Fragmento Fc de IgG para un vehículo de fármaco y procedimiento para la preparación del mismo.

Uso de un fragmento de Fc como vehículo de fármaco, en el que el fragmento Fc es Fc de IgG,

que está unido covalentemente a un fármaco a través de un polímero no peptídico, en el que el polímero no peptídico es poli(etilenglicol)(PEG), en el que el fármaco es un fármaco de polipéptido, y el fragmento Fc no incluye un fragmento de Fc con una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 8.

Fragmento Fc de IgG para un vehículo de fármaco y procedimiento para la preparación del mismo

Campo técnico

La presente invención se refiere a un fragmento Fc de IgG útil como vehículo de fármaco polipeptídico, y más en particular, a fragmentos Fc de IgG2 y Fc de IgG4, combinaciones de los mismos e híbridos de los mismos.

Técnica anterior

En el pasado, un gran número de farmacólogos y químicos hicieron esfuerzos para alterar y/o modificar químicamente la actividad in vivo de moléculas fisiológicamente activas, de origen natural. Estos esfuerzos se enfocaron principalmente en incrementar o prolongar determinada actividad in vivo, reducir la toxicidad, eliminar o reducir los efectos secundarios, o modificar actividades fisiológicas específicas de las sustancias fisiológicamente activas. Cuando se modifica químicamente una sustancia fisiológicamente activa, en muchos casos pierde parte o la mayoría de sus actividades fisiológicas.

Sin embargo, en algunos casos, la modificación podría dar como resultado un incremento o un cambio en la actividad fisiológica. A este respecto, muchos estudios se han enfocado en la modificación química que puede lograr una actividad fisiológica deseada, y la mayoría de dichos estudios han implicado la unión de forma covalente de una sustancia fisiológicamente activa (fármaco) con un vehículo fisiológicamente aceptable.

Por ejemplo, la publicación de patente internacional n.º WO 01/93911 emplea un polímero que tiene una pluralidad de restos ácidos como vehículo de fármaco. La publicación de patente internacional n.º WO 03/00778 divulga un grupo aniónico que contiene copolímeros de bloque anfifílicos que, cuando se usa como vehículo de fármaco para un fármaco catiónico, mejora la estabilidad del fármaco. La patente europea n.º 0 681 481 describe un procedimiento de mejora de las propiedades de fármacos básicos usando ciclodextrina y ácidos como vehículos. Por otra parte, los fármacos hidrófobos tienen baja estabilidad in vivo debido principalmente a su baja solubilidad acuosa. Para mejorar la baja solubilidad acuosa de los fármacos hidrófobos, la publicación de patente internacional n.º WO 04/064731 emplea un lípido como vehículo. Sin embargo, hasta la fecha, no hay informes del uso de un fragmento Fc de inmunoglobulina como vehículo de fármaco.

Típicamente, ya que los polipéptidos se desnaturalizan de forma relativamente fácil debido a su baja estabilidad, se degradan por enzimas proteolíticas en la sangre y se eliminan fácilmente a través del riñón o del hígado, los medicamentos de proteínas, incluyendo polipéptidos como componentes farmacéuticamente eficaces, necesitan administrarse con frecuencia a los pacientes para mantener las concentraciones y los títulos del nivel sanguíneo deseados. Sin embargo, esta administración frecuente de medicamentos de proteínas, en especial por medio de inyección causa dolor en los pacientes. Para resolver estos problemas, se han realizado muchos esfuerzos para mejorar la estabilidad en suero de los fármacos con proteínas y para mantener los fármacos en la sangre en niveles altos durante un periodo de tiempo prolongado, y por tanto para maximizar la eficacia farmacéutica de los fármacos. Por lo tanto, las composiciones farmacéuticas con actividad sostenida necesitan incrementar la estabilidad de los fármacos de proteínas y mantener los títulos en niveles suficientemente altos sin provocar respuestas inmunitarias en los pacientes.

Para estabilizar las proteínas y evitar la degradación enzimática y la eliminación por los riñones, se usó de forma convencional un polímero con una alta solubilidad, tal como polietilenglicol (a continuación en el presente documento, denominado simplemente con "PEG") , para modificar químicamente la superficie de un fármaco de proteínas. Al unirse a regiones específicas o determinadas de una proteína diana, el PEG estabiliza la proteína y evita la hidrólisis, sin provocar efectos secundarios graves (Sada et al., J. fermentation Bioengineering 71: 137-139, 1991) . Sin embargo, a pesar de su capacidad para potenciar la estabilidad de las proteínas, este acoplamiento con PEG tiene problemas tales como la gran reducción del número de títulos de las proteínas fisiológicamente "activas". Además, el rendimiento disminuye con e incremento del peso molecular del PEG debido a la reducción de la reactividad con las proteínas.

Recientemente, se han sugerido conjugados de polímero-fármaco de proteína. Por ejemplo, como se describe en la patente los EE. UU. N.º 5.738.846, se puede preparar un conjugado uniendo un fármaco de proteína idéntico en ambos extremos del PEG para mejorar la actividad del fármaco de proteína. Además, como se describe en la publicación de patente internacional n.º WO 92/16221, se pueden unir dos fármacos de proteínas diferentes en ambos extremos del PEG para proporcionar un conjugado que tiene dos actividades diferentes. Los procedimientos anteriores, sin embargo, no fueron muy exitosos en el mantenimiento de la actividad de los fármacos de proteínas.

Por otra parte, Kinstler et al. informaron de que una proteína de fusión preparada por acoplamiento del factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF) a albúmina humana mostró una mejora en la estabilidad (Kinstler et al., Pharmaceutical Research 12 (12) : 1883-1888, 1995) . En esta publicación, sin embargo, puesto que el fármaco modificado, que tiene una estructura G-CSF-PEG-albúmina, sólo mostró un incremento de aproximadamente cuatro veces en el tiempo de residencia en el cuerpo y un ligero incremento en la semivida en suero en comparación con la administración individual de G-CSF natural, no se ha industrializado como formulación de acción prolongada eficaz para fármacos de proteína.

Un procedimiento alternativo para mejorar la estabilidad in vivo de proteínas fisiológicamente activas es uniendo un gen de proteína fisiológicamente activa a un gen que codifica una proteína que tiene una alta estabilidad sérica por tecnología de recombinación genética y cultivando las células transfectadas con el gen recombinante para producir una proteína de fusión. Por ejemplo, se puede preparar una proteína de fusión conjugando albúmina, una proteína conocida por ser la más eficaz para potenciar la estabilidad de las proteínas, o su fragmento a una proteína fisiológicamente activa de interés por recombinación genética (publicaciones de patente internacional n.º WO 93/15199 y WO 93/15200, publicación de patentes europea n.º 413.622) . Una proteína de fusión de interferón-alfa y albúmina, desarrollada por Human Genome Science Company y comercializada con el nombre comercial

'Albuferon™', incrementó la semivida de 5 horas a 93 horas en monos, pero se supo que era problemática porque disminuyó la actividad in vivo hasta menos de un 5 % del interferón-alfa no modificado (Osborn et al., J. Phar. Exp. Ther. 303 (2) : 540-548, 2002) . No hay informes de una tecnología buena que potencie tanto la duración de acción in vivo como la estabilidad de fármacos de proteína y mantenga la actividad fisiológica in vivo de los fármacos.

Por otra parte, se emplearon inmunoglobulinas y sus fragmentos para potenciar la estabilidad de fármacos de proteínas. Por ejemplo, la patente de los EE. UU. N.º 5.045.312 divulga un procedimiento de incremento de la actividad de una hormona de crecimiento no modificada conjugando la hormona del crecimiento humano a seroalbúmina o inmunoglobulina de rata usando un agente de reticulación. Además, se han realizado otros intentos de fusionar un fármaco de proteína con un fragmento Fc de inmunoglobulina. Por ejemplo, se expresaron previamente interferón (publicación de patente coreana abierta a inspección pública n.º 2003-9464) , y el receptor de interleucina-4, receptor de interleucina-7 o receptor de eritropoyetina (EPO) (patente coreana con número de registro 249572) en mamíferos en una forma fusionada a un fragmento Fc de inmunoglobulina. La publicación de patente internacional n.º WO 01/03737 describe una proteína de fusión que comprende una citocina o un factor de crecimiento unido a un fragmento Fc de inmunoglobulina a través de un enlace peptídico. Además, la patente de los EE. UU. Nº. 5.116.964 divulga proteínas fusionadas al extremo amino o carboxilo terminal de un fragmento Fc de inmunoglobulina por recombinación genética. La patente de los EE. UU. N.º 5.349.053 divulga una proteína de fusión que comprende IL-2 fusionada a un fragmento Fc de inmunoglobulina por medio de un enlace peptídico.

Otros ejemplos de proteínas de fusión Fc preparadas por recombinación genética incluyen una proteína de fusión de interferón-beta... [Seguir leyendo]

1. Uso de un fragmento de Fc como vehículo de fármaco, en el que el fragmento Fc es Fc de IgG, que está unido covalentemente a un fármaco a través de un polímero no peptídico, en el que el polímero no peptídico es poli (etilenglicol) (PEG) , en el que el fármaco es un fármaco de polipéptido, y el fragmento Fc no incluye un fragmento de Fc con una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 8.

2. El uso como se establece en la reivindicación 1, en el que la IgG es lgG2 o lgG4.

3. El uso como se establece en la reivindicación 1, en el que el fragmento Fc está aglucosilado.

4. El uso como se establece en la reivindicación 4, en el que el fragmento Fc es un fragmento Fc de IgG4 aglucosilado.

5. El uso como se establece en la reivindicación 5, en el que el fragmento Fc es un fragmento Fc de IgG4 aglucosilado derivado de humano.

6. El uso como se establece en la reivindicación 1, en el que el fragmento Fc tiene una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 10 o 23.

7. El uso como se establece en la reivindicación 6, en el que el fragmento Fc está codificado por un gen que tiene 15 una secuencia de nucleótidos representada por SEQ ID NO: 9 o 22.

8. El uso como se establece en la reivindicación 1, en el que el fragmento Fc está contenido en una composición farmacéutica.

Proteína A (elución de pH por etapas)

M- Marcador de tamaño molecular Carril 1: Fc Carril 2: Proteína fisiológicamente activa Carril 3: Conjugado de proteína fisiológicamente activa-PEG-Fc

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