Péptidos para atenuar la liberación de mediadores inflamatorios.

Un péptido para uso en el tratamiento de enfermedades inflamatorias del intestino,

enfermedades de la piel, enfermedades autoinmunes, o un síndrome de dolor, donde dicho péptido se selecciona del grupo que consiste en:

acetil-GAQFSKTAAK (SEC ID NO: 106), acetil-GAOFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (SEC ID NO: 1), acetil- GAQFSKTAAKGEAAAERPGE (SEC ID NO: 11), acetil-GAQFSKTAAKGEAAAE (SEC ID NO: 37), acetil- AKGEAAAERPGEAAVA (SEO ID NO: 45), acetil-GAQFSKTAAKGE (SEC ID NO: 79), acetil-AAAERPGEAAVA (SEC ID NO: 91), acetil-GAOFSKTAA (SEC ID NO: 121), acetil-TAAKGEAA (SEC ID NO: 143), acetil-RPGEAAVA (SEC ID NO: 153), acetil-AKGE (SEC ID NO: 219), acetil-GAOFSKTAAAGE (SEC ID NO: 239), acetil-GAOFSKTAAA (SEC ID NO: 248), acetil-GAQFSKTAAKGE-NH2 (SEC ID NO: 79), acetil-AQFSKTAAKGE-NH2 (SEC ID NO: 93), acetil- QFSKTAAKGE-NH2 (SEC ID NO: 108), acetil-FSKTAAKGE-NH2 (SEC ID Nº: 124), acetil-SKTAAKGE-NH2 (SEC ID NO: 141), y acetil-AKGE-NH2 (SEC ID NO: 219).

Péptidos para atenuar la liberación de mediadores inflamatorios Campo de la invención

La presente invención se refiere a péptidos de uso para atenuar (o inhibir o reducir) la liberación estimulada de mediadores de la inflamación a partir células inflamatorias durante la inflamación. La presente invención también se refiere al uso de estos péptidos para uso en la modulación un mecanismo de señalización intracelular que regula la secreción de mediadores de la inflamación por las células inflamatorias.

Antecedentes de la invención

Los leucocitos inflamatorios sintetizan un número de mediadores de la inflamación que están aislados intracelularmente y se almacenan en gránulos unidos a la membrana citoplásmica. Ejemplos de tales mediadores incluyen, pero no se limitan a, la mieloperoxidasa [MPO] en los neutrófilos (véase, por ejemplo Borregaard N, Cowland JB. Granules of the human neutrophilic polymorphonuclear leukocyte. Blood 1997; 89:353-3521), la peroxidasa de eosinófilos [EPO] y la proteína básica principal [MBP] en los eosinófilos (véase, por ejemplo, Gleich G J. Mechanisms of eosinophil-associated inflammation. J Allergy Clin Immunol 2;. 15:651-663), la lisozima en monocitos/macrófagos (véase, por ejemplo, Hoff T, Spencker T, Emmendoerffer A.,Goppelt-Struebe M. Effects of glucocorticoids on the TPA-induced monocytic differentiation. J Leukoc Biol 1992;52:173-182; and Balboa M A, Saez Y, Balsinde J. Calcium-independent phospholipase A2 is required for lysozyme secretion in U937 promonocytes. J Immunol 23; 17:5276-528), y granzima en células asesinas naturales (NK) y linfocitos citotóxicos (véase, por ejemplo, Bochan MR, Goebel WS, Brahmi Z. Stably transfected antisense granzyme B and perforin constructs inhibit human granule-mediated lytic ability. Cell Immunol 1995; 164:234 - 239; Gong JH., Maki G, Klingemann HG. Characterization of a human cell Une (NK-92) with phenotypical and functional characteristics of activated natural killer cells. Leukemia 1994; 8:652-658; Maki G, Kiingemann HG, Martinson JA, Tarn YK. Factors regulating the cytotoxic activity of the human natural killer cell line, NK-92. J Hematother Stem Cell Res 21; 1:369 - 383; y Takayama H, Trenn G, Sltkovsky MV. A novel cytotoxic T lymphocyte activation assay. J Immunol Methods 1987; 14: 183-19). Tales mediadores se liberan en zonas de lesión y contribuyen a la inflamación y a la reparación de tejidos tales como el pulmón y otras partes. Se sabe que los leucocitos liberan estos gránulos a través de un mecanismo de exocitosis (véase, por ejemplo, Burgoyne RD, Morgan A. Secretory granule exocytosis. Physiol Rev 23; 83:581-632; y Logan MR, Odemuyiwa SO, Moqbel R. Understanding exocytosis in immune and ¡nflammatory cells: the molecular basls of mediator secretion. J Allergy Clin Immunol 23; 111: 923-932), pero las moléculas reguladoras y las rutas específicas que participan en el proceso de exocitosis no se han descrito completamente.

Varios estímulos exógenos pueden provocar la desgranulación de los leucocitos a través de una ruta que Implica la activación de la proteína qulnasa C y eventos de fosforilación posteriores (véase, por ejemplo, Burgoyne RD, Morgan A. Secretory granule exocytosis. Physiol Rev 23; 83:581-632; Logan MR, Odemuyiwa SO, Moqbel R. Understanding exocytosis ¡n Immune and ¡nflammatory cells: the molecular basis of mediator secretion. J Allergy Clin Immunol 23; 111: 923-932; Smolen JE, Sandborg RR. Ca2+-induced secretion by electropermeabilized human neutrophils: the roles of Ca2+, nucleotides and protein kinase C. Biochim Biophys Acta 199; 152:133-142; Niessen HW, Verhoeven AJ. Rol of protein phosphorylation in the degranulation of electropermeabilized human neutrophils. Biochem, Biophys. Acta 1994 ; 1223:267-273; y Naucler C, Grinstein S, Sundler R., Tapper H. Signaling to localized degranulation in neutrophils adherentto immune complexes. J Leukoc Biol. 22; 71: 71-71).

La proteína MARCKS (donde MARCKS tal y como se utiliza en la presente memoria significa "sustrato de quinasa C miristoilado rico en alanina"), es una diana ubicua de fosforilación de la proteína quinasa C (PKC), y se expresa abundantemente en los leucocitos (véase, por ejemplo, Aderem AA, Albert KA, Keum MM, Wang JK, Greengard P, Cohn ZA. Stimulus-dependent myristoylation of a major substrate for protein kinase C. Nature 1988; 332:362-364; Thelen M, Rosen A, Nairn AC, Aderem A. Regulation by phosphorylation of reversible association of a myristoylated protein kinase C substrate with the plasma membrane.Nature 1991; 351:32-322; y Hartwig JH, Thelen M, Rosen A, Janmey PA, Nairn AC, Aderem. MARCKS es una proteína de reticulación de actina filamentosa regulada por la proteína quinasa C y calcio-calmodulina.Nature 1992; 356:618-622. La proteína MARCKS está mecánicamente involucrada en un proceso de exocitosis de secreción de mucina por las células caliciformes que recubren las vías respiratorias (véase, por ejemplo, L¡ et al., J. Biol. Ch. em 21; 276:4982-499;. y Singer et al., Nat Med 24; 1: 193-196). La proteína MARCKS está miristoilada a través de un enlace amida en el aminoácido N-terminal en la secuencia de aminoácidos de la proteína MARCKS en la posición alfa-amina de la glicina que reside en el extremo N-terminal (es decir, en la posición 1) de la secuencia de aminoácidos. En las células epiteliales de las vías respiratorias, la región N-terminal miristoilada de MARCKS parece ser parte integral del proceso de secreción. Por extremo N-terminal de la proteína MARCKS se entiende el péptido de MANS que contiene miristoil- GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (SEC ID NO: 1), que son L-aminoácidos. Además, los fragmentos peptídicos del péptido de MANS descritos en la presente memoria, también están compuestos preferiblemente de L- aminoácidos. El mecanismo parece implicar la unión de MARCKS, una proteína miristoilada, a las membranas de los gránulos intracelulares.

Se ha demostrado que un péptido miristoilado N-terminal del extremo N-terminal de MARCKS bloquea la secreción de mucina y la unión de MARCKS a las membranas del gránulo de muclna en células caliciformes (véase, por ejemplo, Singer et al., Nat. Med. 24.; 1: 193-196). Este péptido contiene 24 aminoácidos de la proteína MARCKS comenzando por la glicina N-termlnal de la proteína MARCKS que está miristoilada por medio de un enlace amida y que se conoce como la secuencia alfa-N-term¡nal miristoilada (MANS); es decir, miristoll- GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (SEC ID NO: 1), véase W3/27. También Vergeres et al., J. Biochem. 1998, 33; 5-11, describe que el resto de glicina N-termlnal de las proteínas MARCKS está miristoilado a través de una reacción catalizada por miristoil CoA: proteína N-mlrlstoll transferasa (NMT).

En las enfermedades inflamatorias, tales como asma, EPOC y bronquitis crónica; en enfermedades genéticas como la fibrosis quística; en las afecciones alérgicas (atopla, la Inflamación alérgica); en las bronquiectasias; y en un número de enfermedades respiratorias agudas, Infecciosas, como la neumonía, rinitis, gripe o el resfriado común, la artritis o las enfermedades autolnmunes, las células Inflamatorias generalmente se encuentran o migran a las zonas de lesión o infección asociadas a estados de enfermedades Inflamatorias, especialmente en o hacía el tracto o las vías respiratorias de los pacientes que sufren tales enfermedades. Estas células Inflamatorias pueden contribuir en gran medida a la patología de las enfermedades a través del daño en el tejido causado por los mediadores de la inflamación liberados por estas células. Un ejemplo de tal daño o destrucción de tejidos por esta inflamación crónica se produce en pacientes con fibrosis quística donde los mediadores liberados por los neutrófilos (por ejemplo, mieloperoxldasa [MPO]) inducen la descamación del tejido epitelial de las vías respiratorias.

MARCKS, una proteína aproximadamente de 82 kD, tiene tres reglones conservadas evolutivamente (Aderem et al., Nature 1988; 332:362-364;. Thelen et al., Nature 1991; 351:32-322; Hartwig et al. , Nature 1992; 356:618-622; Seykora et al., J Biol. Chem. 1996; 271: 18797-18.82): un N-termlnal, un dominio del sitio de fosforilación (o PSD), y un dominio 2 de homología múltiple de (MH2). El ADNc de MARCKS humano y la proteína son conocidos y reportados por Harían et al., J. Biol. Chem. 1991, 266: 14399 (N° de Acceso GenBank M68956) y también por Sakai et al., Genomlcs 1992, 14: 175. Estas secuencias también se proporcionan en el documento WO /562. El extremo N-terminal, una secuencia de alfa-aminoácidos que comprende 24 restos de aminoácidos con un resto de ácido mlrístlco unido a través de un enlace amida al resto de glicina N-terminal está implicado en la unión de MARCKS a las membranas en las células (Seykora et al.,... [Seguir leyendo]

1. Un péptido para uso en el tratamiento de enfermedades inflamatorias del intestino, enfermedades de la piel, enfermedades autoinmunes, o un síndrome de dolor, donde dicho péptido se selecciona del grupo que consiste en:

acetil-GAQFSKTAAK (SEC ID NO: 16), acetil-GAOFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (SEC ID NO: 1), acetil- GAQFSKTAAKGEAAAERPGE (SEC ID NO: 11), acetil-GAQFSKTAAKGEAAAE (SEC ID NO: 37), acetll- AKGEAAAERPGEAAVA (SEO ID NO: 45), acetil-GAQFSKTAAKGE (SEC ID NO: 79), acetil-AAAERPGEAAVA (SEC ID NO: 91), acetil-GAOFSKTAA (SEC ID NO: 121), acetil-TAAKGEAA (SEC ID NO: 143), acetil-RPGEAAVA (SEC ID NO: 153), acetil-AKGE (SEC ID NO: 219), acetil-GAOFSKTAAAGE (SEC ID NO: 239), acetil-GAOFSKTAAA (SEC ID NO: 248), acetil-GAQFSKTAAKGE-NH2 (SEC ID NO: 79), acetll-AQFSKTAAKGE-NH2 (SEC ID NO: 93), acetll- QFSKTAAKGE-NH2 (SEC ID NO: 18), acetil-FSKTAAKGE-NH2 (SEC ID N°: 124), acetll-SKTAAKGE-NH2 (SEC ID NO: 141), y acetil-AKGE-NH2 (SEC ID NO: 219).

2. El péptido para uso según la reivindicación 1, donde el péptido está en una cantidad terapéuticamente eficaz reductora de la liberación de un mediador de la inflamación y reduce la cantidad de por lo menos un mediador de la Inflamación liberado por lo menos por una célula inflamatoria en comparación con la liberación de dicho mediador de la Inflamación por lo menos por una célula inflamatoria del mismo tipo que se produciría en ausencia de dicho péptido.

3. El péptido para uso según la reivindicación 2, donde dicho al menos un mediador de la Inflamación se selecciona del grupo que consiste en mleloperoxldasa (MPO), peroxidasa de eoslnófilos (EPO), proteína básica principal (MBP), llsozlma, granzima, hlstamlna, proteoglicano, proteasa, un factor qulmlotáctico, cltoqulna, un metabolito de ácido araquldónico, defenslna, la proteína bactericida que aumenta la permeabilidad (BPI), elastasa, catepsina G, catepslna B, catepsina D, beta-D-glucuronidasa, alfa-manosldasa, fosfolipasa A2, condroltln-4-sulfato, proteinasa 3, lactoferrlna, colagenasa, activador del complemento, receptor del complemento, receptor de N-formilmetionil-leucil- fenllalanlna (FMLP), receptor de lamlnlna, citocromo b558, factor qulmlotáctico de monocltos, hlstamlnasa, proteína de unión a la vitamina B12, gelatinasa, activador del plasminógeno, beta-D-glucuronidasa, y una combinación de los mismos.

4. El péptido para uso según la reivindicación 3, donde el al menos un mediador de la inflamación es la peroxidasa de eosinófilo (EPO).

5. El péptido para uso según la reivindicación 3, donde el al menos un mediador de la inflamación es lisozima.

6. El péptido para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde el péptido se combina con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

7. El péptido para uso según la reivindicación 2, donde dicha célula inflamatoria se selecciona del grupo que consiste en un leucocito, un granulocito, un neutrófilo, un basófilo, un eosinófilo, un monocito, un macrófago y una combinación de los mismos.

8. El péptido para uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la cantidad terapéuticamente eficaz reductora de la liberación de un mediador de la inflamación de dicho péptido comprende una cantidad de péptido inhibidora de la desgranulación que reduce la cantidad de por lo menos un mediador de la inflamación liberado por lo menos por una célula inflamatoria de entre 5 a 99% en comparación con la cantidad liberada por lo menos por una célula inflamatoria en ausencia del péptido.

9. El péptido para uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el péptido se administra mediante administración tópica, administración parenteral, administración rectal, administración pulmonar, administración nasal, o administración oral,

1. El péptido para uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, con una segunda molécula seleccionada del grupo que consiste en un antibiótico, un compuesto antiviral, un compuesto anti-parasitario, un compuesto anti-inflamatorio, y un inmunomodulador.

11. El péptido para uso según la reivindicación 2, donde el al menos un mediador de la inflamación es la mieloperoxidasa (MPO).