Composiciones a base de Arthrospira y usos de los mismos.

Un método para preparar una composición antifúngica para uso tópico en un sujeto,

comprendiendo dicho método las etapas de:

1) estresar fisiológicamente Arthrospira, por falta de nutrientes o luz, por deshidratación o retirando hasta un 80% del líquido en el que se está cultivando la Arthrospira; y

2) combinar una cantidad fungicida eficaz de la Arthrospira estresada de (1) con un portador, disolvente, base o excipiente adecuado para administración tópica al sujeto, en el que la cantidad fungicida eficaz es eficaz frente a hongos, y en el que la Arthrospira no se ha liofilizado

Composiciones a base de Arthrospira y usos de los mismos

La presente invención se refiere a una composición antifúngica tópica que comprende una cantidad fungicida eficaz de una Arthrospira fisiológicamente estresada no liofilizada, a un método para preparar dicha composición para uso tópico en un sujeto y a una cantidad fungicida eficaz de Arthrospira fisiológicamente estresada no liofilizada para administración tópica a un sujeto para uso en la prevención o el tratamiento de una infección o infestación fúngica del sujeto.

La Arthrospira (anteriormente conocida como Spirulina) es una cianobacteria que se cultiva principalmente para uso como fuente de alimento y/o protema. Se han descrito también usos terapéuticos para Arthrospira, incluyendo el uso como agente antivirico, agente anticanceroso, reductor del colesterol, reductor de la diabetes, reductor de la hipertensión e inmunomodulador. Véanse, por ejemplo, las referencias citadas en el sitio web de SpirulinaSource.com en http://www.spirulinasource.com/library.html .

El documento WO 1998/25.471 da a conocer un método de preparación de un compuesto de Spirulina tratado, incluyendo dicho método las etapas de rehidratar Spirulina desecada, estresar el cultivo y liofilizar la composición hasta un polvo. El compuesto resultante tiene actividad como compuesto antivirico y compuesto antibacteriano.

Es un objeto de la presente invención proporcionar una composición de Arthrospira para uso como antifúngico.

Los presentes inventores han descubierto que la Arthrospira, cuando se estresa fisiológicamente, produce al menos un tipo de agente bioactivo que es activo contra hongos, bacterias y presuntamente virus. La Arthrospira puede estresase fisiológicamente, por ejemplo, privando al organismo de nutrientes o luz, o deshidratando/secando el organismo. Es una señal de que un filamento de Arthrospira (tracoma) está "fisiológicamente estresado" cuando entra en estado anabiótico, en cuyo estado el filamento se redondea y se produce un recubrimiento mucoide espeso. Se cree por los inventores que el filamento y/o recubrimiento mucoide espeso contiene uno o más agentes bioactivos que protegen al organismo frente a los predadores. Uno o más de los bioactivos pueden degradar la pared celular o exoesqueleto de un organismo predador. Uno o más de los agentes bioactivos pueden ser, por ejemplo, un agente lítico o modificador tal como quitinasa, quitosanasa o quitina desacetilasa, que digiere quitina, un derivado de quitina (tal como quitosano) u otro polímero de pared celular que tenga, por ejemplo, N- acetilglucosamina o D-glucosamina como subunidad polimérica. El peptidoglicano de bacterias grampositivas es uno de dichos polímeros, que comprende A/-acetilglucosamina y ácido /V-acetilmurámico. La quitina, derivado de quitina o polímero puede estar en cualquier forma adecuada. La quitina, derivado de quitina o polímero puede estar en una forma sustancialmente purificada o puede ser parte de un organismo tal como la pared celular de un hongo o bacteria grampositiva, o parte del exoesqueleto de un insecto.

Preferiblemente, el agente bioactivo puede ser una quitinasa, quitosanasa o quitina desacetilasa y el sustrato diana es quitina, un derivado de quitina o un polímero que tiene /V-acetil-D-glucosamina como subunidad polimérica. Preferiblemente, se usa la respirometría para ensayar la modificación (concretamente degradación) de la quitina, derivado de quitina u otro polímero.

La presente invención se refiere a un método de preparación de una composición antifúngica para uso tópico en un sujeto, comprendiendo dicho método las etapas de: (1) estresar fisiológicamente Arthrospira, por falta de nutrientes o luz, por deshidratación o retirando hasta un 8 % del líquido en el que se está cultivando la Arthrospira-, y (2) combinar una cantidad fungicida eficaz de la Arthrospira estresada de (1) con un portador, disolvente, base o excipiente adecuado para administración tópica al sujeto, en el que la cantidad fungicida eficaz es eficaz frente a hongos, y en el que la Arthrospira no se ha liofilizado.

Se reivindican realizaciones preferidas de dicho método en las reivindicaciones dependientes 2 a 6.

La presente invención se refiere también a una composición antifúngica tópica que comprende una cantidad fungicida eficaz de Arthrospira fisiológicamente estresada no liofilizada, en el que el estresado fisiológico se consigue por falta de nutrientes o luz, por deshidratación o por retirada de hasta un 8 % del líquido en el que se está cultivando la Arthrospira, y un portador, disolvente, base o excipiente adecuado para administración tópica a un sujeto, en la que la cantidad fungicida eficaz es eficaz frente a hongos.

Se reivindican realizaciones preferidas de dicha composición en las reivindicaciones 8 a 1.

La invención se refiere finalmente a una cantidad fungicida eficaz de Arthrospira fisiológicamente estresada no liofilizada, en la que el estresado fisiológico se consigue por falta de nutrientes o luz, por deshidratación o retirando hasta un 8 % del líquido en el que se está cultivando la Arthrospira, y un portador, disolvente, base o excipiente para administración tópica a un sujeto, para uso en la prevención o el tratamiento de una infección o infestación fúngica del sujeto.

Se reivindican realizaciones preferidas de dicha cantidad fungicida eficaz de Arthrospira fisiológicamente estresada no liofilizada en las reivindicaciones 12 a 14.

Uso de Arthrospira fisiológicamente estresada como agente biocida y/o terapéutico

La quitina, derivados de quitina y polímeros que contienen glucosamina se encuentran en la naturaleza, habitualmente como componente de una pared celular o exoesqueleto, por ejemplo, de algas, hongos, protozoos, ciliados, celentéreos, briozoos, moluscos, anélidos, artrópodos, branquiópodos, foronídeos, pogonóforos y bacterias (bacterias grampositivas y Rhizobia).

Por ello, la Arthrospira fisiológicamente estresada que tiene actividad lítica o modificadora frente a quitina, derivados de quitina y polímeros que contienen glucosamina puede usarse potenclalmente como agente biocida contra un amplio Intervalo de organismos. "Biocida", como se usa en la presente memoria, hace referencia a la muerte de un organismo o la Inhibición del crecimiento o repllcaclón de un organismo (concretamente, el organismo puede no morir realmente). Ha de apreciarse que algunas aplicaciones del biocida serán con fines terapéuticos, lo que no se reivindica en las reivindicaciones, pero sirve para una mejor comprensión de la invención.

Sorprendentemente, los Inventores han encontrado que sacar a Arthrospira de su entorno de crecimiento puede ser suficiente para que aparezca el estrés fisiológico y para Inducir la expresión de uno o más agentes que tienen actividad biocida. Es decir, las etapas para estresar fisiológicamente Arthrospira como se enseñan en las memorias descriptivas de las patentes de Nueva Zelanda n° 33662 y 336619 no tienen que llevarse a cabo, y la Arthrospira no tiene que procesarse adlclonalmente (desestablllzarse, descomprimirse explosivamente, potenciarse, molerse, rehidratares con bicarbonato de sodio o liofilizarse) para que haya actividad biocida.

Además, se ha encontrado que todas las preparaciones comerclalmente disponibles (comprimidos, cápsulas y polvos) de Arthrospira que se han ensayado hasta ahora por los Inventores tienen actividad contra un sustrato, y se cree que esa actividad es indicativa de actividad biocida. Dichas preparaciones se preparan habitualmente recogiendo Arthrospira, lavando y secando Arthrospira, sin una etapa para estresar específicamente el organismo. De hecho, los cultivadores comerciales de Arthrospira tienden a minimizar el estrés del organismo lo más posible, ya que el recubrimiento mucoide espeso tiende a obstruir la maquinarla para procesar el organismo.

Para una cualquiera o más de las composiciones descritas en la presente memoria, la Arthrospira puede ser cualquier especie adecuada, o mezcla de especies o vahantes de Arthrospira incluyendo, pero sin limitación, A. maxima. Ha de destacarse que Arthrospira y Spirulina son dos géneros separados. La separación entre estos dos géneros se ha afirmado repetidamente basándose en muchas características, incluyendo: helicidad y tamaño del tricoma, estructura de la pared celular y patrón de poros, vacuolas gaseosas, patrón de tilacoides, motilidad y fragmentación del tricoma, contenido de GC, catálogo oligonucleotídico de ARNr de 16S y mutaciones en el locus cpcB-cpcA. Véanse, por ejemplo, J. F. Manen y J. Falquet (22) "The cpcBcpcA locus as a tool for the genetic 'characterization of the genus Arthrospira (Cyanobacteria): evidence for horizontal... [Seguir leyendo]

1. Un método para preparar una composición antifúngica para uso tópico en un sujeto, comprendiendo dicho método las etapas de:

1) estresar fisiológicamente Arthrospira, por falta de nutrientes o luz, por deshidratación o retirando hasta un 8% del liquido en el que se está cultivando la Arthrospira', y

2) combinar una cantidad fungicida eficaz de la Arthrospira estresada de (1) con un portador, disolvente, base o excipiente adecuado para administración tópica al sujeto, en el que la cantidad fungicida eficaz es eficaz frente a hongos, y en el que la Arthrospira no se ha liofilizado.

2. El método de la reivindicación 1, en el que la etapa de estresado fisiológico de Arthrospira comprende retirar hasta un 8% del liquido en el que está creciendo la Arthrospira y la etapa (2) está precedida por las etapas (1a) y (1b) como sigue:

(la) lavado de la Arthrospira estresada para retirar contaminantes;

(lb) secado de la Arthrospira lavada.

3. El método de la reivindicación 1 o 2, en el que la etapa (2) comprende adicionalmente combinar al menos un agente fungiestático con la cantidad fungicida eficaz de Arthrospira estresada y el portador, disolvente, base o excipiente.

4. El método de la reivindicación 3, en el que el agente fungiestático se selecciona del grupo consistente en terbinafina, bifonazol, clotrimazol, miconazol, econazol, ketoconazol y tolnaftato.

5. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la Arthrospira es A. maxima.

6. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el sujeto es un ser humano, un animal, un producto agrícola u hortícola, suelo o una estructura artificial.

7. Una composición antifúngica tópica que comprende una cantidad fungicida eficaz de Arthrospira

fisiológicamente estresada no liofilizada, en la que el estresado fisiológico se consigue por falta de nutrientes o luz o por deshidratación, o retirando hasta un 8% del líquido en el que está creciendo la Arthrospira, y un portador, disolvente, base o excipiente adecuado para administración tópica a un sujeto.

8. La composición antifúngica tópica de la reivindicación 7, en la que el sujeto es un ser humano, un animal, un producto agrícola u hortícola, suelo o una estructura artificial.

9. La composición antifúngica tópica de la reivindicación 7 u 8, en la que la composición comprende

adicionalmente al menos un agente fungiestático.

1. La composición antifúngica tópica de la reivindicación 9, en la que el agente fungiestático se selecciona del grupo consistente en terbinafina, bifonazol, clotrimazol, miconazol, econazol, ketoconazol y tolnaftato.

11. Una cantidad fungicida eficaz de Arthrospira fisiológicamente estresada no liofilizada, en la que el estresado fisiológico se consigue por falta de nutrientes o luz por deshidratación, o retirando hasta un 8% del líquido en el que está creciendo la Arthrospira, y un portador, disolvente, base o excipiente para administración tópica a un sujeto, para uso en la prevención o el tratamiento de una infección o infestación fúngica del sujeto.

12. La cantidad fungicida eficaz de Arthrospira fisiológicamente estresada no liofilizada de la reivindicación 11, para uso en la prevención o el tratamiento de una infección fúngica de un sujeto, en la que el sujeto es un ser humano, un animal, un producto agrícola u hortícola, suelo o una estructura artificial.

13. La cantidad fungicida eficaz de Arthrospira fisiológicamente estresada no liofilizada de la reivindicación 11 o 12, más al menos un agente fungiestático, para administración tópica a un sujeto, para uso en la prevención o el tratamiento de infección o infestación fúngica del sujeto.

14. La cantidad fungicida eficaz de Arthrospira fisiológicamente estresada no liofilizada de la reivindicación 13, en la que el agente fungiestático se selecciona del grupo consistente en terbinafina, bifonazol, clotrimazol, miconazol, econazol, ketoconazol y tolnaftato.