Anticuerpos monoclonales que se unen a B7H6 y usos de los mismos.

Un anticuerpo monoclonal aislado que compite por la unión con el dominio extracelular del B7H6 humano como se muestra en los restos de aminoácidos 25-266 de la SEC ID Nº:

2 con un anticuerpo producido por el hibridoma seleccionado del grupo que consiste en:

a) el hibridoma del clon con el número de designación 4E5.5 depositado como Depósito Nº CNCM I-4242; y

b) el hibridoma del clon con el número de designación 17B1.3 depositado como Depósito Nº CNCM I-4245 en el que el anticuerpo monoclonal inhibe la interacción del B7H6 humano con el NKp30 humano e inhibe el reconocimiento celular de células diana que expresan B7H6.

Anticuerpos monoclonales que se unen a B7H6 y usos de los mismos Campo técnico La invención se refiere a anticuerpos monoclonales, como se define en las reivindicaciones, que se unen a un ligando celular tumoral, denominado B7H6. La invención también se refiere a los usos de los anticuerpos, como se define en las reivindicaciones.

Antecedentes Familia B7

Las señales coestimuladoras positivas y negativas desempeñan funciones críticas en la modulación de la actividad de linfocitos, y se ha demostrado que las moléculas que intervienen en estas señales son dianas eficaces para agentes inmunomoduladores. Por ejemplo, después de la interacción con B7-1 o B7-2 sobre la superficie de células presentadoras de antígeno (CPA) , CD28, la molécula coestimuladora prototípica de linfocitos T, emite señales que promueven la proliferación y diferenciación de linfocitos T en respuesta al acoplamiento de receptores de linfocitos T (TcR) , mientras que el antígeno 4 asociado a linfocitos T citotóxicos (CTLA-4) , homólogo a CD28, media la inhibición de las funciones proliferativas y efectoras de linfocitos T. (Véase Chambers y col., Ann. Rev. Immunol., 19: 565-594, 2001; Egen y col., Nature Immunol., 3: 611-618, 2002) .

Se han descubierto diversas moléculas con homología con la familia B7 (Abbas y col., Nat. Med., 5: 1345-6, 1999; Coyle y col., Nat. Immunol., 2: 203-9, 2001; Carreno y col., Annu. Rev. Immunol., 20: 29-53, 2002; Liang y col., Curr. Opin. Immunol., 14: 384-90, 2002) , y su función en la activación de linfocitos está comenzando a aclararse ahora. Estos nuevos contrarreceptores coestimuladores incluyen B7h2, PD-L1, PD-L2, B7-H3 y B7-H4.

La expresión de miembros conocidos de la familia B7 está muy limitada a las células presentadoras de antígeno. Estudios realizados han revelado que los miembros de la familia B7 son contrarreceptores en células linfoides que interaccionan con receptores afines en linfocitos para proporcionar señales coestimuladoras positivas o negativas que desempeñan funciones críticas en la regulación de respuestas inmunitarias mediadas por células.

Células NK y NKp30

Las células asesinas naturales (NK, Natural Killer) son un subconjunto de linfocitos activos en el sistema inmunitario y representan un promedio de aproximadamente 15 % de células mononucleares en sangre periférica humana. Las células NK se describieron inicialmente, desde el punto de vista funcional, en 1971 al observar que ratones letalmente irradiados eran capaces de rechazar aloinjertos de células de médula ósea (CMO) de la cepa parental o alogénica. (Véase Cudowicz y Bennett, J. Exp. Med. 134: 83-102, 1971; Cudowicz y Bennett, J. Exp. Med. 135: 1513-1528, 1971) . Cudowicz y Bennett observaron que ratones F1-híbridos H-2-heterocigotos (A x B) irradiados podrían rechazar CMO H-2-homocigotas parentales (A o B) . Esta observación contradecía las leyes clásicas del trasplante en las que se pensaba que los antígenos de trasplante se heredaban de forma co-dominante y la descendencia era obligadamente tolerante hacia los determinantes del complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) parental. (Véase Cudowicz y Bennett, J. Exp. Med. 134: 83-102, 1971) . Se descubrió que las células responsables de este fenómeno que eran radiorresistentes e idénticas a las células linfoideas, que se caracterizaron después en 1975 por su capacidad para mediar la destrucción espontánea de tumores in vitro de una manera no limitada al CMH. (Véase Herberman y Ortaldo, Science, 214: 24-30, 1981; Ortaldo y Herberman, Annu. Rev. Immunol. 2: 359-394, 1984; Trinchieri, Adv. Immunol. 47: 187-376, 1989; Murphy y col., J. Natl. Cancer Inst. 85: 1475-1482, 1993) . En 1987 surgieron pruebas adicionales de que las células NK en solitario podían mediar la especificidad del rechazo de injerto de médula cuando se observó que las células NK de ratones con inmunodeficiencia combinada grave (IDCG) , que no podían desarrollar linfocitos T y B, tenían un funcionamiento normal (Véase Murphy y col., J. Exp. Med. 165: 1212-1217, 1987) .

Actualmente se entiende que las células NK representan un grupo importante de inmunidad innata y que desempeñan una función principal en la inmunovigilancia contra células tumorales e infectadas por virus. Sin embargo, salvo que estén activadas, las células NK no son eficaces realizando su función normal, incluso cuando están presentes en números de otra manera suficientes. De hecho, la actividad disminuida de células NK está asociada con cáncer y con enfermedades infecciosas (véase Yamazaki y col., Oncology Reports 9: 359-363, 2002; Rosenberg y col., Cancer Research 51: 5074-5079 (suplemento) , 1991; Britteenden y col., Cancer 77: 1226-1243, 1996; Patentes de Estados Unidos Nos 5.082.833 y 4.883.662) . Al contrario, como se ha indicado anteriormente, la actividad de las células NK interviene en el rechazo agudo de aloinjertos de CMO. Por lo tanto, los niveles de actividad de las células NK parecen desempeñar una función importante en los trastornos relacionados con el sistema inmunitario.

Generalmente, la actividad de las células NK está regulada por la interacción entre moléculas de clase I del CMH y receptores inhibidores y activadores. (Véase, por ejemplo, Barao y Murphy, BB&MT 9: 727-741, 2003) . La hipótesis de la pérdida de lo propio (“missing self”) se basa originalmente en la observación de que células tumorales que

carecen de moléculas de clase I del CMH son susceptibles a eliminación por parte de células NK. (Véase Ljunggren y Karre, Immunol. Today 11: 237-244, 1990; Ohlen y col., J. Immunol. 145: 52-58, 1990) . Adicionalmente los investigadores observaron que las células NK humanas producían la lisis de la línea celular linfoblastoide B transformada con el virus de Epstein-Barr carente de moléculas de clase I (Storkus y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA

86: 2361-2364, 1989) . Además, se descubrió que la transfección de genes de clase I en células diana carentes de moléculas de clase I causada por estas células era parcial o completamente resistente a la lisis mediada por células NK. (Véase Storkus y col., citado anteriormente; Shimizu y DeMars, Eur. J. Immunol., 19: 447-451, 1989) . Sin embargo, las moléculas de la clase I del CMH no son siempre necesarias para la protección de la citototoxicidad mediada por células NK, y el reconocimiento por moléculas de la clase I del CMH no siempre impide la citólisis por parte de las células NK. (Barao y Murphy, citado anteriormente) . Durante los últimos años, se han identificado diversos receptores activadores e inhibidores específicos de moléculas de clase I del CMH así como receptores activadores no específicos de moléculas de clase I del CMH. Estos receptores son importantes con respecto a estrategias terapéuticas tales como, por ejemplo, TMO alogénico y terapia contra el cáncer (Véase la cita anterior) .

Los receptores activadores no específicos de moléculas de clase I del CMH, que son capaces de mediar la citotoxicidad de células NK contra dianas que carecen de o que son negativas para la clase I del CMH, están representados en parte por una familia heterogénea de moléculas similares a la inmunoglobulina específicas de células NK que se conocen como receptores de citotoxicidad natural (RCN) . (Véase, por ejemplo, Moretta y col., Annu. Rev. Immunol. 19: 197-223, 2001; Diefenbach y Raulet, Immunol. Rev., 181: 170-184, 2001) . En ausencia de expresión de CMH de clase I (tal como, por ejemplo, en células tumorales o células infectadas con virus) , el ligamiento de estos receptores activadores en células NK desencadena la destrucción de células diana. Un receptor activador de este tipo es NKp30, que se expresa de manera selectiva y constitutiva en células asesinas naturales (NK) maduras y señaliza, entre otros, a través del acoplamiento con CD3. (Véase Barao y Murphy, citado anteriormente) . El ligando célula-diana al cual se une NKp30 no se ha identificado anteriormente.

Este sistema de reconocimiento innato por células NK representa una herramienta posiblemente poderosa para la aplicación clínica en el transplante de médula ósea (TMO) alogénico, en la terapia contra el cáncer o en el tratamiento de otros trastornos asociados con células NK. (Véase, por ejemplo Barao y Murphy, citado anteriormente) . Por ejemplo, la activación estimulante o inhibidora de NKp30 sería útil para modular la actividad de células NK y para el tratamiento de enfermedades o trastornos asociados con la actividad de células NK. En particular, la potenciación de la actividad de células NK desencadenando al receptor NKp30 sería útil para el tratamiento de enfermedades o trastornos, tales como cáncer y enfermedades infecciosas, caracterizados por... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal aislado que compite por la unión con el dominio extracelular del B7H6 humano como se muestra en los restos de aminoácido.

2. 266 de la SEC ID Nº : 2 con un anticuerpo producido por el hibridoma seleccionado del grupo que consiste en:

a) el hibridoma del clon con el número de designación 4E5.5 depositado como Depósito Nº CNCM I-4242; y b) el hibridoma del clon con el número de designación 17B1.3 depositado como Depósito Nº CNCM I-4245 en el que el anticuerpo monoclonal inhibe la interacción del B7H6 humano con el NKp30 humano e inhibe el reconocimiento celular de células diana que expresan B7H6.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo es seleccionado del grupo que consiste en un anticuerpo murino, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado y un anticuerpo humano.

3. El anticuerpo de la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo murino seleccionado del grupo que consiste en:

a) el anticuerpo producido por el hibridoma del clon con el número de designación 4E5.5 depositado como Depósito Nº CNCM I-4242 o un fragmento de unión a antígeno del mismo; y b) el anticuerpo producido por el hibridoma del clon con el número de designación 17B1.3 depositado como Depósito Nº CNCM I-4245 o un fragmento de unión a antígeno del mismo.

4. El anticuerpo de la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo humanizado derivado de un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en:

a) el anticuerpo producido por el hibridoma del clon con el número de designación 4E5.5 depositado como Depósito Nº CNCM I-4242; y b) el anticuerpo producido por el hibridoma del clon con el número de designación 17B1.3 depositado como Depósito Nº CNCM I-4245.

5. El anticuerpo de la reivindicación 1 o 4, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo monocatenario.

6. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 y 4, en el que dicho anticuerpo comprende una región Fc que tiene al menos una de actividad CCDA y actividad ACD.

7. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 6, en el que la región Fc es una Fc monocatenaria (scFc) .

8. Un kit de diagnóstico que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, y medios para detectar la unión por este anticuerpo.

9. Un conjugado de anticuerpo-fármaco que comprende un anticuerpo monoclonal de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que el anticuerpo está conjugado con un agente citotóxico.

10. El conjugado de anticuerpo-fármaco de la reivindicación 9, en el que el agente citotóxico es seleccionado del grupo que consiste en un agente antitubulina, un agente de unión con el surco menor de ADN, un agente alquilante del surco menor de ADN, una duocarmicina y una puromicina.

11. El conjugado de anticuerpo-fármaco de la reivindicación 10, en el que el agente antitubulina es seleccionado del grupo que consiste en dolastatina, un alcaloide de la vinca, una podofilotoxina, un taxano, un derivado de bacatina, una criptoficina, un maitansinoide y una combretastatina.

12. El conjugado de anticuerpo-fármaco de la reivindicación 9, en el que el anticuerpo está conjugado con el agente citotóxico mediante un ligador.

13. El conjugado de anticuerpo-fármaco de la reivindicación 12, en el que el ligador es escindible en condiciones intracelulares.

14. El conjugado de anticuerpo-fármaco de la reivindicación 13, en el que el ligador escindible es un ligador peptídico escindible por una proteasa intracelular.

15. Una composición que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, o el conjugado de anticuerpo-fármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 9-14; y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

16. Un procedimiento in vitro para reducir la actividad de células asesinas naturales (NK) humanas contra una célula que expresa el B7H6 humano, comprendiendo el procedimiento poner en contacto una célula que expresa el B7H6 humano, en presencia de una célula NK humana, con una cantidad eficaz de un anticuerpo monoclonal de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7.

17. Un procedimiento in vitro para agotar o inhibir el crecimiento de células que expresan B7H6 en una población de células que comprende dichas células que expresan B7H6, comprendiendo el procedimiento poner en contacto

dichas células que expresan B7H6 con una cantidad eficaz de un conjugado de anticuerpo-fármaco de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 9-14.

18. Un conjugado de anticuerpo-fármaco de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 9-14 para su uso en el tratamiento de un cáncer que expresa B7H6 en un sujeto.

19. Un anticuerpo monoclonal de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para su uso en el tratamiento de un cáncer que expresa B7H6 en un sujeto.

20. El conjugado de anticuerpo-fármaco para su uso de acuerdo con la reivindicación 18 o el anticuerpo para su uso de acuerdo con la reivindicación 19, en el que el cáncer que expresa B7H6 es un cáncer de colon, hígado, cuello uterino, pulmón, páncreas o próstata; o en el que el cáncer que expresa B7H6 es una leucemia prohemocítica, un linfoma de linfocitos B, un linfoma de linfocitos T, un linfoma monocítico, una eritroleucemia, un linfoma de Burkitt, una leucemia mielógena crónica o una leucemia linfoblástica aguda.

21. Un procedimiento in vitro para detectar la expresión celular de B7H6, comprendiendo el procedimiento:

(1) poner en contacto una muestra biológica, que comprenda una célula humana que va a ser sometida a ensayo, con un anticuerpo monoclonal de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7; y

(2) detectar la unión de dicho anticuerpo; en el que la unión de dicho anticuerpo indica la presencia de B7H6 en la célula, para así detectar si la célula expresa B7H6.

22. El procedimiento in vitro de la reivindicación 21, en el que la muestra biológica comprende células humanas intactas, o en el que la muestra biológica comprende una fracción de membrana de la célula que va a ser sometida a ensayo.

23. El procedimiento in vitro de la reivindicación 21 o 22, en el que el anticuerpo es marcado con un marcador detectable seleccionado del grupo que consiste en un radioisótopo, un marcador fluorescente, un marcador quimioluminiscente, un marcador enzimático y un marcador bioluminiscente.

24. Un anticuerpo monoclonal de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para su uso en el diagnóstico de un cáncer que expresa B7H6 en un sujeto, en el que dicho anticuerpo monoclonal es conjugado con un marcador detectable.

25. El anticuerpo monoclonal para su uso de acuerdo con la reivindicación 24, en el que el cáncer es un cáncer de colon, hígado, cuello uterino, pulmón, páncreas o próstata.

26. Una célula productora de anticuerpos seleccionada del grupo que consiste en:

a) el hibridoma del clon con el número de designación 4E5.5 depositado como Depósito Nº CNCM I-4242; y b) el hibridoma del clon con el número de designación 17B1.3 depositado como Depósito Nº CNCM I-4245.