Procedimiento para determinar la parte de la región media de proANP amino-terminal en pacientes que presentan una cardiopatía o que se sospecha que desarrollan o que presentan una cardiopatía.

Procedimiento in vitro para el diagnóstico médico, el pronóstico y el seguimiento terapéutico para pacientes que presentan una cardiopatía o que se sospecha que están desarrollando o que presentan una cardiopatía que comprende las etapas siguientes:

* proporcionar una muestra de un paciente que presenta una cardiopatía o que se sospecha que está desarrollando o que presenta una cardiopatía,

* determinar la zona de la región media de proANP amino-terminal, que comprende del aminoácido 50 al aminoácido 90, o péptidos parciales del mismo en dicha muestra con un inmunoensayo de tipo sándwich que utiliza dos anticuerpos que se unen específicamente a secuencias parciales diferentes de dicha zona de la región media de proANP amino-terminal,

* atribuir el nivel de proANP amino-terminal determinado o el nivel de los péptidos parciales del mismo a un cuadro clínico en el que la atribución a un cuadro clínico se lleva a cabo con la ayuda de un valor límite independiente del IMC de desde 190 hasta 260 pmol/l.

Procedimiento para determinar la parte de la región media de proANP amino-terminal en pacientes que presentan una cardiopatía o que se sospecha que desarrollan o que presentan una cardiopatía.

La presente invención se refiere a un procedimiento in vitro para el diagnóstico médico, el pronóstico y el seguimiento terapéutico para pacientes que presentan una cardiopatía o que se sospecha que desarrollan o que presentan una cardiopatía que comprende las etapas siguientes:

• proporcionar una muestra de un paciente que presenta una cardiopatía o que se sospecha que está desarrollando o que presenta una cardiopatía,

• determinar la zona de la región media de proANP amino-terminal, que comprende del aminoácido 50 al aminoácido 90, o péptidos parciales del mismo en dicha muestra con un inmunoensayo de tipo sándwich que utiliza dos anticuerpos que se unen específicamente a secuencias parciales diferentes de dicha zona de la región media de proANP amino-terminal,

• atribuir el nivel de proANP amino-terminal determinado o el nivel de péptidos parciales del mismo a un cuadro clínico en el que la atribución a un cuadro clínico se lleva a cabo con la ayuda de un valor límite independiente del IMC de desde 190 hasta 260 pmol/l.

La presente invención se refiere además a un ensayo de prueba rápida para realizar el procedimiento de la presente invención y a la utilización de anticuerpos adecuados para el procedimiento y los ensayos según la presente invención.

La insuficiencia cardiaca (HF) es común, se asocia con alta morbimortalidad y es difícil de diagnosticar, particularmente en el servicio de urgencias (ED) [Cleland, J.G. et al., Eur Heart J, 2003. 24 (5) : págs. 442-63; Mosterd, A. et al., Heart, 2007. 93 (9) : págs. 1137-46]. La disnea es el síntoma principal en la mayoría de pacientes con HF. Desgraciadamente, ni la historia del paciente ni el examen físico pueden diferenciar con precisión la disnea debida a HF de la disnea debida a otras causas, tales como enfermedades pulmonares [Mueller, C. et al., Can J Cardiol, 2005. 21 (11) : págs. 921-4; Wang, C.S. et al., Jama, 2005. 294 (15) : págs. 1944-56]. Sin embargo, el diagnóstico preciso es obligado para la selección del tratamiento más apropiado.

Los péptidos natriuréticos de tipo B son marcadores cuantitativos de HF que se ha mostrado que son muy útiles en el diagnóstico de HF. La utilización de péptido natriurético de tipo B (BNP) y su fragmento amino-terminal, propéptido natriurético de tipo B N-terminal (NT-proBNP) aumenta significativamente la precisión de diagnóstico en el ED [Januzzi, J.L., Jr., et al., Am J Cardiol, 2005. 95 (8) : págs. 948-54; Maisel, A.S. et al., N Engl J Med, 2002. 347 (3) : págs. 161-7], y de esa manera mejora la evaluación y el tratamiento del paciente [Moe, G.W. et al., Circulation, 2007. 115 (24) : págs. 3103-10; Mueller, C. et al., N Engl J Med, 2004. 350 (7) : págs. 647-54].

La concentración de péptido natriurético auricular (ANP) en la circulación es aproximadamente de 50 a 100 veces más alta que la de BNP [Pandey, K.N., Peptides, 2005. 26 (6) : págs. 901-32.]. Por tanto, la señal biológica reflejada mediante el aumento de ANP puede ser incluso más importante de manera patofisiológica y por tanto diagnóstica que la señal de BNP. A pesar de esto, se conoce poco sobre el rendimiento diagnóstico de ANP y sus precursores [Cowie, M.R. et al., Lancet, 1997. 350 (9088) : págs. 1349-53]. El ANP maduro se deriva del precursor proANP Nterminal (NT-proANP) , que es significativamente más estable en la circulación que el péptido maduro y por tanto se cree que es un analito más fiable [Vesely, D.L., IUBMB Life, 2002. 53 (3) : págs. 153-9]. No obstante, debido al hecho de que NT-proANP podría someterse a fragmentación adicional [Cappellin, E. et al., Clin Chim Acta, 2001. 310 (1) : págs. 49-52], los inmunoensayos para la medición de proANP de región media (MR-proANP) pueden presentar una ventaja [Morgenthaler, N.G. et al., Clin Chem, 2004. 50 (1) : págs. 234-6].

Las cardiopatías, tales como insuficiencia cardiaca crónica (CHF) , insuficiencia cardiaca aguda, síndrome coronario agudo e infarto de miocardio están ampliamente extendidas y a menudo presentan un pronóstico devastador. El pronóstico temprano de la cardiopatía puede mejorar el desenlace del paciente a través de medidas terapéuticas y preventivas oportunas [Jortani, S.A. et al., Clin Chem 2004; 50:265-278]. Una abundancia de datos sugiere que la evaluación de péptidos natriuréticos representa un complemento útil a rayos X torácicos, electrocardiograma y ecocardiografía Doppler en la verificación del diagnóstico clínico y el pronóstico para cardiopatías sospechadas [Cowie, M.R. et al., Eur Heart J 2003;24:1710-1718]. Los miembros más importantes de la familia de péptidos natriuréticos son péptido natriurético auricular (ANP) y péptido natriurético de tipo B (BNP) . Ambos son marcadores de la función cardiaca. Además de la utilización en la ayuda para establecer el diagnóstico de CHF [Cowie, M.R. et al., Lancet, 1997. 350 (9088) : págs. 1349-53; Mueller, C. et al., N Engl J Med, 2004. 350 (7) : págs. 647-54], se utilizan en la estratificación del riesgo de pacientes con CHF estable o recientemente descompensada [Omland, T. et al., Circulation 1996;93:1963-1969; Anand, I.S. et al., Circulation 2003;107:1278-1283; Cheng, V. et al, J Am Coll Cardiol 2001, 37:386-391] o con síndrome coronario agudo [Morrow, D.A. et al., JAMA 14 de diciembre de 2005; 294 (22) :2866-71] y, además, se utilizan en el seguimiento y la orientación en la terapia de CHF [Troughton, R.W. et al., Lancet 2000, 355:1126-1130].

Tanto BNP como el otro producto de escisión de su precursor, proBNP N-terminal (NT-proBNP) se utilizan actualmente en la evaluación de pacientes con CHF. ANP se origina a partir de la escisión de su precursor proANP. El otro producto de escisión, proANP N-terminal (NT-proANP) es significativamente más estable en circulación que ANP. Por tanto en la técnica anterior, se ha sugerido que NT-proANP es un analito más fiable [Ala-Kopsala, M. et al., Clin Chem, 2004. 50 (9) : págs. 1576-88]. Sin embargo, las regiones N- y C-terminal del pro-péptido N-terminal pueden alterarse a través de degradación enzimática [Seidler, T. et al., Biochem Biophys Res Commun 1999, 255:495-501]. Comúnmente, se considera que BNP y NT-proBNP son más adecuados para el diagnóstico y el pronóstico en pacientes con insuficiencia cardiaca que ANP y NT-proANP. El motivo de esto puede ser que la determinación de ANP y NT-proANP se considera menos reproducible y que errores conceptuales en la mayoría de los diseños de ensayo aplicados conducen a una subestimación parcial de la cantidad de analito circulante [Yoshibayashi, M. et al., Eur J. Endocrinol 1996; 135:265-268; Vesely, D.L. et al., IUBMB Life, 2002. 53 (3) : págs. 153-9].

Habitualmente, un péptido que comprende 28 aminoácidos (99-126) de la sección C-terminal de una prohormona que comprende 128 aminoácidos (proANP; SEC ID no: 2) se denomina la hormona ANP real. Tras la liberación de ANP a partir de su prohormona proANP, se libera una cantidad equimolar del péptido de proANP parcial más grande restante, el proANP N-terminal, que consiste en 98 aminoácidos (NT-proANP; proANP (1-98) ) en la circulación. Como NT-proANP presenta un tiempo de semivida y estabilidad significativamente mayores puede utilizarse NTproANP como parámetro de laboratorio para el diagnóstico, el pronóstico y el seguimiento y el control de terapia en cardiopatías. Para una observación más exhaustiva en la materia, véase: Lothar Thomas (Editor) , Labor und Diagnose, 5ª ed. expandida, subcapítulo 2.14 del capítulo 2, Kardiale Diagnostik, páginas 116-118, y la bibliografía citada en el mismo.

Tanto para la determinación del propio ANP así como para la determinación de NT-proANP en líquidos biológicos (suero, plasma, orina) , se han desarrollado diversos inmunoensayos en el pasado y se han aplicado en la investigación y la práctica clínica. La mayor parte de tales inmunoensayos para la determinación de ANP y NTproANP se basa en el principio conocido de inmunoensayos competitivos, siendo el mejor conocido el radioinmunoensayo (RIA) . Los inmunoensayos competitivos para la determinación de proANP y ANP se describen o utilizan, por ejemplo en [Cappellin, E. et al., Clin Chim Acta, 2001. 310 (1) : págs. 49-52] y [Hiroshi Itoh et al., Journal of Hipertension 1988, 6 (supl. 4) S309-S319; Meleagros, L. et al., ; Peptides, vol. 10, 545-550, 1989; Amir Lerman et al., Lancet 1993, 341:1105-09, 1993; John G F Cleland et al., Heart 1996, 75:410-413; Martin G. Buckley et al., Clinical Science (1999) 97:689-695].

Mediante la utilización de... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento in vitro para el diagnóstico médico, el pronóstico y el seguimiento terapéutico para pacientes que presentan una cardiopatía o que se sospecha que están desarrollando o que presentan una cardiopatía que 5 comprende las etapas siguientes:

• proporcionar una muestra de un paciente que presenta una cardiopatía o que se sospecha que está desarrollando o que presenta una cardiopatía,

• determinar la zona de la región media de proANP amino-terminal, que comprende del aminoácido 50 al aminoácido 90, o péptidos parciales del mismo en dicha muestra con un inmunoensayo de tipo sándwich que utiliza dos anticuerpos que se unen específicamente a secuencias parciales diferentes de dicha zona de la región media de proANP amino-terminal,

• atribuir el nivel de proANP amino-terminal determinado o el nivel de los péptidos parciales del mismo a un cuadro clínico en el que la atribución a un cuadro clínico se lleva a cabo con la ayuda de un valor límite independiente del IMC de desde 190 hasta 260 pmol/l.

2. Procedimiento in vitro según la reivindicación 1, en el que la cardiopatía se selecciona de entre el grupo que comprende insuficiencia cardiaca crónica, insuficiencia cardiaca aguda, síndrome coronario agudo e infarto de miocardio.

3. Procedimiento in vitro según las reivindicaciones 1 a 2, en el que dicho procedimiento es un procedimiento para el diagnóstico médico. 25

4. Procedimiento in vitro según las reivindicaciones 1 a 3, en el que el paciente presenta síntomas de disnea y se sospecha por tanto que presenta insuficiencia cardiaca.

5. Procedimiento in vitro según las reivindicaciones 1 a 4, en el que el paciente o el grupo de pacientes presenta un

IMC igual o superior a 30 kg/m2 y la muestra es proporcionada por un paciente que presenta un IMC igual o superior a 30 kg/m2.

6. Procedimiento in vitro según la reivindicación 5, en el que el procedimiento es un procedimiento de pronóstico.

7. Procedimiento in vitro según la reivindicación 5 o 6, en el que la enfermedad es la insuficiencia cardiaca crónica.

8. Procedimiento in vitro según las reivindicaciones 1 a 7, en el que la muestra proporcionada de un paciente se selecciona de entre un grupo que comprende plasma, suero, sangre y orina.

9. Procedimiento in vitro según las reivindicaciones 1 a 8, en el que el procedimiento se lleva a cabo en combinación con otros marcadores y/o procedimientos.

10. Procedimiento in vitro según las reivindicaciones 1 a 9, en el que se determina por lo menos otro marcador en una muestra de paciente, seleccionándose el marcador de entre un grupo que comprende un marcador inflamatorio, 45 un marcador cardiovascular y un marcador isquémico.

11. Procedimiento in vitro según la reivindicación 10, en el que el marcador inflamatorio se selecciona de entre un grupo que comprende proteína-C reactiva (CRP) , citocinas tales como por ejemplo TNF-alfa, interleucinas tales como por ejemplo IL-6, procalcitonina 1-116 o péptidos de la misma que presentan de 12 a 116 aminoácidos, que 50 presentan preferentemente de 100 a 116 aminoácidos y moléculas de adhesión tales como por ejemplo VCAM o ICAM.

12. Procedimiento in vitro según la reivindicación 10, en el que el marcador cardiovascular se selecciona de entre un grupo que comprende mieloperoxidasa, el proBNP completo o fragmentos de péptido de proBNP de por lo menos 12

residuos de aminoácido de longitud incluyendo BNP y NT-proBNP, pro-endotelina-1, pro-adrenomedulina, provasopresina, pro-péptido liberador de gastrina (proGRP) , pro-leptina, pro-neuropéptido-Y, pro-somatostatina, proneuropéptido-YY, pro-opiomelanocortina.

13. Procedimiento in vitro según la reivindicación 10, en el que el marcador isquémico se selecciona de entre un 60 grupo que comprende troponina I o T, CK-MB, mioglobina.

14. Procedimiento in vitro según las reivindicaciones 1 a 13, en el que el procedimiento se realiza como ensayo de prueba rápida.