Antígenos proteicos destinados al serodiagnóstico de las infecciones por Staphylococcus aureus, en particular en prótesis osteo-articulares.

Procedimiento in vitro para determinar si un individuo está infectado por una bacteria del género Staphylococcus,

que comprende la detección de anticuerpos dirigidos contra por lo menos una proteína que comprende una secuencia SEC ID nº 40, en una muestra biológica del individuo.

Antígenos proteicos destinados al serodiagnóstico de las infecciones por Staphylococcus aureus, en particular en prótesis osteo-articulares.

Campo de la invención La presente invención se refiere a un procedimiento de diagnóstico de las infecciones por estafilococos.

Antecedentes técnicos Más de 10 millones de individuos en el mundo son portadores de prótesis osteo-articulares (cadera, rodilla, hombro) y este número aumenta regularmente debido al envejecimiento de la población y a los problemas de sobrepeso.

Las infecciones en prótesis articular (IPOA) son una de las principales complicaciones relacionadas con la colocación de una prótesis. Están asociadas a una morbilidad muy alta, ya que necesitan una o más reintervenciones, una larga antibioterapia, y provocan una desventaja funcional importante, frecuentemente prolongada. Las IPOA, en el 50 al 75% de los casos, están causadas por unas bacterias que pertenecen al género Staphylococcus. Una de las principales especies implicadas es S. aureus.

El diagnóstico de IPOA resulta de un haz de argumentos clínicos, paraclínicos y microbiológicos, que en ciertos casos no permiten alcanzar un diagnóstico seguro. El cultivo de extracciones sigue siendo la técnica de referencia que necesita un gesto invasivo y está sujeto a la contaminación bacteriana. Actualmente, no existe ninguna herramienta serológica para el diagnóstico y el seguimiento de IPOA.

En la técnica anterior, se describen numerosas secuencias peptídicas y nucleotídicas procedentes de S. aureus. Así, POCSFALVI et al. Proteomics. Junio de 2008; 8 (12) :2462-76 ha identificado, con la ayuda de un enfoque proteómico, 119 exoproteínas de S. aureus. El documento WO 02/094868 describe 5642 secuencias nucleicas o peptídicas procedentes de S. aureus en el diagnóstico de una infección por S. aureus en un individuo. B. CHRISTENSSON et al. Acta Pathol Microbiol Immunol Scand B. octubre de 1983; 91 (5) :351-6 muestra que con respecto a unos individuos sanos, los pacientes que sufren de una infección por S. aureus tienen unos porcentajes mucho más elevados de anticuerpos dirigidos contra la toxina alfa-hemolisina procedente de S. aureus, que un grupo de pacientes que han desarrollado unas septicemias que no se deben a S. aureus, que tienen unos niveles de anticuerpos normales.

Resumen de la invención El objetivo del estudio era identificar unos antígenos pertinentes para el serodiagnóstico de IPOA por S. aureus. Los inventores han procedido al análisis de la respuesta humoral anti-estafilocócica de pacientes que padecen IPOA por

s. aureus. El estudio se ha realizado mediante la técnica de inmunoproteoma a partir de las proteínas bacterianas segregadas en el medio extracelular. Se han estudiado en paralelo dos cepas de S. aureus resistente (SARM) y sensible (SASM) a la meticilina.

Así, los inventores han mostrado en particular que las proteínas de las secuencias SEC ID nº 1, SEC ID nº 6, SEC ID nº 9, SEC ID nº 11, SEC ID nº 18, SEC 10 nº 20, SEC ID nº 24, SEC ID nº 25, SEC ID nº 26, SEC ID nº 28, SEC ID nº 29, SEC ID nº 30, SEC ID nº 31, SEC ID nº 32, SEC ID nº 36, SEC ID nº 37, SEC ID nº 40, SEC ID nº 41, y SEC ID nº 42 son útiles para el diagnóstico serológico de las infecciones por estafilococos, en particular en el marco de las infecciones sobre prótesis osteo-articulares.

La presente solicitud describe por lo tanto un procedimiento in vitro para determinar si un individuo está infectado por una bacteria del género Staphylococcus, que comprende la detección de anticuerpos dirigidos contra por lo menos una proteína que comprende o que está constituida por una secuencia seleccionada de entre las SEC ID 10 nº 1, SEC ID nº 6, SEC ID nº 9, SEC ID nº 11, SEC ID nº 18, SEC ID nº 20, SEC ID nº 24, SEC ID nº 25, SEC ID nº 26, SEC ID nº 28, SEC ID nº 29, SEC ID nº 30, SEC ID nº 31, SEC ID nº 32, SEC ID nº 36, SEC ID nº 37, SEC ID nº 40, SEC ID nº 41 y SEC ID nº 42, en una muestra biológica del individuo.

La invención es tal como se define en las reivindicaciones.

Descripción detallada de la invención Definiciones Tal como se entiende en la presente memoria, la expresión "bacteria del género Staphylococcus" se refiere a todas las especies o sub-especies comprendidas en este género. Se prefiere sin embargo que la bacteria del género Staphylococcus sea Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus capitis, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus caprae, Staphylococcus warnerii o Staphylococcus hominis.

Tal como se entiende en la presente memoria, la expresión "infectado" o "infección" se refiere a individuos portadores de una bacteria del género Staphylococcus tal como se ha definido anteriormente. Los individuos infectados pueden presentan uno o varios sitios de multiplicación de las bacterias del género Staphylococcus.

Las infecciones por bacterias del género Staphylococcus pueden también ser la consecuencia de una intervención quirúrgica para la colocación de un material extraño. Así, tal como se entiende en la presente memoria, el individuo ha sufrido preferentemente una intervención quirúrgica y, en particular, ha sufrido la implantación de una prótesis, tal como una prótesis articular, en particular seleccionada de entre el grupo constituido por una prótesis de rodilla, una prótesis de cadera y una prótesis de hombro.

La infección diagnosticada en el marco de la presente invención, y para la cual se desea determinar si se debe a la presencia de una bacteria del género Staphylococcus, se puede seleccionar por ejemplo de entre:

-una infección en prótesis (en particular articular) ;

-una infección osteo-articular;

-una infección post-operatoria (en particular durante la colocación de un material extraño, tal como una

prótesis) ;

-una miositis aguda;

-una otitis;

-una sinusitis;

-una infección cutánea supurativa tal como un furúnculo, un ántrax, un panadizo, una foliculitis, una sicosis (por ejemplo en asociación con un tricofitón) , una celulitis, una erisipela, un pénfigo neonatal, un impétigo (por

ejemplo en asociación con estreptococos) o una mastitis (en particular en la vaca) ;

-una infección de vísceras tal como una neumonía (sobre todo como complicación de la gripe) , una endocarditis (en particular en los pacientes portadores de prótesis cardiacas) , una infección urinaria, una

flebitis, una enteritis o una meningitis;

-una infección de los huesos (en particular la osteomielitis) ; y

-una septicemia (en particular unos individuos inmunodeprimidos) .

Tal como se entiende en la presente memoria, la expresión "muestra biológica" incluye al mismo tiempo la muestra tal como se ha extraído y la muestra que ha sido sometida a diversos tratamientos, en particular para hacerla apta para su utilización en los procedimientos y procedimientos según la invención. La "muestra biológica" según la invención puede ser de cualquier tipo susceptible de contener unos anticuerpos dirigidos contra una bacteria del género Staphylococcus, o contener unos antígenos procedentes de una bacteria del género Staphylococcus, pero se prefiere que la muestra biológica se seleccione de entre el grupo constituido por una muestra de sangre, por una muestra de suero, por una muestra de plasma, por una muestra de tejido linfoide asociado a una mucosa (MALT) , por una muestra de líquido cefalorraquídeo, por una muestra de líquido articular, por una muestra de líquido pleural, por una muestra de saliva, y por una muestra de orina.

Como se entiende en la presente memoria, la expresión "determinar si un individuo está infectado por una bacteria del género Staphylococcus" comprende el planteamiento de un diagnóstico o el diagnóstico de una infección por una bacteria del género Staphylococcus tal como se ha definido anteriormente en el individuo. Comprende asimismo el seguimiento de individuos que han sufrido una intervención quirúrgica, en particular para implantar, limpiar o reemplazar una prótesis. Comprende además el seguimiento de una infección por una bacteria del género Staphylococcus, tal como se ha definido anteriormente, en particular en el marco de un tratamiento terapéutico que pretende luchar contra la infección.

En el marco de la presente solicitud, el "individuo" es preferentemente un ser humano. Sin embargo, también puede tratarse de otro mamífero, tal como por ejemplo el mono, el conejillo de indias, la cobaya, el conejo, la rata, el ratón, la vaca, el perro, el gato o el caballo.

Como se entiende en la presente memoria, las expresiones "proteína... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento in vitro para determinar si un individuo está infectado por una bacteria del género Staphylococcus, que comprende la detección de anticuerpos dirigidos contra por lo menos una proteína que comprende una secuencia SEC ID nº 40, en una muestra biológica del individuo.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, que comprende las etapas de:

a) determinar si unos anticuerpos dirigidos contra por lo menos una proteína que comprende la secuencia SEC

ID nº 40 están presentes en la muestra biológica del individuo; y

b) deducir de ello si dicho individuo sufre una infección por una bacteria del género Staphylococcus.

3. Procedimiento según la reivindicación 1 o 2, en el que la bacteria del género Staphylococcus es Staphylococcus aureus.

4. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el individuo ha sufrido la implantación de una prótesis articular.

5. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el individuo ha sufrido la implantación de una prótesis articular seleccionada de entre el grupo constituido por una prótesis de rodilla, una prótesis de cadera y una prótesis de hombro.

6. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la muestra biológica se selecciona de entre el grupo constituido por una muestra de sangre, por una muestra de suero, por una muestra de plasma, por una muestra de tejido linfoide asociado a una mucosa (MALT) , una muestra de líquido cefalorraquídeo, una muestra de líquido articular, una muestra de líquido pleural, una muestra de saliva, y una muestra de orina.

7. Procedimiento según una de las reivindicaciones 2 a 6, en el que la etapa (a) de determinación de la presencia o de la ausencia de anticuerpos dirigidos contra por lo menos una proteína que comprende la secuencia SEC ID nº 40 en la muestra biológica del individuo comprende las etapas de:

a1) poner la muestra biológica en contacto con por lo menos:

(i) una proteína que comprende la secuencia SEC ID nº 40; o (ii) una proteína que comprende una secuencia que comparte por lo menos el 80% de identidad con la secuencia SEC ID nº 40, o (iii) un fragmento de la proteína definida en (i) o en (ii) , comprendiendo dicho fragmento por lo menos 10

aminoácidos;

con la condición de que la proteína definida en (ii) o que el fragmento definido en (iii) pueda ser enlazado por lo menos por un anticuerpo dirigido contra una proteína que comprende la secuencias SEC ID nº 40, y

a2) detectar la presencia o la ausencia de anticuerpos enlazados a la proteína o al fragmento definido en la etapa a1) .

8. Procedimiento según una de las reivindicaciones 2 a 7, en el que la etapa (a) comprende además la determinación de la presencia o de la ausencia de anticuerpos dirigidos contra una proteína que comprende una secuencia SEC ID nº 6, y en el que la determinación de que unos anticuerpos dirigidos contra una proteína que comprende una secuencia SEC ID nº 6 están presentes en la muestra biológica del individuo indica que el individuo está infectado por una bacteria del género Staphylococcus resistente a la meticilina.