Flap endonucleasa-1 como marcador para el cáncer.

Un método para evaluar el cáncer in vitro que comprende la medición en una muestra de suero o plasma de la concentración de

(a) proteína Flap endonucleasa-1 (≥

FEN1),

(b) opcionalmente uno o más de otros marcadores de cáncer, y

(c) utilizar el resultado de la medición de la etapa (a) y opcionalmente la etapa (b) en la evaluación del cáncer, donde un aumento de la concentración de una proteína FEN1 es indicativo de cáncer

Flap endonucleasa-1 como marcador para el cáncer.

La presente invención se refiere a un método y su uso como se define en las reivindicaciones 1-11.

El cáncer sigue siendo el mayor desafío para la sanidad pública a pesar de los progresos en su detección y terapia. Las células cancerosas se caracterizan por la producción de proteínas marcadoras asociadas al cáncer. Las proteínas marcadoras asociadas al cáncer se encuentran tanto en los tejidos como en los fluidos corporales de un individuo que tiene las células cancerígenas. Sus niveles normalmente están bajos en los estadios tempranos del progreso carcinogénico e incrementan durante la progresión de la enfermedad y solo en casos raros se observan que las proteínas muestren un descenso del nivel en el curso de la progresión de la enfermedad. La detección sensible de estas proteínas es una estrategia ventajosa y prometedora para el diagnóstico del cáncer, en particular en el diagnóstico del cáncer en un estadio temprano. Los tipos más prevalentes de cáncer son el cáncer de mama (BC), el cáncer de pulmón (LC) y el cáncer colorrectal (CRC).

Las estrategias terapéuticas más importantes para los tumores sólidos son:

a) resección quirúrgica del tumor,

b) quimioterapia,

c) radioterapia,

d) tratamientos con agentes biológicos, como los anticuerpos antitumorales o los anticuerpos anti-angiogénicos y

e) una combinación de los métodos anteriores.

La resección quirúrgica de los tumores se acepta ampliamente como el tratamiento de primera línea para los tumores sólidos en estadio temprano. La mayoría de los cánceres, sin embargo, se detectan solamente cuando se vuelven sintomáticos, es decir, cuando los pacientes están ya en un estado bastante tardío de la progresión de la

enfermedad.

La estadificación del cáncer es la clasificación de la enfermedad en términos de extensión, progresión, y gravedad. Agrupa los pacientes con cáncer de forma que se puedan hacer generalizaciones sobre el pronóstico y elección de la terapia.

Los diferentes estadios de CRC se usan para clasificarse según los estadios de Dukes A a D. Hoy día, el sistema TNM es la clasificación que se utiliza más ampliamente de la extensión anatómica del cáncer. Representa un sistema de estadificación uniforme, aceptado internacionalmente. Hay tres variables básicas: T (la extensión del tumor primario), N (el estado de los ganglios linfáticos regionales) y M (la presencia o ausencia de metástasis distantes). Los criterios TNM los publica la UICC (Unión Internacional contra el cáncer), Sobin, L.H., Wittekind, Ch. (eds.), TNM Classification of Malignant Tumours, sexta edición (22)). Una vez que se determina el estado TNM los pacientes se agrupan en estadios de enfermedad que se indican con números romanos que varían del I al IV que es el estadio de enfermedad más avanzado. La estadificación TNM y los estados de enfermedad de UICC se corresponden entre ellos como se muestra en la siguiente tabla tomada de Sobin y Wittekind (eds.), supra.

Tabla 1: Interrelación entre la estadificación TNM y los estados de enfermedad de UICC

Lo que es especialmente importante es que el diagnóstico precoz del cáncer, por ejemplo del CRC se traduce en un pronóstico mucho mejor. Los tumores CRC malignos del colon-recto se desarrollan a partir de tumores benignos, es decir, a partir de un adenoma. Por lo tanto, tienen mejor pronóstico los pacientes diagnosticados en estado de adenoma. Los pacientes diagnosticados en estados tempranos como Tis, NO, M o T1-3; NO; M, si se tratan apropiadamente tienen más de un 9% de oportunidades de supervivencia 5 años después del diagnóstico en

comparación con la tasa de supervivencia a los cinco años del 1% de los pacientes diagnosticados cuando están ya presentes las metástasis distantes.

Los métodos de detección actuales incluyen métodos de diagnóstico por imagen, tales como rayos x o imágenes de resonancia magnética en teoría pueden ser apropiados al menos parcialmente para su uso como una herramienta exploratoria general. Sin embargo, son muy costosas y no asequibles para los sistemas de salud pública para un uso amplio y general para exploración de un gran número de sujetos, especialmente sujetos sin síntomas de que tengan un tumor.

Por lo tanto, un objetivo de la presente invención es proporcionar un procedimiento simple y de bajo coste para las evaluaciones de un tumor, por ejemplo, para identificar individuos sospechosos de tener un cáncer. Para este propósito, sería deseable un marcador tumoral general que sea detectable en fluidos corporales, por ejemplo, en la sangre, o el suero, o plasma o un panel de tales marcadores.

Hay ya vahos marcadores tumorales en el suero en uso clínico. Por ejemplo, los marcadores de LC más importantes son: el fragmento soluble de citocaratlna 19 de 3 kDa (CYFRA 21-1), antígeno carclnoembriogénico (CEA), enolasa específica de neuronas (NSE), y antígeno del carcinoma de células escamosas (SCC). Sin embargo, ninguno de ellos cumple los criterios de sensibilidad y especificidad necesario para una herramienta de exploración (Thomas, L., Labor und Diagnose, TH Books Verlagsgesellschaft, Frankfurt/ Main, Alemania (2)).

Con el fin de tener utilidad clínica, un nuevo marcador diagnóstico como único marcador debería ser comparable a otros marcadores conocidos en la técnica, o mejor. O, un nuevo marcador debería dar lugar a un progreso en la sensibilidad y/o especificidad diagnósticas sea utilizado solo o en combinación o con uno o más de otros marcadores, respectivamente. La sensibilidad y/o especificidad diagnósticas de un ensayo se evalúa mejor por sus características operativas de receptor, que serán descritas posteriormente en detalle.

La sangre entera, suero o plasma son las fuentes de muestras utilizadas más ampliamente en la rutina clínica. La identificación de un marcador precoz que ayudara detección fiable del cáncer o proporcionara información pronostica precoz podría dar lugar a un método que ayudaría mucho al diagnóstico y el manejo de esta enfermedad. Por lo tanto, existe una urgente necesidad clínica para mejorar la evaluación del cáncer in vitro. Es especialmente importante mejorar el diagnóstico precoz del cáncer, ya que los pacientes diagnosticados precozmente tienen oportunidades de supervivencia mucho mayores al compararse con los que se diagnostican en un estadio de la enfermedad que ha progresado.

Se ha revisado recientemente la utilidad clínica de los marcadores bioquímicos en el cáncer de pulmón (Duffy, M.J., Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. 38 (21) 225-262).

Con respecto a los perfiles de marcadores que pretenden un mejor diagnóstico de cáncer de pulmón, se publicó un método (Schnelder, J. y col., Int. J. Clin. Oncol. 7 (22) 145-151) que utiliza algoritmos de clasificación basados en lógica difusa para combinar los niveles en el suero de CYFRA 21-1, NSE y proteína reactiva C (CRP) que es un marcador general de Inflamación. Los autores anuncian una sensibilidad del 92% con una especifidad del 95%. Sin embargo en este estudio, por ejemplo se informa que la sensibilidad de CYFRA 21-1 como marcador único de cáncer es del 72% con una especificidad del 95%, lo que es significativamente más alta que en muchos otros Informes de estudios. Duffy, M.J., in Crit. Rev. Clin. Lab. Sel. 38 (21) 225-262, Informa de una sensibilidad de entre el 46% y el 61%. Este poco habitual alto rendimiento conseguido por Schnelder y col, plantea algunas dudas y puede ser debido a vahos factores. En primer lugar, el colectivo de pacientes control parece ser más joven que el colectivo de los pacientes, es decir, lo grupos no tienen una buena coincidencia... [Seguir leyendo]

1. Un método para evaluar el cáncer in vitro que comprende la medición en una muestra de suero o plasma de la concentración de

(a) proteína Flap endonucleasa-1 (= FEN1),

(b) opcionalmente uno o más de otros marcadores de cáncer, y

(c) utilizar el resultado de la medición de la etapa (a) y opcionalmente la etapa (b) en la evaluación del cáncer, donde un aumento de la concentración de una protema FEN1 es indicativo de cáncer.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho método es un inmunoensayo sándwich.

3. El método de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 2, que además se caracteriza por que el método es para evaluar cánceres como el cáncer de endometrio, melanoma maligno, cáncer de cérvix, cáncer de cabeza y cuello, cáncer ovárico, cáncer de colon, cáncer de vejiga, cáncer de páncreas, cáncer de mama, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de próstata, cáncer de riñón y cáncer de pulmón de células no pequeñas.

4. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que además se caracteriza por que dicho uno o más de otros marcadores de la etapa (b) se selecciona de entre el grupo que consiste en CEA, NSE, CA 19-9, CA 125, PSA, proGRP, SCC, NNMT, autoanticuerpos anti-p53, Seprasa y DPPIV/Seprasa.

5. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que además se caracteriza por que la concentración se mide por un método inmunológico.

6. El uso de la protema FEN1 en la evaluación in vitro del cáncer, donde un aumento de la concentración de la protema FEN1 es indicativo de cáncer, y donde la protema FEN1 se detecta en una muestra de suero o plasma.

7. El uso de acuerdo con la reivindicación 6 en la evaluación de un cáncer seleccionado de entre el grupo que consiste en cáncer de endometrio, melanoma maligno, cáncer de cérvix, cáncer de cabeza y cuello, cáncer ovárico, cáncer de colon, cáncer de vejiga, cáncer de páncreas, cáncer de mama, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de próstata, cáncer de riñón y cáncer de pulmón de células no pequeñas.

8. El uso de un anticuerpo dirigido contra la proteína FEN1 en la evaluación in vitro del cáncer, donde un aumento de la concentración de la proteína FEN1 en una muestra de suero o plasma es indicativo de cáncer.

9. El uso de un panel de marcadores que comprende la proteína FEN1 y opcionalmente uno o más de otros marcadores del cáncer en la evaluación in vitro del cáncer, donde un aumento de la proteína FEN1 en una muestra de suero o plasma es indicativo de cáncer.

1. El uso de un panel de marcadores de acuerdo con la reivindicación 9, que además se caracteriza por que el opcionalmente uno o más de otros marcadores se selecciona de entre el grupo que consiste en CEA, NSE, CA 19-9, CA 125, PSA, proGRP, SCC, NNMT, autoanticuerpos anti-p53, Seprasa y DPPIV/Seprasa.

11. El uso del panel de marcadores de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 y 1 en la evaluación del cáncer de endometrio, melanoma maligno, cáncer de cérvix, cáncer de cabeza y cuello, cáncer ovárico, cáncer de colon, cáncer de vejiga, cáncer de páncreas, cáncer de mama, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de próstata, cáncer de riñón y cáncer de pulmón de células no pequeñas.