Terapia de combinación de un anticuerpo anti-CD20 de tipo II con un inhibidor de proteasoma.

El uso de un anticuerpo anti-CD20 de tipo II para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un cáncer que expresa CD20,

en el que el cáncer que expresa CD20 es un linfoma no Hodgkin de células B (NHL) en combinación con un inhibidor del proteasoma, caracterizado porque dicho anticuerpo anti-CD20 de tipo II es un anticuerpo B-Lyl humanizado y entre el 40% y el 60% de los oligosacáridos de la región Fc de dicho anticuerpo anti- CD20 de tipo II no están fucosilados; y en el que el anticuerpo B-Lyl humanizado se caracteriza en que comprende una secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada (VH) de Id. de Sec. Nº: 7, y en que comprende una secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera (VL) de Id. de Sec. Nº: 20; y en donde dicho inhibidor del proteasoma es bortezomib.

Terapia de combinación de un anticuerpo anti-CD2 de tipo II con un inhibidor de proteasoma

La presente invención se dirige al uso de un anticuerpo anti-CD2 de tipo II para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer, especialmente de cánceres que expresan CD2 en combinación con un inhibidor del proteasoma.

Antecedentes de la invención

La molécula CD2 (también llamado antígeno de diferenciación restringido a linfocitos B humanos o Bp35) es una proteína transmembrana hidrofóbica con un peso molecular de aproximadamente 35 kD situada en linfocitos B maduros y pre-B (Valentine, et al., J. Biol. Chem. 264 (19) (1989) 11282-11287, y Einfield, D.A., et al., EMBO J. 7(3) (1988) 711-717). CD2 se encuentra en la superficie de más del 9% de las células B de sangre periférica o de órganos linfoides y se expresa durante el desarrollo temprano de las células pre-B y permanece hasta la diferenciación en células plasmáticas. CD2 está presente tanto en células B normales asi como en células B malignas. En particular, CD2 se expresa en más del 9% de los linfomas de células B no Hodgkin (NHL) (Anderson, K.C., et al., Blood 63(6) (1984) 1424-1433), pero no se encuentra en las células madre hematopoyéticas, células pro-B, células plasmáticas normales u otros tejidos normales (Tedder, T.F., et al., J, Immunol. 135(2) (1985) 973-979).

La región carboxilo-terminal de 85 aminoácidos de la proteína CD2 se encuentra en el citoplasma. La longitud de esta región contrasta con el de otras estructuras de superficie de células B específicas tales como las cadenas pesadas de IgM, IgD, y IgG o antígenos de histocompatibilidad de clase 11a o cadenas G, que tienen regiones intracitoplasmáticas relativamente cortas de 3, 3, 28, 15 y 16 aminoácidos, respectivamente (Komaromy, M., et al., NAR 11 (1983) 6775-6785). De los últimos 61 aminoácidos carboxilo-terminal, 21 son residuos ácidos, mientras que sólo 2 son básicos, lo que indica que esta región tiene una fuerte carga negativa neta. El No. de acceso de GenBank es NP-6965. Se cree que CD2 podría estar implicado en la regulación de un paso temprano en el proceso de activación y diferenciación de células B (Tedder, T.F., et al., Eur. J. Immunol. 16 Tema 8 (1986) 881-887) y podría funcionar como un canal de iones de calcio (Tedder, T.F., et al., J. Cell. Biochem. 14D (199) 195).

Existen dos tipos diferentes de anticuerpos anti-CD2 que difieren significativamente en su modo de unión a CD2 y las actividades biológicas (Cragg, M.S., et al, Blood 13 (24) 2738-2743;. y Cragg, M.S., et al., Blood, 11 (23) 145-152). Los anticuerpos de Tipo I, como por ejemplo, rituximab, son potentes en la citotoxicidad mediada por complemento, mientras que los anticuerpos de tipo II, como por ejemplo, Tositumomab (B1), anticuerpos 11B8, AT8 o B-Ly1 humanizados, inician de manera efectiva la muerte de la célula diana a través de la apoptosis independiente de caspasa con la exposición de fosfatidilserina concomitante.

Las características comunes de los anticuerpos anti-CD2 de tipo I y tipo II se resumen en la Tabla 1.

Tabla 1:

El proteasoma 26S, también conocido como el complejo de proteinasa multicatalítico, es un complejo de peso molecular inusualmente alto (26S) que se encuentra tanto en el citoplasma y el núcleo de una amplia variedad de tipos de células eucariotas. El proteasoma se compone del núcleo catalítico central 2S y dos tapas reguladoras 19S. Las tapas reguladoras 19S se encuentran en cada extremo del complejo 2S y regulan la entrada de sustratos en el núcleo central de catalizador en forma de barril. Las tapas 19S juegan un papel en el reconocimiento de sustratos que han sido objeto de degradación por la adición de múltiples moléculas del polipéptido ubiquitina de 8,5 kDa (revisado por ejemplo, en Coux, O., Tanaka, K. y Goldberg, A., Ann. Rev. Biochem. 65 (1996) 81-847; Voges, D., Annu Rev Biochem. 68 (1999) 115-168 y Kisselev, A.L., et al., Chem Biol Vol. 8 (8) (21) 739-758). Después de facilitar la eliminación de las moléculas de ubiquitina del sustrato, la tapa 19S promueve el despliegue de la proteína sustrato cuando entra en el núcleo catalítico central.

El proteasoma 26S está altamente conservado evolutivamente, después de haber sido encontrado en todas las células eucariotas estudiadas, y puede constituir hasta el 1,% de la proteína total en homogeneizados de tejido. El proteasoma se ha encontrado tanto en el citoplasma y núcleo de las células, lo que sugiere un papel funcional en

ambos compartimentos (Tanaka, K., et al., J. Cell Physiol. 139 (1989) 34-41; Amsterdam, A., et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 9 (1993) 99-13.

Los primeros estudios sobre el proteasoma conducen a la delimitación de cinco actividades proteollticas diferentes, cada una asociada con un componente distinto del complejo (Wilk, S., y Orlowski, M., J Neurochem 35 (198) 1172- 1182.; Wilk, S., y Orlowski, M., J Neurochem 4 (1983) 842-849; Orlowski, M., y Wilk, S., Blochem. Blophys. Res. Comm. 11 (1981) 814-822). Las tres actividades principales son similares en la especificidad de la quimotripsina, pepsina y peptidilglutamil peptidasa. Las otras dos actividades descritas exhiben una preferencia para la escisión de enlaces peptídicos en el lado carboxilo de los aminoácidos de cadena ramificada y hacia enlaces peptídicos entre los aminoácidos neutros de cadena corta (Orlowski, M., Biochemistry 29 (199) 1289-297).

Ahora está bien establecido que el proteasoma es un gran sistema proteolítico extralisosomal involucrado en las vías proteolíticas esenciales para diversas funciones celulares como la división celular, el procesamiento de antígenos y la degradación de las proteínas reguladoras de vida corta, como oncoproteínas, factores de transcripción y ciclinas (Ciechanover, A., Cell 79 (1994) 13-21; Palombell, V.J., Rando, D.O., Goldberg, A.L. y Maniatis, T., Cell 78 (1994) 773-785). Dado que el proteasoma desempeña un papel clave en la degradación ordenada de las ciclinas durante la progresión del ciclo celular, desempeña un papel en la división celular. Estudios adicionales demostraron que la interrupción en cualquiera de 12 de los 13 genes que codifican subunidades del proteasoma de levadura da como resultado una detención en la proliferación celular o una incapacidad para degradar las proteínas, sugiriendo también un papel para el proteasoma en el crecimiento celular (Fujiwara, T., et al., J. Biol. Chem. 265 (199) 1664- 1613; Beynon, Int Commlttee on Proteolysis News Letter, Enero, 1-2 (1994)). Por lo tanto la inhibición del proteasoma puede ser útil en el tratamiento de enfermedades que resultan de la división celular aberrante como el cáncer.

La observación de que la proteólisis proteasomal mediada por ubiquitina juega un papel crítico en la activación de NFkB se podría aprovechar clínicamente por la utilización de inhibidores dirigidos hacia el proteasoma. La formación de la forma activa de NFkB requiere la proteólisis mediada por proteasoma de p 15, el precursor inactivo de NFkB.

Además, la forma procesada de NFkB (p65 / p5) se mantiene en el citosol como un complejo inactivo unido a la proteína inhibidora IkB. Diversos estímulos activan NFkB mediante el inicio de la vía de señalización que conduce a la degradación de IkB mediada por el proteasoma. La activación anormal de NFkB seguida por la estimulación de la síntesis de citoquinas ha sido observada en una variedad de enfermedades inflamatorias e infecciosas 2. La activación de NFkB es también esencial para la anglogénesis y para la expresión de moléculas de adhesión, y por lo tanto los inhibidores del proteasoma también pueden tener utilidad en el tratamiento de enfermedades asociadas con el sistema vascular.

1. El uso de un anticuerpo anti-CD2 de tipo II para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un cáncer que expresa CD2, en el que el cáncer que expresa CD2 es un llnfoma no Hodgkin de células B (NHL) en combinación con un Inhibidor del proteasoma, caracterizado porque dicho anticuerpo anti-CD2 de tipo II es un anticuerpo B-Lyl humanizado y entre el 4% y el 6% de los oligosacárldos de la región Fe de dicho anticuerpo anti- CD2 de tipo II no están fucosllados; y en el que el anticuerpo B-Lyl humanizado se caracteriza en que comprende una secuencia de aminoácidos de la reglón variable de la cadena pesada (VH) de Id. de Sec. N°: 7, y en que comprende una secuencia de aminoácidos de la reglón variable de la cadena ligera (VL) de Id. de Sec. N°: 2; y en donde dicho Inhibidor del proteasoma es bortezomlb.

2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque se administran uno o más agentes citotóxicos adicionales, agentes quimioterapéuticos o anticancerígenos, o compuestos que mejoran los efectos de tales agentes.

3. Un anticuerpo anti-CD2 de tipo II para su uso en el tratamiento de un cáncer que expresa CD2, en el que el cáncer que expresa CD2 es un linfoma no Hodgkin de células B (NHL) en combinación con un inhibidor del proteasoma caracterizado porque dicho anticuerpo anti-CD2 de tipo II es un anticuerpo humanizado B-Lyl y entre el 4% y el 6% de los oligosacáridos de la región Fe de dicho anticuerpo anti-CD2 de tipo II no están fucosilados; y en el que el anticuerpo B-Lyl humanizado se caracteriza en que comprende una secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada (VH) de Id. de Sec. N°: 7, y en que comprende una secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera (VL) de Id. de Sec. N°: 2.

4. El anticuerpo anti-CD2 de tipo II para su uso de acuerdo con la reivindicación 3, se caracteriza porque se administran uno o más agentes citotóxicos adicionales, agentes quimioterapéuticos o anticancerígenos, o compuestos que mejoran los efectos de tales agentes.