Nuevos radioinmunoconjugados y usos de los mismos.

Un radioinmunoconjugado que une CD37 humano, que comprende:

a) anticuerpo monoclonal murino HH1,

b) un enlazador quelante

c) un radionucleido seleccionado del grupo que consiste en 177Lu, 212Pb, 225Ac, 227Th y 90Y.

Nuevos radioinmunoconjugados y usos de los mismos

Campo tïcnico de la invenciïn La presente invenciïn se refiere a la radioinmunoterapia de cïncer hematolïgico con un anticuerpo monoclonal radiomarcado con una citotoxicidad inesperadamente alta.

Antecedentes de la invenciïn La terapia con anticuerpos radiomarcados ha sido introducida contra el linfoma no Hodgkin (NHL – siglas en inglïs) y es un mïtodo aprobado hoy en dïa. Dos productos estïn en el mercado, Zevalin™ y Bexxar™, y ambos fijan como objetivo el antïgeno CD20 (Jacene et al., 2007) .

Tambiïn el agente inmunoterapïutico rituximab (Rituxan™/Mabthera™) fija como objetivo el antïgeno CD20. Un problema con el tratamiento contra la misma diana es la posibilidad de la deriva inmunofenotïpica durante el curso de la enfermedad (Ngo et al., 2009) , que podrïa causar efectos disminuidos de la terapia de CD20 cuando se repite en el tiempo como en la terapia con rituximab, o si se administra radioinmunoterapia (RIT) basada en CD20

despuïs de una terapia prolongada con rituximab.

Un gran nïmero de pacientes que reciben terapia dirigida contra CD20 experimentarï finalmente una recidiva (Buchegger et al, 2006;. Gordon et al 2004) . Por lo tanto, hay una necesidad significativa de una RIT que fije como objetivo otro antïgeno que no sea CD20 en pacientes con NHL.

En el desarrollo temprano de RIT, se evaluaron como dianas los dos antïgenos CD37 y CD20 (Press et al., 2001) . Se concluyï que la RIT que fija como objetivo CD20 era mïs apropiada y, por lo tanto, se abandonï el desarrollo la RIT dirigida a CD37. Por lo tanto, se conoce en la tïcnica que los anticuerpos monoclonales son adecuados para su uso en la RIT contra el linfoma, pero que el radioinmunoconjugado (RIC) que fija como objetivo CD20 es superior a RIC que fija como objetivo CD37 (Press et al., 2001) .

En los ïltimos aïos ha atraïdo un cierto nuevo interïs CD37 (Heider et al, 2009;. Grosmaire, 2007) , principalmente como diana para la inmunoterapia utilizando construcciones de anticuerpos quimïricos o humanizados. Estos trabajos desaconsejan utilizar anticuerpos monoclonales de IgG murinos convencionales, ya que los anticuerpos murinos pueden inducir la producciïn de anticuerpos anti-ratïn humanos (HAMA) en pacientes, lo que puede causar incomodidad y una eficacia reducida de inmunoterapias.

Para la RIT, se siguen considerando interesantes anticuerpos monoclonales murinos convencionales, ya que, en general, las dosis de proteïnas utilizadas son mïs bajos y el tratamiento no necesita ser repetido en la misma medida que con la inmunoterapia. Tambiïn el aclaramiento de IgG murina es en general ligeramente mïs rïpido que las versiones humanizadas o quimïricas de la misma IgG, que pueden ser mïs apropiadas en tïrminos de exposiciïn a la radiaciïn de todo el cuerpo de RIT, por lo menos en algunas configuraciones. Cabe seïalar que tanto Bexxar como Zevalin se basan en anticuerpos murinos.

La presente invenciïn proporciona el anticuerpo anti-CD37 murino HH1 como soporte para radioisïtopos. El clon de hibridoma original que produce el anticuerpo anti-CD37 murino HH1 fue desarrollado en la dïcada de 1980 (Smeland et al., 1985) y el anticuerpo HH1 ha estado en venta para uso in vitro en la inmunohistoquïmica durante varios aïos.

Este documento tambiïn describe HH1 marcado con 125I, que se utilizï en estudios in vitro con el fin de visualizar por autorradiografïa antïgenos HH1.

Smeland et al. no describen HH1 marcado con un radionucleido tal como se describe en la presente invenciïn.

HH1 no ha sido previamente evaluado para la radioinmunoterapia en tïrminos de biodistribuciïn y citotoxicidad celular. Por lo tanto, el presente trabajo se realizï para evaluar la idoneidad de HH1 en radioinmunoterapia. En contraposiciïn con el anterior trabajo clïnico y preclïnico con RIC anti-CD37, que utiliza 131I radiomarcado directamente a los residuos de tirosina utilizando los mïtodos cloraminaT / yodïgeno, el HH1 fue radiomarcado a travïs de un quelante utilizando un radionucleido metïlico en lugar de un halïgeno.

El uso de un radionucleido metïlico marcado a travïs de un quelante-enlazador podrïa ser ventajoso, ya que el uso de anticuerpos marcados con 131I se asocia con la exposiciïn del tiroides a diversas cantidades de yodo liberado de los RICs.

En un estudio previo para evaluar si HH1 era adecuado para producir un radioinmunoconjugado, CHX-A-DTPA se conjugï a HH1 y el conjugado se marcï con 205.206Bi para fines de modelado in vitro (Henriksen et al., 1997) .

La captaciïn en la lïnea celular Raji se comparï para bismuto conjugado a HH1 o estreptavidina. En este ïltimo caso, las cïlulas habïan sido pre-saturadas con HH1 biotinilado.

En este procedimiento de dos etapas biotina-estreptavidina las cïlulas tumorales se pre-fijaron como objetivo con el anticuerpo biotinilado, seguido de la administraciïn de estreptavidina marcada radiactivamente.

Henriksen et al. no describe un radioinmunoconjugado de acuerdo con la presente invenciïn.

Se encontrï que el nïmero requerido de quelantes para garantizar un RIC funcional cuando se marcan con 212Bi o 213Bi fue un factor limitante. Por consiguiente, se sugiriï el uso de HH1 biotinilado en lugar de una RIC basada en HH1.Una vez unido a las cïlulas, el HH1 biotinilado podrïa ser fijado como objetivo a continuaciïn con estreptavidina marcada radiactivamente.

Por lo tanto, el trabajo sugiere que HH1 marcado con un radionucleido que emite partïculas alfa era menos ïtil debido a la actividad especïfica insuficiente en las concentraciones de quelante consideradas tolerable para que el HH1 conserve una capacidad de uniïn suficiente.

Tambiïn se indicï en el documento que un emisor beta serïa incluso menos adecuado para la construcciïn de un RIC funcional en comparaciïn con un emisor alfa (Henriksen et al, 1997) , dado que los autores establecieron que la radioterapia dirigida con emisor beta debe ser inferior en enfermedades diseminadas, porque el fuego cruzado es esencial para obtener un efecto suficiente.

Por lo tanto, el trabajo citado anteriormente desaconseja utilizar un HH1 directamente quelado en radioinmunoterapia y tambiïn desaconseja utilizar HH1 en un RIC basado en emisores beta.

Press et al. (New England J. Med.. vol. 329, nï 17, 1993, pïginas 1219-1224) y Kaminski et al. (J. Clin. Oncol., vol. 10, nï 11, 1992, 1996-1711) describen radioinmunoconjugados que comprenden el anticuerpo monoclonal (mAb – 35 siglas en inglïs) anti-CD37 murino MB-1 marcado con yodo 131 para su uso en el tratamiento del linfoma de cïlulas B.

Estos dos documentos no describen un radioinmunoconjugado de acuerdo con la presente invenciïn en el que el anticuerpo anti-CD37 es el mAb HH1 murino, 40 El documento WO 2009/019312 describe anticuerpos anti-CD37 que pueden ser marcados radiactivamente para 188Re

formar radioinmunoconjugados. 32P, 89Sr, 90Y, 131I, 153Sm, 169Er, 175Yb, se citan como radionucleidos adecuados con propiedades de radiaciïn ventajosas. Este documento describe que las molïculas de anticuerpo anti-CD37 se pueden marcar con diversos radionucleidos utilizando mïtodos de marcaje directo o de marcaje 45 indirecto.

Este documento no describe un radioinmunoconjugado en el que el anticuerpo anti-CD37 sea el mAb murino HH1.

Sumario de la invenciïn 50 La presente invenciïn se refiere a un radioinmunoconjugado que une CD37 humano que comprende anticuerpo monoclonal murino HH1, un enlazador quelante y un radionucleido seleccionado del grupo que consiste en 212Pb, 225Ac, 227Th, 90Y y 177Lu.

En una realizaciïn de la presente invenciïn, el enlazador es un enlazador quelante y el radionucleido es 177Lu.

Un aspecto de la presente invenciïn se refiere a una composiciïn farmacïutica que comprende un radioinmunoconjugado de la presente invenciïn, y un soporte farmacïuticamente aceptable.

En una forma de realizaciïn de la presente invenciïn, la composiciïn farmacïutica de la presente invenciïn comprende uno o mïs anticuerpos o radioinmunoconjugados adicionales.

En otra forma de realizaciïn de la presente invenciïn, los uno o mïs anticuerpos o radioinmunoconjugados adicionales fijan como objetivo CD20.

Una forma de realizaciïn adicional de la presente invenciïn se refiere a una composiciïn farmacïutica de la 5 presente invenciïn para uso en el tratamiento de cïlulas B malignas que expresan el antïgeno CD37.

En una forma de realizaciïn de la presente invenciïn, la composiciïn farmacïutica es para uso en el tratamiento de linfoma no Hodgkin y leucemia linfocïtica crïnica.

1. Un radioinmunoconjugado que une CD37 humano, que comprende: a) anticuerpo monoclonal murino HH1,

b) un enlazador quelante y c) un radionucleido seleccionado del grupo que consiste en 177Lu, 212Pb, 225Ac, 227Th y 90Y.

2. El radioinmunoconjugado que une CD37 de acuerdo con la reivindicaciïn 1, en donde el radionucleido es 177Lu.

3. Una composiciïn farmacïutica que comprende un radioinmunoconjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, y un soporte farmacïuticamente aceptable.

4. La composiciïn farmacïutica de acuerdo con la reivindicaciïn 3, que comprende, ademïs, uno o mïs anticuerpos o radioinmunoconjugados adicionales. 15

5. La composiciïn farmacïutica de acuerdo con la reivindicaciïn 4, en donde el uno o mïs anticuerpos o radioinmunoconjugados adicionales fijan como objetivo CD20.

6. La composiciïn farmacïutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3-5, para uso en el 20 tratamiento de cïlulas B malignas que expresan el antïgeno CD37.

7. La composiciïn farmacïutica de acuerdo con la reivindicaciïn 6, para uso en el tratamiento de linfoma no Hodgkin y leucemia linfocïtica crïnica.

8. El radioinmunoconjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, para uso en el tratamiento de malignidades de cïlulas B.

9. El radioinmunoconjugado de acuerdo con la reivindicaciïn 8, para uso en el tratamiento de malignidades de cïlulas B, en donde el radioinmunoconjugado se administra en combinaciïn con o ademïs de otra terapia. 30

10. El radioinmunoconjugado para uso de acuerdo con la reivindicaciïn 9, en donde la terapia se selecciona de pre-tratamiento, quimioterapia, terapia de anticuerpos monoclonales, cirugïa, radioterapia y/o terapia fotodinïmica.

11. El radioinmunoconjugado para uso de acuerdo con la reivindicaciïn 9 ï 10, en donde la terapia comprende un

pre-tratamiento utilizando anticuerpo monoclonal anti-CD20 y/o anti-CD37 antes del tratamiento con el radioinmunoconjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3.

12. Un kit para la producciïn del radioinmunoconjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, que comprende dos o mïs viales, en donde un vial contiene un conjugado que comprende un quelante enlazado a un anticuerpo monoclonal murino HH1; y un segundo vial que contiene el radionucleido de acuerdo con las reivindicaciones 1-2.

13. El kit de acuerdo con la reivindicaciïn 12, en el que el contenido de uno o varios de los viales estï liofilizado o en una disoluciïn. 45

Fig. 1 Fig. 2 Fig. 3 Fig. 4 Fig. 5 Fig. 6 Fig. 7 Fig. 8