / 411 / 22; (Iv) una cepa H5 del virus de la gripe, tal como una cepa H5N1; (v) una cepa de tipo B / Victoria / 2 / 87; y (vi) una cepa de tipo B / Yamagata /16 / 88.

Un virus de la gripe utilizado con la invención puede ser una cepa de genoma recombinante, y puede obtenerse mediante técnicas de genética inversa. Las técnicas de genética inversa [por ejemplo, de 7 a 11] permiten que los virus de gripe con segmentos de genoma deseados se preparen in vitro utilizando plásmidos. Normalmente, se trata de expresar (a) moléculas de ADN que codifican moléculas de ARN viral deseado, por ejemplo a partir de promotores de poli o de bacteriófagos promotores de ARN polimerasa, y (b) moléculas de ADN que codifican las proteínas... [Seguir leyendo]

1. Una vacuna que comprende una hemaglutinina de: (i) una cepa H1N1; (ii) una cepa H3N2; (¡ü) una cepa de tipo B / Victoria / 2 / 87; y (iv) una cepa de tipo B / Yamagata /16 / 88, en la que los virus se cultivaron en un cultivo celular y las cepas no han sido subcultivadas a través de huevos en cualquier fase entre el aislamiento del paciente y la replicación en el cultivo celular, y en la que la vacuna además comprende un adyuvante que comprende una emulsión de aceite en agua.

2. La vacuna de la reivindicación 1, en la que los antlgenos son viriones completos, viriones divididos, o antlgenos de superficie purificada.

3. La vacuna de las reivindicaciones 1 o 2, en la que las cepas se cultivaron en células MDCK.

4. La vacuna de cualquiera de las reivindicaciones 1 - 3, en la que la emulsión de aceite en agua comprende gotltas de submlcrones.

5. La vacuna de la reivindicación 4, en la que el aceite comprende escualeno.

6. La vacuna de cualquier reivindicación precedente, que contiene sustancialmente la misma masa de hemaglutinina para cada una de las cuatro cepas del virus de la gripe.

7. Un kit para la preparación de la vacuna de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, comprendiendo: (i) un primer envase que contiene una vacuna de la gripe que comprende hemaglutinina de la cepa H1N1, una cepa H3N2, y una primera cepa del virus de la gripe B; y (¡I) un segundo envase que contiene una vacuna de la gripe que comprende hemaglutinina de una segunda cepa del virus de la gripe B, en el que una de las primeras y segundas cepas del virus de la gripe B es una cepa de tipo B / Victoria / 2 / 87 y la otra es una cepa de tipo B / Yamagata /16 / 88.

8. Un kit de preparación de la vacuna de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, comprendiendo (I) un primer componente que comprende los antígenos del virus de la gripe, en un primer envase; y (¡I) un segundo componente que comprende una emulsión de aceite en agua, en un segundo envase.

9. Los antígenos de las cuatro cepas diferentes del virus de la gripe comprenden hemaglutinina para su uso en la producción de una respuesta Inmune en un paciente, en los que las cuatro cepas incluyen; (I) una cepa H1N1; (ii) una cepa H3N2; (¡ü) una cepa de tipo B / Victoria / 2 / 87; y una cepa de tipo B / Yamagata / 16/88, en la que los virus se cultivan en un cultivo celular y las cepas no se han subcultivado a través de huevos en cualquier fase entre el aislamiento de un paciente y la replicación en el cultivo celular, y los antígenos son adyuvantados con una emulsión de aceite en agua.

1. Un método de preparación de una vacuna que comprende: una cepa H1N1; (¡I) una cepa H3N2; (¡ü) una cepa de tipo B / Victoria / 2 / 87; y (¡v) una cepa de tipo B / Yamagata / 16 / 88, en el que el método comprende los pasos de:

a) cultivar cuatro cepas diferentes del virus de la gripe en un cultivo celular;

b) preparar una composición de antígeno de cada uno de los virus cultivados en el paso (a), en la que la composición de antígeno Incluye hemaglutinina; y

c) combinar las composiciones de antígeno con un portador farmacéutico, para dar la vacuna;

en el que las cepas no han sido subcultlvadas a través de huevos en cualquier fase entre el aislamiento de un paciente y la replicación en el cultivo celular, y la vacuna comprende además un adyuvante que comprende una emulsión de aceite en agua.