Métodos y composiciones farmacéuticas para el tratamiento de una enfermedad ocular en un sujeto.

Una composición farmacéutica formulada con microburbujas de agente de contraste ecográfico y un ácido nucleico terapéutico de interés para uso en un método para tratar una enfermedad ocular en un sujeto,

en donde dicho método comprende las etapas que consisten en i) suministrar dicha composición farmacéutica en el músculo ciliar del sujeto y ii) exponer a ultrasonidos la región en la que se suministró la composición farmacéutica para inducir la transfección de dicho ácido nucleico terapéutico de interés dentro de dicho músculo ciliar.

Métodos y composiciones farmacéuticas para el tratamiento de una enfermedad ocular en un sujeto CAMPO DE LA INVENCIÓN:

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas para el tratamiento de una enfermedad ocular en un sujeto.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN:

En los últimos años, se han producido nuevos e interesantes avances en el tratamiento de enfermedades que causan ceguera oculares tales como la degeneración macular relacionada con la edad y la retinopatía diabética, utilizando bioterapias.

Inyecciones intravítreas repetidas de proteínas terapéuticas están aumentando rápidamente en frecuencia como una vía de administración intraocular de proteínas terapéuticas. Las inyecciones intravítreas se realizan comúnmente y son bien toleradas, pero se asocian con riesgos de complicaciones raras pero graves tales como lesiones de la retina, formación de cataratas y la infección del ojo. Más problemática es la deficiente complacencia de inyecciones repetidas con frecuencia. Se está explorando un amplio campo de métodos innovadores para reducir la frecuencia de las inyecciones intravítreas.

La terapia génica es una opción óptima para enfermedades de los ojos, y particularmente vectores de genes no virales prometen no prestar atención a los límites de los vectores virales que están asociados con la inmunogenicidad, toxicidad y riesgo de inserción en secuencias oncogénicas. Además de ello, los vectores no virales son más apropiados para el control de las dosis de las proteínas terapéuticas que podrían ser un factor crucial para la eficacia y la especificidad de factores terapéuticos de este tipo. Por ejemplo; los tejidos de los ojos son un objetivo desarrollado recientemente para la transferencia de genes in vivo. En este contexto, Behar-Cohen et al (26) han desarrollado una nueva técnica de electrotransferencia (ET) in vivo en el ojo de rata, utilizando por vez primera el músculo ciliar como tejido diana para la entrega de genes y como un depósito para la producción de proteínas terapéuticas en los medios oculares: humores acuoso y vitreo (documento WO 26123248). Su eficacia se demostró evaluando los efectos de la producción intraocular de los receptores de TNF en dos modelos de rata de inflamación ocular (uveítis) (Bloquel C et al. Plasmid electrotransfer of eye ciliary muscle: principies and therapeutic efficacy using hTNF-alpha soluble receptor in uveítis. FASEB J. 26; 2: 389-391; Kowalczuk L et al. Local ocular immunomodulation resulting from electrotransfer of plasmid encoding soluble TNF receptors in the ciliary muscle. Invest Ophthalmol Vis Sci 29; 5: 1761-1768; ouchard E et al. Effects of ciliary muscle plasmid electrotransfer of TNF-a soluble receptor variants in experimental uveítis. Gene Ther29; 16: 862-873).

Aunque la electrotransferencia al músculo ciliares un método físico eficaz de transferencia de genes, se requiere la colocación invasiva de electrodos de aguja en el tejido diana para suministrar impulsos eléctricos. Por consiguiente, existe una necesidad en la técnica de métodos que sean menos invasivos. No ha habido ningún estudio previo de si la exposición a ultrasonidos de baja intensidad, en combinación con microburbujas comerciales es capaz de aumentar la transferencia de genes en el músculo ciliar liso después del suministro intramuscular de genes informadores.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN:

La presente invención se refiere a una composición farmacéutica para uso en un método para tratar una enfermedad ocular en un sujeto, que comprende las etapas que consisten en i) suministrar una composición farmacéutica formulada con microburbujas de agente de contraste ecográfico y un ácido nucleico terapéutico de interés en el músculo ciliar del sujeto y ii) exponer a ultrasonidos la región en la que se suministró la composición farmacéutica para inducir la transfección de dicho ácido nucleico terapéutico de interés dentro de dicho músculo ciliar.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN:

El objetivo de los autores de la invención era evaluar la viabilidad de utilizar ultrasonidos (US) de baja intensidad combinados con microburbujas (MB) de agente de eco-contraste disponibles comercialmente para transfectar específicamente el músculo ciliar, que se ha demostrado previamente que tienen el potencial de la secreción de proteínas terapéuticas en el medio ocular. Por lo tanto, el ADN del plásmido informador que codifica la Gaussia luciferasa y que contiene el gen LacZ, solo o mezclado con 5% de microburbujas de contraste ecográfico (Artison), fueron inyectados en el músculo ciliar del ojo de rata, con o sin exposición a ultrasonidos (1 MHz, de 2 W / cm2 para Isata durante 2 minutos, ciclo de trabajo del 5%). Siete días después de la transfección, la actividad de luciferasa en medios oculares era significativamente mayor en los ojos a los que se inyectó plásmido y tratados con MB y US

en comparación con los ojos tratados con US solo o con los ojos que recibieron solamente la inyección de plásmido. US más microburbujas mostró un aumento de 2,6 veces en la luminiscencia (p < ,23) en comparación con los ojos no tratados con US control. Treinta días después de la transfección se observó una disminución significativa en la actividad de luciferasa en cada uno de los grupos experimentales. La tinción histoquimica demostró la expresión de (3-galactosidasa en la región ciliar, pero no limitado al sitio de inyección del plásmido. Por consiguiente, los autores de la invención demostraron por vez primera in vivo la viabilidad de la transferencia de genes, mediada por ultrasonidos y microburbujas en los tejidos oculares para la producción intraocular de proteínas secretadas en los medios oculares. Estos resultados indican que se pueden utilizar microburbujas combinadas con US de manera eficaz para transfectar células del músculo ciliar y, por lo tanto, para el tratamiento de enfermedades oculares.

La invención se refiere a composiciones para uso en un método de este tipo para el tratamiento de una enfermedad ocular en un sujeto.

Más particularmente, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica para uso en un método para tratar una enfermedad ocular en un sujeto, que comprende las etapas que consisten en i) suministrar una composición farmacéutica formulada con microburbujas de agente de contraste ecográfico y un ácido nucleico terapéutico de interés en el músculo ciliar del sujeto y ii) exponer a ultrasonidos la región en la que la composición farmacéutica se suministró para inducir la transfección de dicho ácido nucleico terapéutico de interés dentro de dicho músculo ciliar.

El ácido nucleico a utilizar en la presente invención puede ser cualquier ácido nucleico de interés que exhiba una propiedad biológica. Más particularmente, el ácido nucleico puede ser cualquier ácido nucleico que codifique un producto natural, truncado, artificial, quimérico o recombinante [p. ej., un polipéptido de interés (incluida una proteína o un péptido), un ARN, etc.] que exhiba una actividad biológica.

El ácido nucleico es preferiblemente una molécula de ácido desoxirribonucleico (ADN) (ADNc, ADNg, ADN sintético, ADN artificial, ADN recombinante, etc.) o una molécula de ácido ribonucleico (ARN) (ARNm, ARNt, ARNi, ARNsi, ARN catalítico, ARN antisentido, ARN viral, etc.). El ácido nucleico puede ser ácido nucleico de cadena sencilla o de cadena múltiple, preferiblemente un ácido nucleico de doble cadena o puede estar formando complejo. El ácido nucleico puede comprender secuencias híbridas o secuencias sintéticas o semi-sintéticas. Se puede obtener mediante cualquier técnica conocida por las personas expertas en la técnica, y especialmente por los bancos de rastreo, por síntesis química o, alternativamente, por métodos mixtos que incluyen la modificación química o enzimática de secuencias obtenidas mediante el rastreo de bancos.

En una realización particular, el ácido nucleico terapéutico es de origen sintético o biosintético, o se extrae de un virus o de un organismo eucariota o procariota unicelular o pericelular.

El ácido nucleico terapéutico utilizado en la presente invención puede estar desnudo, puede formar complejo con cualquier agente químico, bioquímico o biológico, puede ser insertado en un vector, etc., cuando se administra al

músculo ciliar.

Tal como se utiliza aquí, la expresión "ADN desnudo" se refiere a cualquier molécula de ácido nucleico que no está combinada a un agente sintético, biosintético, químico, bioquímico o biológico, mejorando el suministro o la transferencia de dicho ADN, o facilitando su entrada en la célula.

Tal como se utiliza en esta memoria,... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica formulada con microburbujas de agente de contraste ecográfico y un ácido nucleico terapéutico de interés para uso en un método para tratar una enfermedad ocular en un sujeto, en donde dicho método comprende las etapas que consisten en i) suministrar dicha composición farmacéutica en el músculo ciliar del sujeto y ii) exponer a ultrasonidos la región en la que se suministró la composición farmacéutica para inducir la transfección de dicho ácido nucleico terapéutico de interés dentro de dicho músculo ciliar.

2. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho ácido nucleico terapéutico de interés es una molécula de ácido desoxirribonucleico (ADN) o una molécula de ácido ribonucleico (ARN).

3. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde dicho ácido nucleico terapéutico de interés es un vectorial como un plásmido.

4. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dicho ácido nucleico de interés es codificado para un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en enzimas, derivados de la sangre, hormonas, linfoquinas, citoquinas, quimioquinas, factores anti-inflamatorios, factores de crecimiento, factores tróficos, factores neurotróficos, factores hematopoyéticos, factores angiogénicos, factores anti- angiogénicos, inhibidores de metaloproteinasa, reguladores de la apoptosis, factores de coagulación, receptores de los mismos, en particular receptores solubles, un péptido que es un agonista o antagonista de un receptor o de una proteína de adhesión, antfgenos, anticuerpos, fragmentos o derivados de los mismos, y otros constituyentes esenciales de la célula.

5. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde la envuelta de microburbujas comprende un polímero o un tensioactivo seleccionado del grupo que consiste en lípidos, incluidos fosfolípidos y lípidos fluorados.

6. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el gas

incorporado en las microburbujas es un compuesto de fluorocarbono, preferiblemente un perfluorocarbono seleccionado del grupo que consiste en perfluoralcanos tales como perfluorometano, perfluoroetano, perfluoropropanos, perfluorobutanos, perfluoropentanos, perfluorohexanos o perfluoroheptanos; perfluoroalquenos tales como perfluoropropeno, perfluorobutenos, perfluorobutadieno, perfluoropentenos o perfluoro-4-metilpemt-2- eno; perfluoroalquinos tales como perfluorobut-2-ino; y perfluorocicloalcanos tales como perfluorociclobutano, perfluorometilciclobutano, perfluorodimetilciclobutanos, perfluorotrimetilciclobutanos, perfluoroclclopentano,

perfluorometilciclopentano, perfluorodimetilciclopentanos, perfluorociclohexano, perfluorometllclclohexano o

perfluorocicloheptano.

7. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde los ultrasonidos se suministran mediante un dispositivo de ultrasonidos que proporciona una señal ultrasónica de 8 kHz a 3 MHz con una intensidad de salida Isata que oscila entre ,5 W/cm2 y 5 W/cm2

8. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7o, en donde dicha enfermedad ocular se selecciona del grupo que consiste en enfermedades oculares proliferativas, enfermedades oculares neurodegenerativas, glaucoma, enfermedades oculares infecciosas, enfermedades oculares inflamatorias tales como conjuntivitis, queratitis, endotelitis, uveítis, coroiditis, retinitis, retinocoroiditis, uveítis anterior, y neuropatías ópticas inflamatorias, degeneraciones de la retina, en particular retinitis pigmentosa, degeneración periférica de la retina, degeneración macular tal como degeneración macular seca relacionada con la edad, retinopatía isquémica, en particular retinopatía del prematuro y retinopatía diabética, enfermedades vasculares de la retina, síndrome de isquemia ocular y otras anomalías vasculares, trastornos y tumores conoidales, trastornos vitreos, proliferación glial tal como vítrorretinopatía proliferativa y proliferación glial asociada a angiogénesis pre- retinal diabética.