Oligonucleótidos y uso de los mismos.

Uso de un oligonucleótido para preparar un remedio para tratar un trastorno inmunomediado en un sujeto,

en el que

el oligonucleótido incluye una secuencia que se ajusta a la fórmula de (5' CCT 3')n en la que 5' CCT 3' es una unidad de repetición y n es un número entero de 2 a 50 y el trastorno inmunomediado es lupus eritematoso sistémico, septicemia, síndromes de disfunción multiorgánica o psoriasis.

Oligonucleótidos y uso de los mismos 5 CAMPO DE LA DIVULGACIÓN

[0001] La presente Invención se refiere al uso de un oligonucleótido para preparar un remedio para tratar trastornos inmunomediados.

TÉCNICA ANTERIOR

[0002] La presente invención proporciona el uso de un oligonucleótido que tiene una secuencia de nucleótidos que se ajusta a la fórmula de (5'CCT3')n, por ejemplo, la secuencia de 5'-cctcctcctcctcctcctcctcct-3' (SEQ ID NO: 1) para preparar un remedio para tratar un trastorno inmunomediado.

[0003] El sistema inmunitario protege al cuerpo humano de infecciones bacterianas, parasíticas, fúngicas, virales y del crecimiento de células tumorales. Sin embargo, la respuesta inmunitaria pueden algunas veces ser no deseada y producir trastorno inmunomediado. El trastorno incluye enfermedad autoinmunitaria, rechazo de injerto, hipersensibilidad, enfermedades asociadas al exceso de estimulación del sistema inmunitario del huésped por

microbios y enfermedad mediada por receptores similares a Toll (TLR).

[0004] Las enfermedades autoinmunitarias resultan de una respuesta inmunitaria adaptativa y respuesta inmunitaria innata o ambas contra antígenos endógenos y/o exógenos. Sustancias extrañas, derivadas de bacterias, parásitos, hongos o virus, pueden imitar a las propias proteínas y estimular el sistema inmunitario para lanzar

respuestas a una célula propia y tejido, produciendo las enfermedades que incluyen, pero no se limitan a, lupus eritematoso sistémico (LES) y artritis reumatoide. El rechazo de injerto es una consecuencia de trasplante de órgano o tejido producida por la respuesta inmunitaria en el receptor del trasplante (huésped) al órgano/tejido trasplantado. Cuando un sujeto se trasplanta con injertos que incluyen riñón, páncreas, corazón, pulmón, médula ósea, córnea y piel, el sujeto pueden lanzar una respuesta inmunitaria (rechazo) contra los injertos. La hipersensibilidad es una 30 respuesta inmunitaria inapropiada que tiene efectos perjudiciales, produciendo lesión de tejido significativa o incluso muerte. La hipersensibilidad se divide en cuatro tipos (por ejemplo, los tipos I, II, III y IV). La enfermedad asociada al exceso de estimulación del sistema inmunitario del huésped por microbios es desencadenada por la infección de virus tales como virus de la gripe y otros microbios. En el caso de la infección por el virus de la gripe y por bacterias Gram-negativas, una excesiva respuesta inmunitaria a los invasores parece ser un factor letal en pacientes. La 35 respuesta se caracteriza por la producción en exceso de citocinas. Los estudios de síndrome de choque séptico demuestran que la producción en exceso/producción anómala de citocinas puede conducir a mortalidad rápida debido a choque letal mediado por citocinas (Slifka MK y col., J Mol Med. 2000; 78(2):74-80). El choque séptico tras la infección Gram-negativa es una causa frecuente de mortalidad en pacientes críticamente enfermos. La producción exagerada de citocinas es conocida por contribuir a septicemia caracterizada por choque letal mediado por citocinas 40 (Espat NJ y col., J Surg Res. 1995 Jul; 59 (1): 153-8). Los síndromes de disfunción multiorgánica (SDMO) son una causa importante de morbilidad y mortalidad en septicemia grave y choque. El choque letal mediado por citocinas resultante de la producción en exceso de citocinas huésped se considera un mecanismo principal que conduce a SDMO (Wang H y col., Am J Emerg Med. 2008 Jul; 26 (6):711-5). La enfermedad mediada por receptores similares a Toll (TLR) es un trastorno producido por la activación de receptores similares a Toll (TLR). Los TLR son una familia 45 de receptores que reconocen estructuras moleculares derivadas de microbio (patrones moleculares asociados a patógenos o PAMP). Los TLR que expresan células inmunitarias se activan tras la unión de PAMP. Los TLR reconocen una gama de productos derivados de patógeno y activados. Lipopolisacárido (LPS) de bacteria reconocido por TLR4, ácido lipotecoico y lipopéptidos diacilados por el dímero TLR2-TLR6, lipopéptidos triacilados por el dímero TLR2-TLR1, oligonucleótido que contiene CpG (CpG ODN) sintetizado o derivado de tanto virus como 50 bacterias por TLR9, flagelina bacteriana por TLR5, zymosan por el dímero TLR2-TLR6, proteína F del virus respiratorio sincitial (VRS) por TLR4, ARN bicatenario derivado de virus (ARNbc) y poli l:C, un análogo sintético de ARNbc, por TLR3; ADN viral por TLR9, ARN viral monocatenario (VEV y virus de la gripe) por TLR7 y TLR8 (Foo Y. Liew y col., Nature Reviews Immunology. Vol 5, junio de 2005, 446-458). En los últimos años, la activación de TLR se ha conectado a la patogénesis de algunas enfermedades que incluyen septicemia, cardiomiopatía dilatada, 55 diabetes, encefalomielitis autoinmune experimental, lupus eritematoso sistémico, aterosclerosis, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica e insuficiencia orgánica (Foo Y. Liew y col., Nature Review Immunology, Vol 5, 2005, 446-458). La activación de TLR9 por ADN propio desempeña una función importante en el desarrollo de enfermedades autoinmunitarias tales como LES (Christensen SR y col., Immunity 2006; 25:417-28) y artritis reumatoide (Leadbetter EA y col., Nature 2002; 416:603-7; Boule MW y col., J Exp Med 2004; 199:1631-40).

Además, se ha informado que la elevada producción de interferones (IFN) resultantes de la activación de TLR-9 contribuye al desarrollo de lupus eritematoso sistémico (Barrat FJ y col., J Exp Med 2005; 202:1131-9; Wellmann U y col., Proc Nati Acad Sci USA 2005; 102:9258-63).

[0005] El documento W02006028742 se refiere a polinucleótidos ¡nmunorreguladores que comprenden una secuencia inmunorreguladora (IRS). Se describe que los oligonucleótldos se aplican en procedimientos para inhibir respuestas inmunitarias innatas dependientes de receptores similares a Toll (TLR) 7/8 y/o 9. Se desvelan dos tipos de nucleótidos, concretamente los oligonucleótidos que comprenden la secuencia de tetranucleótidos GGGG o que comprenden la secuencia de nucleótidos TGCNm. Se desvela que la IRS de los oligonucleótldos contiene una 10 secuencia 5'-G,C-3', al menos una secuencia de trinucleótidos TGC en o próxima al extremo 5' del polinucleótido o una secuencia 5-GGGG-3'.

[0006] Duramad, Ornar y col. desvelan en "Inhibitors of TLR-9 act on múltiple cell subsets in mouse and man in vitro and prevent death in vivo from systemic inflammation", THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY, The American

Association of Immunologists, vol: 174, n°: 9, página(s): 5193-5200 que la IRS óptima contiene un motivo GGGG.

[0007] Barrat Franck y col., "Nucleic acids of mammalian origin can act as endogenous ligands for toll-like receptors and may promote systemic lupus erythematosus", The Journal of Experimental Medicine, Rockefeller University Press, Vol: 202, n°: 8, página(s): 1131 - 1139, describen tres series de inhibidores basados en

oligonucleótidos (ODN) de la señalización de receptores similares a Toll (TLR). Estos ODN incluyen secuencias que inhiben tanto TLR7 como TLR 9.

[0008] En la presente invención, los presentes inventores desvelan un ollgonucleótldo con una secuencia de nucleótidos que se ajusta a la fórmula (5'CCT3')n, por ejemplo, la de 5'-cctcctcctcctcctcctcctcct-3' que Inhibe la

proliferación de CMSP humanas activadas por el agonista de TLR9, inhibe la producción de interferones de CMSP humanas inducidas por el agonista de TLR9, VHS-1, virus de la gripe y suero de pacientes con LES, y rescata los ratones de choque inducido por citocina. Por tanto, este oligonucleótido es útil como remedio para el tratamiento de trastornos inmunomediados.

[0009] Los oligonucleótidos de la invención inhiben la activación de TLR9. Se ha documentado que el agonista de TLR9 activa tanto respuesta inmunitaria innata como adaptativa (Arthur M. Krieg. Nature Reviews Drug Discovery, vol 5. Junio de 2006, 471-484). Los oligonucleótidos que contienen CpG (CpG ODN) son un agonista de TLR9 [D.M. Klinman, Nat. Rev., Immunol. 4 (2004) 249- 258], Los oligonucleótidos de la Invención inhiben la proliferación y producción de interferones de CMSP humanas estimuladas por CpG ODN, que Indica que el 35 oligonucleótido de la invención puede usarse como remedio para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la activación de TLR9. Debido a que se ha informado que la activación de TLR9 contribuye al desarrollo de LES (Barrat FJ y col., J Exp Med 2005; 202:1131-9; Wellmann U y col., Proc Nati Acad Sel USA 2005; 102:9258-63; Christensen SR y col., Immunity 2006; 25:417-28) y artritis reumatoide (Leadbetter EA y col., Nature 2002; 416:603- 7; Boule MW y col., J Exp Med 2004; 199:1631-40), el oligonucleótido de la Invención puede usarse como remedio 40 para el tratamiento de LES... [Seguir leyendo]

1. Uso de un oligonucleótido para preparar un remedio para tratar un trastorno inmunomediado en un

sujeto, en el que 5

el oligonucleótido incluye una secuencia que se ajusta a la fórmula de (5' CCT 3')n en la que 5' CCT 3' es una unidad de repetición y n es un número entero de 2 a 50 y el trastorno inmunomediado es lupus eritematoso sistémico, septicemia, síndromes de disfunción multiorgánica o psoriasis.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que el sujeto es un vertebrado humano o no humano.

3. El uso de la reivindicación 1, en el que el tratamiento del trastorno inmunomediado se lleva a cabo por un mecanismo seleccionado de un grupo que comprende inhibir la proliferación de células inmunitarias activadas con agonista de receptor 9 similar a Toll, inhibir la activación de receptor 9 similar a Toll, inhibir la producción de

interferones y rescatar un sujeto de choque letal mediado por citocinas.

4. El uso de la reivindicación 1, en el que el trastorno inmunomediado es lupus eritematoso sistémico (LES) que se trata inhibiendo la activación de TLR9 y producción de interferones inducida por agonistas de TLR9, virus y el suero de paciente con LES, el trastorno inmunomediado es septicemia que se trata rescatando un sujeto

de choque letal mediado por citocinas, o el trastorno inmunomediado es síndromes de disfunción multiorgánica que se trata rescatando un sujeto de choque letal mediado por citocinas.

5. Un oligonucleótido que incluye una secuencia que se ajusta a la fórmula de (5'CCT 3')n para su uso en

el tratamiento de un sujeto que tiene o está en riesgo de desarrollar el trastorno inmunomediado, en el que

5' CCT 3' es una unidad de repetición y n es un número entero de 2 a 50 y el trastorno inmunomediado es lupus eritematoso sistémico, septicemia, síndromes de disfunción multiorgánica o psoriasis.

6. El oligonucleótido para su uso según la reivindicación 5, en el que el oligonucleótido se administra con 30 un vehículo farmacéuticamente aceptable y/o principios activos adicionales.

7. El oligonucleótido para su uso según la reivindicación 6, en el que el oligonucleótido puede estar PEGilado.

8. El oligonucleótido para su uso según la reivindicación 7, en el que el oligonucleótido está en una forma

para administrar mediante la vía que incluye la administración enteral, parenteral y tópica o inhalación.