Composiciones inmunogénicas para PCV2 para uso en un método de prevenir una infección por PCV2.

Una vacuna que comprende 4 a 400 μg/dosis de proteína ORF2 del PCV2 recombinante para uso en un método de prevenir una infección por PCV2 en un cerdo,

en donde dicho método consiste en la administración de una dosis de dicha vacuna a dicho cerdo.

Composiciones inmunogénicas para PCV2 para uso en un método de prevenir una infección por PCV2 LISTADO DE SECUENCIAS

Esta solicitud contiene un listado de secuencias en formato papel y en formato legible por ordenador.

La presente invención proporciona:

[1] Una vacuna que comprende 4 a 400 pg/dosis de proteína ORF2 del PCV2 recombinante para uso en un método de prevenir una infección por PCV2 en un cerdo, en donde dicho método consiste en la administración de una dosis de dicha vacuna a dicho cerdo.

[2] La vacuna de [1] para uso de acuerdo con [1], en donde dicha vacuna comprende un adyuvante.

[3] La vacuna de [1] o [2] para uso de acuerdo con [1] o [2], en donde dicho adyuvante se selecciona del grupo que consiste en polímeros de ácido acrílico o polímeros de ácido metacrílico.

[4] La vacuna de [2] o [3] para uso de acuerdo con [2] o [3], en donde dicho adyuvante es un carbómero, preferiblemente un Carbopol.

[5] La vacuna de uno cualquiera de [2] a [4] para uso de acuerdo con uno cualquiera de [2] a [4], en donde dicho adyuvante comprende aproximadamente 500 pg a aproximadamente 5 mg de Carbopol por dosis.

[6] La vacuna de uno cualquiera de [1] a [5] para uso de acuerdo con uno cualquiera de [1] a [5], en donde dicha vacuna comprende 4 pg a 200 pg de proteína ORF2 del PCV2 recombinante.

[7] Uso de una vacuna que comprende 4 a 400 pg/dosis de proteína ORF2 del PCV2 recombinante para la fabricación de un medicamento para uso en un método de prevenir una infección por PCV2 en un cerdo, en donde dicho método consiste en la administración de una dosis de dicha vacuna a dicho cerdo.

[8] El uso de [7], en donde dicha vacuna comprende un adyuvante.

[9] El uso de [7] u [8], en donde dicho adyuvante se selecciona del grupo que consiste en polímeros de ácido acrílico o polímeros de ácido metacrílico.

[10] El uso de [8] o [9], en donde dicho adyuvante es un carbómero, preferiblemente un Carbopol.

[11] El uso de uno cualquiera de [8] a [10], en donde dicho adyuvante comprende aproximadamente 500 pg a aproximadamente 5 mg de Carbopol por dosis.

[12] El uso de uno cualquiera de [7] a [11], en donde dicha vacuna comprende 4 pg a 200 pg de proteína ORF2 del PCV2 recombinante.

Un aspecto de la presente divulgación se relaciona con la recuperación de una proteína expresada por el marco de lectura abierto 2 (ORF2) del circovirus porcino tipo 2 (PCV2). Más particularmente, la proteína es una proteína recombinante expresada por un virus transfectado que contiene secuencias de codificación recombinantes del circovirus porcino tipo 2, el marco de lectura abierto 2. Aún más particularmente, se deja que el virus transfectado infecte células en un medio de crecimiento y la proteína expresada por el marco de lectura abierto 2 se recupera en el sobrenadante, y no del interior de las células. Más particularmente aún, el método comprende los pasos de amplificar el gen del marco de lectura abierto 2 del circovirus porcino tipo 2, clonar esta porción amplificada en un primer vector, recortar la porción del marco de lectura abierto 2 de este primer vector y clonarla en un vector de transferencia, cotransfectar el vector de transferencia con un vector viral en células en un medio de crecimiento,lograr la infección de las células por el vector viral y de esa manera expresar el marco de lectura abierto 2 y recuperar la proteína recombinante expresada codificada por el marco de lectura abierto 2 en el sobrenadante.

En otro aspecto, la presente divulgación se relaciona con una composición inmunogénica eficaz para inducir una respuesta inmune contra PCV2 y con métodos para producir dicha composiciones inmunogénicas. Más particularmente, la presente divulgación se relaciona con una composición inmunológica eficaz para proveer una respuesta inmune que proteja a un animal que recibe la composición y reducir, o disminuir la gravedad de los síntomas clínicos asociados con una infección por PCV2. Aún más particularmente, la presente divulgación se relaciona con una composición inmunológica basada en proteínas que confiera una protección eficaz contra una infección por PCV2. Aún más particularmente, la presente divulgación se relaciona con una composición inmunológica que comprende el ORF2 de PCV2, en donde la administración de PCV2-ORF2 da como resultado la protección contra una infección por PCV2. Más particularmente, la presente divulgación se relaciona con una composición inmunológica eficaz para conferir una inmunidad eficaz a porcinos que reciban la composición inmunológica y donde la composición comprende la proteína expresada por el ORF2 de PCV2.

Descripción de la Técnica Anterior

El circovirus porcino tipo 2 (PCV2) es un virus a ADN pequeño (17-22 nm de diámetro), icosahédrico, desnudo o sin envoltura, que contiene un genoma circular de cadena simple. El PCV2 comparte un 80% de identidad de secuencia aproximadamente con el circovirus porcino de tipo 1 (PCV1). Sin embargo, a diferencia del PCV1, que en general no es virulento, los porcinos infectados con PCV2 presentan un síndrome conocido comúnmente como síndrome de desmedro multisistémico post-destete (PMWS). El PMWS se caracteriza clínicamente por desmedro o debilidad, palidez de la piel, letargía, dificultad respiratoria, diarrea, ictericia e ictericia ligera. En algunos cerdos afectados, se evidencia una combinación de todos los síntomas, en tanto otros cerdos solamente presentan uno o dos de estos

síntomas. Durante la necropsia, también lesiones microscópicas y macroscópicas en diversos tejidos y órganos, siendo los órganos linfoides el sitio más común de las lesiones. Se ha observado una fuerte correlación entre la cantidad de antígeno o ácido nucleico PCV2 y la gravedad de las lesiones linfoides microscópicas. Los índices de mortalidad en los cerdos infectados con PCV2 pueden acercarse a tanto como un 80%. Además del PMWS, el PCV2 se ha asociado con otras diversas infecciones incluyendo seudorrabia, síndrome reproductor y respiratorio de porcinos (PRRS), enfermedad de Glasser, meningitis estreptocócica, salmonelosis, colibacilosis de post-destete, hepatosis dietética y bronconeumonía supurante.

En el pasado, se ha utilizado la proteína del marco de lectura abierto 2 (ORF2) del PCV2, con un peso molecular aproximado de 30 kDa cuando se corre sobre un gel SDS-PAGE, como un componente antigénico en vacunas para PCV2. Los métodos típicos para obtener el ORF2 para su uso en dichas vacunas comprende en general amplificar el ADN que codifica el ORF2 del PCV2, transfectar un vector viral con el ADN del ORF2, infectar células con dicho vector viral que contiene el ADN del ORF2, permitir que el virus exprese la proteína ORF2 dentro de la célula y extraer la proteína ORF2 de la célula mediante lisis celular. Estos procedimientos generalmente demoran hasta cuatro días después de la infección de las células por el vector viral. Sin embargo, estos procedimientos tienen la desventaja que los procedimientos de extracción son costosos y también demoran mucho tiempo. Además, no se recupera una gran cantidad de ORF2 de las células; en consecuencia, es necesario infectar una gran cantidad de células con una gran cantidad de vectores virales con el fin de obtener cantidades suficientes de la proteína expresada recombinante para su uso en vacunas y semejantes.

Los enfoques actuales sobre inmunización contra PCV2 incluyen vacunas basadas en ADN, tales como las que se describen en la Patente de EEUU N° 6.703.023. Sin embargo, dichas vacunas han resultado ineficaces para conferir una inmunidad protectora contra una infección por PCV2 y los signos clínicos asociados con la misma.

Por consiguiente, persiste en la técnica la necesidad de un método para obtener una proteína ORF2, que no requiera extracción de la proteína ORF2 desde el interior de las células infectadas. También se necesitan métodos de obtención de la proteína ORF2 recombinante en cantidades suficientes como para preparar eficazmente composiciones de vacunas. Se necesitan asimismo métodos para obtener la proteína ORF2 que no comprendan los complicados y trabajosos métodos requeridos por los protocolos actuales de extracción de la proteína ORF2. Finalmente, con respecto a las composiciones, en la técnica se necesita una composición inmunogénica que confiera una inmunidad protectora contra una infección por PCV2 y que disminuya la severidad o permita prevenir los signos clínicos asociados con la misma.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención supera los problemas inherentes de la técnica anterior y provee un avance distintivo en el estado de la técnica. Específicamente, en esta memoria se describen métodos mejorados... [Seguir leyendo]

1. Una vacuna que comprende 4 a 400 pg/dosis de proteína ORF2 del PCV2 recombinante para uso en un método de prevenir una infección por PCV2 en un cerdo, en donde dicho método consiste en la administración de una dosis de dicha vacuna a dicho cerdo.

2. La vacuna de la reivindicación 1 para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicha vacuna comprende un adyuvante.

3. La vacuna de la reivindicación 1 ó 2 para uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde dicho adyuvante se selecciona del grupo que consiste en polímeros de ácido acrílico o polímeros de ácido metacrílico.

4. La vacuna de la reivindicación 2 ó 3 para uso de acuerdo con la reivindicación 2 ó 3, en donde dicho adyuvante es un carbómero, preferiblemente un Carbopol.

5. La vacuna de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en donde dicho adyuvante comprende aproximadamente 500 pg a aproximadamente 5 mg de Carbopol por dosis.

6. La vacuna de una una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde dicha vacuna comprende 4 pg a 200 pg de proteína ORF2 del PCV2 recombinante.

7. Uso de una vacuna que comprende 4 a 400 pg/dosis de proteína ORF2 del PCV2 recombinante para la fabricación de un medicamento para uso en un método de prevenir una infección por PCV2 en un cerdo, en donde dicho método consiste en la administración de una dosis de dicha vacuna a dicho cerdo.

8. El uso de la reivindicación 7, en donde dicha vacuna comprende un adyuvante.

9. El uso de la reivindicación 7 u 8, en donde dicho adyuvante se selecciona del grupo que consiste en polímeros de ácido acrílico o polímeros de ácido metacrílico.

10. El uso de la reivindicación 8 ó 9, en donde dicho adyuvante es un carbómero, preferiblemente un Carbopol.

11. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en donde dicho adyuvante comprende aproximadamente 500 pg a aproximadamente 5 mg de Carbopol por dosis.

12. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 11, en donde dicha vacuna comprende 4 pg a 200 pg de proteína ORF2 del PCV2 recombinante.