Composiciones adyuvantes que comprenden un agente de isotonicidad no iónico.

Una composición adyuvante acuosa que comprende: (a) un agonista de TLR-4 y una saponina,

en una formulación liposomal; y (b) un agente de isotonicidad no iónico, en la que la concentración de cloruro de sodio o el potencial iónico en la composición adyuvante es menor de 100 mM.

Composiciones adyuvantes que comprenden un agente de isotonicidad no iónico Campo de la invención

La presente invención se refiere a composiciones adyuvantes acuosas que comprenden un agente de isotonicidad no iónico y que tienen concentraciones bajas de sal, en particular que tienen concentraciones de cloruro de sodio en, o por debajo de, 1 mM. La presente invención también se refiere a composiciones inmunogénicas que comprenden un antígeno o preparación de antígeno y dichas composiciones adyuvantes acuosas.

Antecedentes de la invención

Los adyuvantes se usan, a veces, para mejorar la respuesta inmune originada a cualquier antígeno dado. Sin embargo, la inclusión de adyuvantes en una vacuna o composición inmunogénica aumenta la complejidad de la preparación de los componentes así como la complejidad de distribución y formulación de la composición de vacuna. La preparación de cada uno de los componentes adyuvantes, así como el componente antigénico debe ser considerada por los formuladores. En particular, se debería considerar la compatibilidad del componente antigénico con el componente adyuvante. Este es particularmente el caso en el que antígenos liofilizados o preparaciones antigénicas están destinados para ser reconstituidos con una preparación adyuvante. En una circunstancia como tal, es importante que el tampón de la preparación adyuvante sea adecuado para el antígeno o preparación antigénica y que la inmunogenicidad o la solubilidad del antígeno no se vea afectada por el adyuvante. El documento US 6. 868.67 desvela vacunas que comprenden péptidos, un adyuvante policatión y una o más sustancias solubles en agua o emulsionares con agua que es capaz de hacer la vacuna ¡sotónica.

Sumario de la invención

Los presentes inventores han descubierto que algunos antígenos son particularmente sensibles a un fenómeno conocido como extracción con sal que se puede definir como la precipitación de una proteína a partir de su solución por saturación con una sal tal como cloruro de sodio. Los presentes inventores han descubierto que los antígenos sensibles se pueden agregar y precipitar a una concentración de cloruro de sodio tan baja como de 15 mM.

Por lo tanto la presente invención proporciona una composición adyuvante isotónica acuosa que comprende un agonista del receptor tipo Toll (TLR) 4, y una saponina en una formulación liposomal y un agente de isotonicidad no iónico, en el que la concentración de cloruro de sodio en dicha composición es menos de 1 mM.

La presente invención proporciona además una composición adyuvante isotónica acuosa que comprende un agonista de TLB-4, y una saponina, en una formulación liposomal, y un agente de isotonicidad no iónico, en donde el potencial Iónico en esta composición es menor de 1 mM.

Además, la presente Invención proporciona una composición adyuvante isotónica acuosa, que se puede usar para un intrvalo más amplio de antígenos de proteína, incluyendo aquéllos que son susceptibles a la "extracción con sal", así como aquéllos que no lo son.

La presente invención también proporciona una composición Inmunogénica que comprende un antígeno o una preparación antigénioa, y una composición adyuvante acuosa que comprende un agonista de TLR-4, y una saponina, en una formulación liposomal, y un agente isotonlco no Iónico, en la que la concentración de cloruro de sodio en la composición adyuvante es menor de 1 mM, y los procedimientos para la elaboración de dichas composiciones inmunogénioas.

Breve descripción de los dibujos

Figura 1. Curva de actividad lítica de QS21.

Figura 2. Porcentaje de cada congénere de 3D-IVIPL en las diferentes formulaciones de ASA.

Figura 3. Ciclo de secado por congelación empleado para la liofilización de PRAME/CpG.

Figura 4. Una comparación pictórica entre PRAME y NYESO-1 reconstituidos en ASA (NaCI 15 mM), y ASA (sorbitol).

Figura 5. Respuesta humoral de los ratones inmunizados con PRAME/CpG formulada con diferentes composiciones adyuvantes en el Experimento 1.

Figura 6. Protección contra tumores en los ratones inmunizados con PRAME/CpG formulada con diferentes

composiciones adyuvantes en el Experimento 1.

Figura 7. Respuesta humoral de los ratones inmunizados con PRAME/CpG formulada con ASA (NaCI 15 mM), ASA (sorbitol), o la formulación liquida de ASA en el Experimento 2.

Figura 8. Respuesta de CD4+ de los ratones inmunizados con PRAME/CpG formulada con ASA (NaCI 15 mM), ASA (sorbitol), o la formulación liquida de ASA en el Experimento 2.

Figura 9. Protección contra tumores en los ratones inmunizados con PRAME/CpG formulada con ASA (NaCI 15 mM), ASA (sorbitol), o la formulación líquida de ASA en el Experimento 2.

Descripción detallada déla invención

La presente invención describe el reemplazo o el reemplazo parcial de un agente de ¡sotonicidad que es una sal, tal como cloruro de sodio, en una composición adyuvante acuosa, con un agente de ¡sotonicidad no iónico.

Es bien sabido que, para la administración parenteral, las soluciones deben ser fisiológicamente ¡sotónicas (es decir, deben tener una osmolaridad farmacéuticamente aceptable), para evitar la distorsión o la lisis celular. Un "agente de isotonicldad" es un compuesto que es fisiológicamente tolerado e imparte una tonicidad adecuada a una formulación (por ejemplo, a las composiciones inmunogénicas de la invención) para prevenir el flujo neto de agua a través de las membranas celulares que están en contacto con la formulación.

Se conocen composiciones adyuvantes acuosas que contienen cloruro de sodio 1 mM o más, por ejemplo, el sistema adyuvante A (ASA) en el documento W25/112991 y documento W28/142133 o los adyuvantes liposomales desvelados en el documento W27/6897. Como se estipula en el documento W28/142133, las composiciones adyuvantes como tales se pueden usar como diluyentes para reconstituir las composiciones llofilizadas que comprenden antígenos o preparaciones antigénicas antes de la vacunación. Es Importante que tales composiciones reconstituidas sean ¡sotónicas, es decir, que contengan una concentración de sal sustancialmente igual a la que se encuentra en las células del cuerpo y de la sangre, de tal manera que con la Inyección no se provoque un encogimiento o una expansión celular. En términos generales, se usa cloruro de sodio en forma de un agente de tonicidad. Los presentes Inventores han descubierto que ciertos antígenos son particularmente sensibles a la "aglomeración por sal", un procedimiento en el que se aglomeran o se coagulan las proteínas en solución cuando están en soluciones que contienen altas concentraciones de sal.

Las concentraciones de sal en las que se aglomeran los antígenos de proteína varían de proteína a proteína. Los

presentes inventores han identificado un grupo de antígenos que se aglomerarán en concentraciones de sal

relativamente bajas, por ejemplo, a aproximadamente 1 mM o menos de cloruro de sodio. Esto significa que ciertas composiciones adyuvantes conocidas no son adecuadas para la reconstitución de, o para usarse con, las composiciones que comprenden estos antígenos a medida que se presenta la aglomeración.

La presente invención proporciona composiciones adyuvantes acuosas que se pueden usar con tales antígenos, es decir, los antígenos que se aglomeran en concentraciones de sal de menos de 1 mM de cloruro de sodio. Las

composiciones adyuvantes acuosas de la invención comprenden un agonista de TLR-4, y una saponina, en una

formulación liposomal, y un agente de isotonicidad no iónico, en la que la concentración de cloruro de sodio en la composición adyuvante está por debajo de aproximadamente 1 mM, por ejemplo, por debajo de 9 mM, 8 mM, 7 mM, 6 mM, 5 mM, 4 mM, 3 mM, 2 mM ó 15 mM. En una realización particular, la concentración de cloruro de sodio en la composición adyuvante está por debajo de 1 mM, o está en o por debajo de 5 mM. En una realización específica adicional, la composición adyuvante está esencialmente libre de cloruro de sodio. Esencialmente libre significa que la concentración de cloruro de sodio está en o muy cerca de cero mM (es decir, 1 mM, 2 mM, 63 mM).

La persona experta puede probar fácilmente la concentración de iones tanto de sodio (Na+) como de cloruro (CI1), usando las técnicas y los kits conocidos. Por ejemplo, el sodio se puede determinar usando un kit, tal como el Kit de Ensayo Enzimático de Sodio (Número de Catálogo: BQ11EAEL) de Biosupply. El cloruro se puede determinar usando un kit, tal como el Kit de Ensayo Enzimático de Cloruro (Número de Catálogo: BQ6EAEL) de Biosupply.

La presente invención proporciona además una... [Seguir leyendo]

1. Una composición adyuvante acuosa que comprende: (a) un agonista de TLR-4 y una saponina, en una formulación liposomal; y (b) un agente de isotonicidad no iónico, en la que la concentración de cloruro de sodio o el potencial iónico en la composición adyuvante es menor de 1 mM.

2. Una composición adyuvante acuosa de acuerdo con cualquier reivindicación precedente en la que el agente de isotonicidad no iónico es un poliol.

3. Una composición adyuvante acuosa de acuerdo con la reivindicación 2, en la que el poliol es sorbitol.

4. Una composición adyuvante acuosa de la reivindicación 3, en la que la concentración de sorbitol es de entre aproximadamente el 4% y aproximadamente el 1% (p/v).

5. La composición adyuvante acuosa de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el agonista de TLR-4 es 3D-MPL.

6. Una composición adyuvante acuosa de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicha saponina es QuilA o un derivado de la misma.

7. Una composición adyuvante acuosa de acuerdo con la reivindicación 6, en la que el derivado de QuilA es QS21.

8. Una composición adyuvante acuosa de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende aproximadamente cloruro de sodio 5 mM, y entre el 5% y el 6% en p/v de sorbitol.

9. Una composición inmunogénica que comprende un antígeno o preparación antigénica, y una composición adyuvante acuosa de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

1. Una composición inmunogénica de acuerdo con la reivindicación 9, en la que dicho antígeno o preparación antigénica no es soluble en concentraciones de sal, o en soluciones en las que el potencial iónico es más alta que 5 mM, 1 mM, 2 mM, 3 mM, 4 mM, 5 mM, 6 mM, 7 mM, 8 mM, 9 mM ó 1 mM.

11. Un procedimiento de preparación de una composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 9 ó 1, que comprende la etapa de reconstituir una composición liofilizada que comprende al menos un antígeno o preparación antigénica con una composición adyuvante acuosa como se define en cualquiera de reivindicaciones 1 a 8.

12. Un kit que comprende: (i) una composición liofilizada que comprende un antígeno o preparación antigénica, y (ii) una composición adyuvante acuosa de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

13. El procedimiento o kit de las reivindicaciones 11 ó 12, en el que el antígeno o preparación antigénica no es soluble en concentraciones de sal, o en soluciones en las que el potencial iónico es mayor de 1 mM, 2 mM, 3 mM, 4 mM, 5 mM, 6 mM, 7 mM, 8 mM, 9 mM ó 1 mM.

14. Una composición inmunogénica de acuerdo con las reivindicaciones 9Ó1 para su uso en medicina.