Direccionamiento del factor H del complemento para el tratamiento de enfermedades.

Una molécula CR2-FH que comprende:

(a) una porción CR2 que comprende un CR2 o un fragmento del mismo,

comprendiendo el fragmento del mismo al menos los primeros dos dominios de SCR N-terminales de CR2, y

(b) una porción FH que comprende un FH o un fragmento del mismo, comprendiendo el fragmento del mismo al menos los primeros cuatro dominios de SCR N-terminales de FH,~

en la que la porción CR2 de la molécula CR2-FH es capaz de unirse a un ligando de CR2, y

en la que la porción FH de la molécula CR2-FH es capaz de inhibir la activación del complemento de la ruta alternativa.

Direccionamiento del factor H del complemento para el tratamiento de enfermedades CAMPO TÉCNICO

Esta solicitud se refiere a composiciones y métodos para tratar enfermedades en las que está implicada la ruta alternativa del complemento. Específicamente, la solicitud se refiere a una molécula CR2-FH y sus usos para tratar enfermedades en las que está implicada la ruta alternativa del complemento.

DECLARACIÓN CON RESPECTO A LA INVESTIGACIÓN O DESARROLLO PATROCINADO POR EL GOBIERNO FEDERAL

Esta Invención se llevó a cabo con el apoyo del gobierno bajo los números de Concesión (Contrato): AI47469, AI3115, y EY1352 adjudicados por el National Instltutes of Health.

ANTECEDENTES

El complemento es el término colectivo para una serle de proteínas de la sangre, y es un mecanismo efector Importante del sistema ¡nmunitario. El complemento desempeña un papel importante en la patología de muchas enfermedades autolnmunltarias, inflamatorias, e Isquémicas, y también es responsable de muchos estados mórbidos asociados con bioincompatibilidad. La activación Inapropiada del complemento y su deposición en células hospedantes puede conducir a lisis celular de estructuras diana mediada por el complemento, así como a la destrucción tlsular debido a la generación de mediadores poderosos de la inflamación.

El complemento se puede activar mediante una de las tres rutas, las rutas clásica, lectínica, y alternativa. La ruta clásica es activada a través de la unión de la proteína C1q del sistema de complemento a complejos de antígeno- antlcuerpo, pentraxlnas, o células apoptótlcas. Las pentraxinas incluyen proteína reactiva C y el componente P amllolde del suero. La ruta lectínica es Iniciada por sacáridos microbianos vía la lectina que se une a mañosa. La ruta alternativa es activada en superficies de patógenos que tienen características de cargas neutras o positivas y que no expresan o contienen Inhibidores del complemento. Esto es debido al proceso denominado "ralentí" de C3 que se produce espontáneamente, que implica la interacción de C3 conformacionalmente alterado con el factor B, y da como resultado la fijación de C3b activo sobre patógenos u otras superficies. La ruta alternativa también se puede iniciar cuando ciertos anticuerpos bloquean mecanismos reguladores endógenos, mediante complejos inmunitarios que contienen IgA, o cuando se disminuye la expresión de proteínas reguladoras del complemento. Además, la ruta alternativa es activada por un mecanismo denominado el "bucle de amplificación" cuando C3b que se deposita sobre dianas vía la ruta clásica o lectínica se une entonces al factor B. Muller-Eberhard, 1988, Ann. Rev. Biochem. 57:321. Por ejemplo, Holers y colaboradores han mostrado que la ruta alternativa está amplificada en sitios de lesión local cuando se reclutan células inflamatorias tras la activación inicial del complemento. Girardi et al., J. Clin. Invest. 23, 112:1644. La amplificación drástica del complemento a través de la ruta alternativa se produce entonces a través de un mecanismo que implica la generación adicional de células lesionadas que fijan el complemento, la síntesis local de componentes de la ruta alternativa, o más probablemente debido a que estas células inflamatorias infiltrantes que poseen C3 y properdina preformados incrementan enormemente la activación específicamente en ese sitio.

La activación de la ruta alternativa se inicia cuando el factor B circulante se une a C3 activado. Este complejo es escindido entonces por el factor D circulante para producir un fragmento enzimáticamente activo, C3bBb. C3bBb escinde C3 generando C3b, que conduce la inflamación y también amplifica adicionalmente el proceso de activación, generando un bucle de retroalimentación positivo. El factor H (FH) es un regulador (inhibidor) clave de la ruta alternativa del complemento. Funciona compitiendo con el factor B por la unión a C3b. La unión de C3b al factor H también conduce a la degradación de C3b por el factor I a la forma inactiva C3b¡ (también denominada ¡C3b), ejerciendo de ese modo una comprobación adicional sobre la activación del complemento. La concentración plasmática real del factor H es aproximadamente 5 pg/ml, proporcionando regulación del complemento en la fase fluida, pero su unión a las células es un fenómeno regulado que está potenciado por la presencia de una superficie cargada negativamente, así como C3b, C3bi, o C3d fijos. Jozsi et al., Histopathol (24) 19:251-258.

Se ha demostrado que la disminución de la activación del complemento es eficaz en el tratamiento de varias indicaciones patológicas en modelos de animales y en estudios ex vivo, por ejemplo lupus eritematoso sistémico y glomerulonefritis (Y. Wang et al., Proc. Nati. Acad. ScL; 1996, 93: 8563-8568), artritis reumatoide (Y. Wang et al., Proc. Nati. Acad. ScL, 1995; 92: 8955-8959), derivación cardiopulmonary hemodiálisis (C. S. Rinder. J. Clin. Invest., 1995; 96: 1564-1572), rechazo hiperagudo en transplante de órganos (T. J. Kroshus et al., Transplantation, 1995; 6: 1194-122), infarto de miocardio (J. W. Homeister et al., J. Immunol., 1993; 15: 155-164; H. F. Weisman et al., Science, 199; 249: 146-151), lesión por reperfusión (E. A. Amsterdam et al., Am. J. Physiol., 1995; 268: H448- H457), y síndrome disneico del adulto (R. Rabinovici et al., J. Immunol., 1992; 149: 1744-175). Además, otras afecciones inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias/del complejo ¡nmunitario también están estrechamente asociadas con activación del complemento (B. P. Morgan. Eur. J. Clin. Invest., 1994; 24: 219-228), incluyendo lesión térmica, asma severo, choque anafiláctico, inflamación del intestino, urticaria, angioedema, vasculitis, esclerosis múltiple, miastenia grave, glomerulonefritis membranoproliferativa, y síndrome de Sjogren. Los inhibidores del

complemento y sus usos también se describen en el documento WO 4/4552 y en la patente U.S. n° 6.521.45. BREVE SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La Invención en un aspecto proporciona una molécula CR2-FH que comprende: a) una porción CR2 que comprende un CR2 o un fragmento del mismo, comprendiendo el fragmento del mismo al menos los primeros dos dominios de SCR N-termlnales de CR2, y b) una porción FH que comprende un FH o un fragmento del mismo, comprendiendo el fragmento del mismo al menos los primeros cuatro dominios de SCR N-terminales de FH, en el que la porción CR2 de la molécula CR2-FFI es capaz de unirse a un ligando de CR2, y en el que la porción FH de la molécula CR2-FH es capaz de Inhibir la activación del complemento de la ruta alternativa.

En algunas realizaciones, se proporciona una molécula CR2-FH aislada. En algunas realizaciones, se proporciona una composición (tal como una composición farmacéutica) que comprende una molécula CR2-FFI. En algunas realizaciones, la porción CR2 y la porción FH están directa o indirectamente fusionadas entre sí en forma de una proteína de fusión. En algunas realizaciones, la porción CR2 y la porción FH están enlazadas vía un reticulador químico. En algunas realizaciones, la porción CR2 y la porción FH no están enlazadas covalentemente.

En algunas realizaciones, se proporciona una proteína de fusión CR2-FH. En algunas realizaciones, la porción CR2 y la porción FH están directamente fusionadas (es decir, enlazadas) entre sí. En algunas realizaciones, la porción CR2 y la porción FH están enlazadas vía una secuencia ligadora de aminoácido. En algunas realizaciones, el término C de la porción CR2 está enlazado (directa o indirectamente) al término N de la porción FH. En algunas realizaciones, el término N de la porción CR2 está enlazado (directa o indirectamente) al término C de la porción FH.

En algunas realizaciones, la molécula CR2-FH comprende dos o más (tal como cualquiera de dos, tres, cuatro, cinco, o más) porciones CR2. Estas porciones CR2 pueden ser iguales o diferentes, por ejemplo en términos de secuencias de aminoácidos, estructuras, y/o funciones. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la molécula CR2-FH (tal como una proteína de fusión CR2-FH) comprende: 1) dos o más porciones CR2 que comprenden un CR2 o un fragmento del mismo, y 2) una porción FH que comprende un FH o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, la molécula CR2-FH (tal como una proteína de fusión CR2-FH) comprende: 1) dos o más porciones CR2 que comprenden un CR2 o un fragmento del mismo, y 2) una porción FH que comprende un FH o un fragmento del mismo, en el que la molécula CR2-FH es capaz de unirse a un ligando de CR2, y en el que la molécula CR2-FH es capaz de inhibir la activación del complemento de la ruta alternativa.

En algunas realizaciones, la molécula CR2-FH comprende dos o más (tal como cualquiera de... [Seguir leyendo]

1. Una molécula CR2-FH que comprende:

(a) una porción CR2 que comprende un CR2 o un fragmento del mismo, comprendiendo el fragmento del mismo al menos los primeros dos dominios de SCR N-termlnales de CR2, y

(b) una porción FH que comprende un FH o un fragmento del mismo, comprendiendo el fragmento del mismo al menos los primeros cuatro dominios de SCR N-terminales de FH,

en la que la porción CR2 de la molécula CR2-FH es capaz de unirse a un ligando de CR2, y

en la que la porción FH de la molécula CR2-FH es capaz de inhibir la activación del complemento de la ruta alternativa.

2. La molécula CR2-FH de la reivindicación 1, en la que la molécula CR2-FH comprende dos o más porciones FH.

3. La molécula CR2-FH de la reivindicación 1, en la que la porción CR2 comprende los primeros cuatro dominios de SCR N-terminales de CR2, y la porción FH comprende los primeros cinco dominios de SCR N-terminales de FH.

4. La molécula CR2-FH de la reivindicación 3, en la que la porción CR2 comprende aminoácidos 23 a 271 de SEC ID NO: 1, y la porción FH comprende aminoácidos 21 a 32 de SEC ID NO: 2.

5. La molécula CR2-FH de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que la molécula CR2-FH es una proteína de fusión.

6. Un polinucleótido que codifica la proteína de fusión de la reivindicación 5.

7. Un vector que codifica el polinucleótido de la reivindicación 6.

8. Una célula hospedante que comprende el polinucleótido de la reivindicación 7.

9. Una composición farmacéutica que comprende una molécula CR2-FH de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

1. La composición de la reivindicación 9, en el que la composición es adecuada para administración intraocular, Intravenosa, ¡ntraarterial, subcutánea, intratraqueal, o mediante inhalación.

11. La composición de la reivindicación 9 o 1, para uso en un método para tratar enfermedad en la que está Implicada la ruta alternativa del complemento en un individuo.

12. La composición para uso en un método para tratar enfermedad según la reivindicación 11, en la que la enfermedad en la que está implicada la ruta alternativa del complemento es cualquiera de degeneración macular, artritis reumatoide, isquemia-reperfuslón, rechazo de transplante de órganos, glomerulonefritis membranoprollferativa tipo II (MPGN II), síndrome hemolítico urémico (HUS), y nefritis lúpica, o en la que la enfermedad se caracteriza por síntomas que comprenden anemia hemolítica microangiopática, trombocitopenia e insuficiencia renal aguda.

13. La composición según la reivindicación 12, en la que la enfermedad es degeneración macular relacionada con la edad, o en la que la enfermedad es HUS relacionado con el factor H.