Procedimiento de ensayo del ProNGF para el diagnóstico in vitro del cáncer, en particular del cáncer de mama, de tiroides, de la próstata o de pulmón, y utilización del proNGF en terapia.

Procedimiento de diagnóstico in vitro del cáncer, caracterizado por que consiste en determinar la presencia de ProNGF en una muestra biológica que proviene de un paciente sospechoso de padecer cáncer.

Procedimiento de ensayo del ProNGF para el diagnïstico in vitro del cïncer, en particular del cïncer de mama, de tiroides, de la prïstata o de pulmïn, y utilizaciïn del proNGF en terapia La presente invenciïn se refiere al campo de la cancerologïa. Mïs particularmente, la presente invenciïn tiene por

objeto un procedimiento de diagnïstico del cïncer y mïs particularmente del cïncer de mama, de tiroides, de pulmïn o de la prïstata, en un paciente humano mediante determinaciïn in vitro de la presencia del precursor del factor de crecimiento nervioso (ProNGF) en una muestra biolïgica procedente de este paciente, o en el tumor del paciente in vivo, pudiendo ser utilizado dicho procedimiento tanto en el diagnïstico precoz, la detecciïn, el seguimiento terapïutico, el pronïstico, como en el diagnïstico de recaïdas en el ïmbito del cïncer. Ademïs, debido a la capacidad de las cïlulas del cïncer, y mïs particularmente del cïncer de mama, de tiroides, de pulmïn o de la prïstata para producir ProNGF, la presente invenciïn se refiere tambiïn a la terapia.

En la mujer, el cïncer de mama es la primera causa de mortalidad por cïncer en los païses desarrollados. Se estima que el tamaïo mïnimo de un tumor detectable por mamografïa es de algunos milïmetros (mm) . Los cïnceres de mama se desarrollan lentamente. Sin embargo, este tumor de pequeïo tamaïo presenta un pasado evolutivo de 8

aïos de media durante el diagnïstico. La etiologïa del cïncer de mama no estï bien definida. Se han puesto en evidencia unas predisposiciones familiares. La edad es el factor de riesgo mïs importante. Asï, el riesgo aumenta el 0, 5% por aïo de edad en los païses occidentales. Se conocen otros factores de riesgo, tales como el nïmero de embarazos y la edad del primer embarazo, la lactancia, la edad de la pubertad y de la menopausia, los tratamientos estrogïnicos despuïs de la apariciïn de la menopausia, el estrïs y la nutriciïn.

El ensayo disponible y utilizado en la detecciïn masiva del cïncer de mama es una tïcnica de procesamiento de imïgenes: la mamografïa. Gracias a esta tïcnica, la mortalidad debida a los cïnceres de mama ha disminuido enormemente (del 30% de reducciïn de la mortalidad) , lo que subraya la importancia de la detecciïn de los tumores en tïrminos de salud pïblica. Sin embargo, las tïcnicas de detecciïn sufren un cierto nïmero de obstïculos. La mamografïa necesita un material con buen rendimiento y un personal cualificado, lo que es costoso en el marco de una detecciïn masiva.

El cïncer de tiroides es un cïncer raro. Representa aproximadamente el 1% de los cïnceres que aparecen en la poblaciïn general en Francia. Su incidencia anual es baja, es decir aproximadamente el 2, 5 por 100.000 personas (Cancers: ïvaluation, traitement et surveillance. JM Andrieu & P Colonna Ed. ESTEM, Paris 1997) . El nïmero de nuevos casos de cïncer de tiroides en los Estados Unidos en 2006 se estimï en 30.000, y los fallecimientos en 1500

(American Cancer Society.: Cancer Facts and Figures 2006. Atlanta, Ga: American Cancer Society, 2006) .

El cïncer de tiroides se desarrolla habitualmente en forma de un nïdulo situado dentro de la glïndula tiroides, ya sea de tamaïo normal o aumentado (bocio) . Es un cïncer raro, mïs frecuente en los sujetos jïvenes, y cuyo pronïstico es bueno cuando el cïncer estï en su forma papilar ya que la curaciïn se produce en el 90% de los casos.

La prevalencia del nïdulo tiroideo es variable segïn los medios de detecciïn. Es mïs frecuente en la mujer, el sujeto mayor, los sujetos que viven en una zona de carencia de yodo o que han sufrido una irradiaciïn de la regiïn cervical durante la infancia, pero estos nïdulos son benignos en mïs del 90% de los casos. Los sujetos jïvenes estïn mïs expuestos al desarrollo del cïncer debido a una mayor sensibilidad de la tiroides a la irradiaciïn.

Segïn la clasificaciïn histolïgica internacional, se distinguen cuatro tipos histolïgicos principales de carcinoma de la 40 tiroides:

-Los epiteliomas papilares,

-Los epiteliomas vesiculares (o foliculares, tïrmino anglosajïn) ,

-Los epiteliomas medulares,

-Los epiteliomas anaplïsicos (o indiferenciados) .

Estos tumores pueden ser solitarios o multifocales.

Los cïnceres papilares son los mïs frecuentes. Predominan en los sujetos jïvenes y representan aproximadamente el 80% de los cïnceres tiroideos.

Los cïnceres vesiculares representan aproximadamente el 10% de los cïnceres tiroideos y son sobretodo frecuentes alrededor de la cuarentena.

Los cïnceres papilares y vesiculares representan el grupo de los cïnceres tiroideos diferenciados radiosensibles. Segregan Tiroglobulina.

Los cïnceres medulares representan el 5% de los cïnceres tiroideos y corresponden a un tumor de las cïlulas C o parafoliculares procedentes de la cresta neural. Las cïlulas C segregan la calcitonina.

Los cïnceres anaplïsicos o indiferenciados son raros (menos del 5% de los casos) y de una gravedad extrema.

En presencia de un nïdulo tiroideo maligno, el tratamiento de base es la cirugïa.

Si persiste un tejido funcional residual, se administra una dosis de yodo 131 en cïmara aislada, 4 a 6 semanas despuïs de una tiroidoctemïa total, a fin de esterilizar totalmente.

El cuarenta por ciento aproximadamente de las metïstasis de los cïnceres tiroideos fijan el yodo y pueden por lo tanto ser tratados por este mïtodo.

Despuïs de la tiroidoctemïa total y de la esterilizaciïn de la tiroides por yodo 131, se administra la tiroxina, hormona inhibidora de la secreciïn de la TSH. Esta hormonoterapia permite tambiïn asegurar un equilibrio tiroideo satisfactorio sobre el plano funcional. El descubrimiento de nuevos marcadores de diagnïstico, pronïstico y de una terapïutica dirigida, podrïa permitir complementar el arsenal terapïutico y diagnïstico de este cïncer.

Responsable de mïs de 25.000 nuevos casos cada aïo en Francia, el cïncer de pulmïn puede ser considerado como un problema principal de salud pïblica. El cïncer mïs frecuente en el hombre, representa en efecto la primera causa de mortalidad por cïncer en el hombre y la tercera en la mujer. El nïmero de nuevos casos de cïncer de pulmïn (de cïlulas no pequeïas y con pequeïas cïlulas combinadas) en los Estados Unidos en 2006 se estimï en 174.470, y los fallecimientos en 162.460 (American Cancer Society.: Cancer Facts and Figures 2006. Atlanta, Ga: American Cancer Society, 2006) .

En el interior de los cïnceres primitivos, el examen de las cïlulas cancerïgenas (examen anatomopatolïgico) 20 permite distinguir:

-los cïnceres epidermoides (35-40%) ;

-los adenocarcinomas (25-35%) ;

-los carcinomas de grandes cïlulas (10-15%) ;

-los carcinomas de pequeïas cïlulas (20-25%) .

Estas cuatro categorïas representan cerca del 95% de los cïnceres de pulmïn. Las tres primeras estïn agrupadas en "carcinoma de cïlulas no pequeïas" (Non small cell lung cancer, NSCLC) .

El cïncer de pequeïas cïlulas evoluciona mucho mïs rïpidamente y es mïs susceptible de extenderse a otros ïrganos. Mïs raros, los tumores carcinoides y los tumores muco-epidermoides representan del 1 al 2% restante.

Se pueden resumir estas clasificaciones en "cïncer de pulmïn de pequeïas cïlulas" (13%) o "de cïlulas no pequeïas" (87%) , con implicaciones terapïuticas diferentes. Los esfuerzos de detecciïn precoz no han demostrado su eficacia con las herramientas actuales (Radio pulmonar, anïlisis de los esputos, fibroscopïa, no mejoran la supervivencia) . Es posible que el escïner espiral o los anïlisis moleculares de los esputos pueda permitir una detecciïn mïs precoz, con cïnceres mïs fïcilmente resecables. Sin embargo, no se ha descubierto aïn ninguna herramienta de detecciïn, debido en particular a los riesgos relacionados con las biopsias pulmonares y con la cirugïa, sobretodo en los pacientes fumadores. Sin tratamiento, el cïncer de pulmïn de pequeïas cïlulas es el mïs agresivo de los tumores pulmonares, con una supervivencia mediana de sïlo 2 a 4 meses. Comparado con otros tipos de cïncer de pulmïn, el cïncer de pulmïn de pequeïas cïlulas tiende a la diseminaciïn antes del diagnïstico, pero es mïs sensible a la quimioterapia y a la radioterapia. El cïncer de pulmïn de cïlulas no pequeïas (NSCLC) recubre diferentes histologïas. Las histologïas mïs comunes son el carcinoma epidermoide o escamoso, el

adenocarcinoma, y el carcinoma de grandes cïlulas. Estas histologïas estïn frecuentemente clasificadas juntas por que los enfoques de diagnïstico, de gradaciïn, de establecimiento... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento de diagnïstico in vitro del cïncer, caracterizado por que consiste en determinar la presencia de ProNGF en una muestra biolïgica que proviene de un paciente sospechoso de padecer cïncer.

2. Procedimiento de diagnïstico in vitro del cïncer segïn la reivindicaciïn 1, caracterizado por que el cïncer es un 5 cïncer de mama, de tiroides o de pulmïn.

3. Procedimiento de diagnïstico in vitro del cïncer segïn la reivindicaciïn 2, caracterizado por que el cïncer es un cïncer de mama.

4. Procedimiento de diagnïstico in vitro del cïncer segïn la reivindicaciïn 2, caracterizado por que el cïncer es un cïncer de pulmïn.

5. Procedimiento de diagnïstico in vitro del cïncer segïn la reivindicaciïn 2, caracterizado por que el cïncer es un cïncer de tiroides.

6. Procedimiento segïn una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que la presencia de ProNGF se pone en evidencia por detecciïn directa del ProNGF en dicha muestra biolïgica.

7. Procedimiento segïn la reivindicaciïn 6, caracterizado por que la detecciïn del ProNGF se pone en prïctica 15 mediante un ensayo inmunolïgico o por espectrometrïa de masas.

8. Procedimiento segïn una de las reivindicaciones 6 ï 7, caracterizado por que dicha muestra biolïgica estï constituida de fluido biolïgico o de un tejido que proviene de la biopsia del tumor o de metïstasis.

9. Procedimiento segïn la reivindicaciïn 8, caracterizado por que la muestra biolïgica estï constituida de un tejido que proviene de la biopsia del tumor o de metïstasis del paciente.

10. Procedimiento segïn la reivindicaciïn 8, caracterizado por que la muestra biolïgica estï constituida de fluido biolïgico, preferentemente previamente tratado para aislar las cïlulas tumorales circulantes contenidas en dicho fluido.

11. Procedimiento segïn la reivindicaciïn 10, caracterizado por que las cïlulas tumorales circulantes son despuïs cultivadas en condiciones tales que segregan ProNGF.

12. Procedimiento segïn una de las reivindicaciones 10 u 11, caracterizado por que las cïlulas tumorales circulantes son tambiïn cultivadas en condiciones que permiten el bloqueo de ProNGF en el interior de dichas cïlulas.

13. Procedimiento segïn una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que la detecciïn de ProNGF se pone en evidencia por cultivo, en presencia de dicha muestra biolïgica, de cïlulas sensibles al ProNGF.

14. Procedimiento segïn la reivindicaciïn 13, caracterizado por que dicha muestra biolïgica estï constituida de una

muestra de fluido biolïgico, preferentemente tratado para aislar las cïlulas tumorales circulantes contenidas en dicho fluido.

15. Procedimiento segïn la reivindicaciïn 14, caracterizado por que las cïlulas tumorales circulantes son despuïs cultivadas en condiciones tales que segregan ProNGF.

16. Utilizaciïn del procedimiento segïn cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el diagnïstico precoz, la

detecciïn, el seguimiento terapïutico, el pronïstico y el diagnïstico de recaïdas en el ïmbito del cïncer, siendo dicho cïncer preferentemente el cïncer de mama, de tiroides o de pulmïn.

17. Utilizaciïn de un inhibidor de ProNGF para la preparaciïn de un medicamento destinado al tratamiento del cïncer de mama, de tiroides, de prïstata, o de pulmïn; caracterizada por que el inhibidor es un anticuerpo especïfico de ProNGF, las fracciones de anticuerpo especïfico del ProNGF, un anïlogo en forma soluble de un receptor de ProNGF, un siRNA de un receptor de ProNGF, un oligonucleïtido antisentido de dicho receptor, un pïptido derivado de ProNGF que ha conservado las propiedades de uniïn al receptor de ProNGF o un anticuerpo especïfico dirigido contra el receptor de ProNGF.

18. Utilizaciïn segïn la reivindicaciïn 17, caracterizada por que dicho inhibidor de ProNGF se puso previamente en condiciones tales que penetra especïficamente en las cïlulas de interïs.

19. Composiciïn farmacïutica, caracterizada por que comprende, a tïtulo de principio activo, al menos un inhibidor de ProNGF, para su utilizaciïn en el tratamiento del cïncer de mama, de tiroides, de prïstata o de pulmïn, caracterizada por que el inhibidor es un anticuerpo especïfico anti-Pro-NGF, las fracciones de anticuerpo especïfico del ProNGF, un anïlogo en forma soluble de un receptor de ProNGF, un siRNA de un receptor de ProNGF o un oligonucleïtido antisentido de dicho receptor, un pïptido derivado de ProNGF que ha conservado las propiedades 50 de uniïn al receptor de ProNGF o un anticuerpo especïfico dirigido contra el receptor de ProNGF.