Nuevo vector baculovírico.

Composición farmacéutica que comprende un virus recombinante de la poliedrosis nuclear de Autographa californica (AcNPV),

como un agente activo, y, opcionalmente, un vehículo farmacéuticamente aceptable,

en la que el AcNPV recombinante contiene una estructura de secuencia de ADN que presenta una secuencia de ADN de fusión de

(A) una secuencia de ADN que codifica PfCSP de la cepa 3D7 del parásito de la malaria P. falciparum, o su fragmento inmunógeno; y

(B) una secuencia de ADN del nº de acceso L22858 de GenBank, que codifica los aminoácidos de la proteína gp64 de baculovirus, o un fragmento de la misma, que es capaz de ser el componente de la partícula vírica; bajo el control de un promotor dual que comprende el promotor de poliedrina y el promotor de CMV unidos entre sí.

Nuevo vector baculovírico.

Campo técnico

La presente invención se refiere a medicamentos (por ejemplo, vacunas, drogas terapéuticas o preventivas para enfermedades infecciosas, tales como malaria), que incluyen como principio activo el baculovirus recombinante.

Técnica anterior

El baculovirus se ha utilizado como vector para un procedimiento de producción industrial de una proteína objetivo, utilizando células de insectos. Recientemente, se encontró que los baculovirus pueden introducir un gen extraño, no sólo en las células de insectos, sino también en las de los mamíferos, habiéndose concebido la posibilidad de introducir en dicho vector un gen terapéutico. En el documento 1 de Patente, se da a conocer un vector de expresión del baculovirus recombinante, que posee múltiples promotores independientes, compuesto de una región de ADN que incluye un gen que codifica una proteína vírica no estructural en el promotor derivado de un gen temprano del baculovirus, y una región de ADN que incluye un gen que codifica una proteína vírica estructural en el promotor derivado de un gen tardío.

En el documento 2 de Patente, se da a conocer un procedimiento en el que un virus de un ADN de un no mamífero que incluye un promotor controlado, de forma que un gen exógeno es expresado a partir de un vector en el que los genes exógenos deseados se han unido a múltiples promotores independientes, se introduce en una célula y el gen exógeno se expresa en la célula de un mamífero.

Además, en el documento 3 de Patente, se da a conocer el procedimiento para obtener la proteína mediante tecnología recombinante, utilizando el baculovirus, y el procedimiento para obtener la proteína, expresando un gen de fusión obtenido uniendo un gen gp64 del baculovirus a un gen que codifica la proteína deseada, produciendo la proteína deseada de una forma en la que la proteína deseada se ha fusionado con las partículas víricas, recuperando las partículas víricas fusionadas con la proteína deseada, y fragmentando ésta a partir de ellas, para recuperar.

En el documento 4 de Patente, se da a conocer para un sistema de expresión de un baculovirus, un vector de expresión de un baculovirus recombinante que posee múltiples promotores independientes que incluyen una cebadora secuencia ácido nucleica que codifica un marcador de detección unido en una forma capaz de que funcione para un cebador promotor que es activo en una célula huésped, y es inactivo en una célula no aceptable, y una segunda secuencia ácido nucleica que comprende una secuencia ácido nucleica extraña unida de forma capaz de que funcione para un segundo promotor que es activo en una célula no aceptable.

En el documento 5 de Patente, se da a conocer que un vector baculovírico recombinante que expresa un antígeno hemaglutinínico (HA) del virus de la gripe, unido a un promotor CAG derivado de la p actina de pollos, es útil como formulación vacunal, porque el vector posee un efecto preventivo sobre la infección con el virus de la gripe.

En el documento 6 de la Patente, se da a conocer el procedimiento para producir un vector baculovírico que incluye una etapa de co-transfección en la que un plásmido en el que los genes que codifican proteínas capaces de expresarse en la superficie celular, se han unido al promotor baculovírico y al promotor derivado de la célula de mamífero, respectivamente, y un plásmido en el cual los genes que codifican proteínas capaz de expresarse en la superficie celular, se han unido a dos promotores baculovíricos, respectivamente, se cotransfectan, respectivamente en células de insectos.

Y en el documento 7 de Patente, se da a conocer un estudio sobre una actividad antivirus de la gripe, en la infección por este virus, utilizando el baculovirus recombinante, en el que el cADN del virus HA de la gripe se ha incorporado al promotor CAG, habiéndose mostrado que no sólo el baculovirus recombinante posee la actividad, sino que también la tiene el baculovirus de tipo salvaje.

Yoshida et al., Virology 316 (2003) 161-170, dan a conocer que los viriones del Baculovirus que muestran la proteína circunsporozoítica de Plasmodium berghei, protegen a los ratones contra la infección esporozoítica de la malaria.

De esta forma, recientemente, se han desarrollado varios baculovirus recombinantes, habiéndose estudiado, utilizando los baculovirus recombinantes como principios activos, el desarrollo farmacéutico en los mamíferos.

En la técnica relacionada, se ha tenido como finalidad, por una parte, un vector baculovírico recombinante que muestra una nueva estructura, y por otra representa el desarrollo de una formulación farmacéutica, particularmente una de tipo vacunal, que utilice el baculovirus recomblnante como principio activo, que es efectivo para tratar enfermedades infecciosas como malaria y gripe, o patologías como el cáncer.

Documento 1 de la Patente: Patente Japonesa n° 3366328, sistema de expresión baculovírica de múltiples

promotores y productos defecto en partículas.

Documento 2 de Patente: WO98/011243, virus ADN no mamífero con proteína de cubierta modificada.

Documento 3 de Patente: JP N° 2002-235236-A, Procedimientos para obtener proteínas.

Documento 4 de Patente: JP N° 2003-284557-A, nuevo vector vaculovírico de transfección y baculovirus

recomblnante para la expresión del gen extraño.

Documento 5 de Patente: W002/062381, vacuna de vector baculovírico.

Documento 6 de Patente: WO04/029259, vector baculovírico, procedimiento para producir el vector baculovírico

y procedimiento para introducir el gen.

Documento 7 de Patente: JP N° 2005-15346-A Baculovirus que contiene un agente antivírico.

Exposición de la invención

Problemas a resolver por la invención

Se dan a conocer un nuevo vector recombinante de transferencia, un baculovirus recombinante obtenido mediante recomblnación homologa del vector recombinante de transferencia, y un ADN baculovírico, y procedimientos para su obtención. Un objetivo de la presente invención es proporcionar un medicamento, particularmente una formulación vacunal, utilizando el baculovirus recombinante como principio activo.

Medios para resolver problemas

En el contexto de la presente invención un vector de transferencia que posee una nueva estructura, que puede expresar una proteína que posee una inmunogenicidad deseada, o una proteína de fusión de una proteína parcial, o la proteína que posee la inmunogenicidad, con citoquina, en células de insectos y vertebrados (particularmente mamíferos, aves y peces), células distintas a las de insectos, y un baculovirus recombinante obtenido mediante recombinación homologa del vector de transferencia y del ADN baculovírico. Proporcionando el baculovirus recombinante se estudió extensamente el medicamento que lo incluye, como principio activo con efectos efectivos preventivos y/o terapéuticos sobre las enfermedades infecciosas. Como resultado, se ha descubierto en el contexto de la presente invención nuevamente que el baculovirus recombinante tiene el efecto del medicamento deseado.

Y, según esta exposición, el vector recombinante de transferencia que posee la nueva estructura, el baculovirus recombinante obtenido mediante recombinación homologa del vector de transferencia y el ADN baculovírico, así como los procedimientos para su producción, se confirmaron, así como que el baculovirus recombinante en sí mismo demostró utilidad como medicamento capaz de expresar la proteína que posee la inmunogenicidad deseada en las células diana, y que se demostró útil como el medicamento preventivo para enfermedades infecciosas tales como malaria y gripe, cumpliéndose de este modo, aquí, la presente invención.

Se dan a conocer los siguientes apartados [1] a [31]:

(1) Procedimiento para obtener un vector de transferencia que comprende una estructura en la cual se han incorporado un promotor dual y un gen de fusión, caracterizado porque el gen de fusión que incluye por lo menos un gen que codifica una proteína capaz de constituir un componente de una partícula vírica y, de por lo menos, un gen inmunogénico extraño, se unen por debajo del promotor dual, uniendo un promotor de vertebrados y otro baculovírico.

(2) El procedimiento según el apartado (1), en el que el promotor de vertebrados es uno de mamíferos.

(3) El procedimiento según los apartados (1) ó (2), caracterizado por que el gen que codifica por lo menos una proteína que puede constituir un componente de la partícula vírica, es cualquiera de un gen gp64 del baculovirus, un gen de la glicoproteína del virus de la estomatitis vesicular, un gen de la glicoproteína del... [Seguir leyendo]

1. Composición farmacéutica que comprende un virus recombinante de la poliedrosis nuclear de Autographa californica (AcNPV), como un agente activo, y, opcionalmente, un vehículo farmacéuticamente aceptable,

en la que el AcNPV recombinante contiene una estructura de secuencia de ADN que presenta una secuencia de ADN de fusión de

(A) una secuencia de ADN que codifica PfCSP de la cepa 3D7 del parásito de la malaria P. falciparum, o su

fragmento inmunógeno; y

(B) una secuencia de ADN del n° de acceso L22858 de GenBank, que codifica los aminoácidos de la proteína gp64 de baculovirus, o un fragmento de la misma, que es capaz de ser el componente de la partícula vírica;

bajo el control de un promotor dual que comprende el promotor de poliedrina y el promotor de CMV unidos

entre sí.

2. Composición farmacéutica según la reivindicación 1, en la que el fragmento de ADN de (A) puede obtenerse mediante una PCR realizada con el ADN genómico extraído de la cepa 3D7 del parásito de la malaria P. falciparum

como matriz utilizando los cebadores de SEC ID n°: 19 y SEC ID n°: 20, y la segmentación subsiguiente con EcoRI y Cfr9l, y

el fragmento de ADN de (B) es un fragmento que se encuentra presente en el fragmento de ADN que puede obtenerse mediante una PCR realizada con pBACsurf-1 como matriz utilizando los cebadores de SEC ID n°: 7 y 25 SEC ID n°: 8, y la segmentación subsiguiente con Rsrll y Kpnl.

3. Composición farmacéutica según la reivindicación 1 o 2, que es una vacuna de la malaria.