Anticuerpos monoclonales IL-31 y procedimientos de uso.

Un anticuerpo aislado que se une a IL-31 humana, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo humanizado derivado del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma depositado ante la American Type Culture Collection que tiene la Designación de depósito de patente ATCC PTA-6815;

en el que dicho anticuerpo comprende un dominio constante de inmunoglobulina de cadena pesada el cual es IgG4 humana; en el que dicho dominio constante de IgG4 humana tiene una mutación Ser o Pro en la posición 241 de Kabat.

Anticuerpos monoclonales IL-31 y procedimientos de uso Antecedentes de la invención La piel desempeña un papel importante en el sistema inmunitario y está constituido por capas. La epidermis es una capa superficial. Debajo de la epidermis se encuentra la dermis, una capa de tejido conjuntivo. Debajo de la dermis se encuentra la hipodermis, una capa de grandes cantidades de tejido adiposo. Los linfocitos T circulantes se desplazan a la piel bajo condiciones tanto normales como inflamatorias. El antígeno linfocítico cutáneo (CLA) se considera como un receptor de ecotaxia (homing) para linfocitos T que presentan tropismo por la piel. Santamaria-Babi, L., Eur. J. Dermatol. 14:13-18, 2004.

Se sabe que varias enfermedades de la piel expresan altos niveles de linfocitos T CLA+ que incluyen dermatitis atópica, dermatitis de contacto, reacciones alérgicas inducidas por fármacos, virus trópicos para la piel y prurito asociado a virus, vitíligo, linfoma de linfocitos T cutáneos, alopecia aerata, acné rosácea, acné vulgar, prurito nodular, penfigoide buloso. Existe la necesidad de tratar las enfermedades cutáneas mediadas por linfocitos T cutáneos.

Las actividades in vivo demostradas de la familia citocina ilustran el enorme potencial clínico y la necesidad de otras citocinas, agonistas de citocina y antagonistas de citocina. La IL-31 es una citocina recién identificada. Cuando IL-31 se sobreexpresa en ratones, se tiene como resultado síntomas similares a dermatitis. Tanto linfocitos T con ecotaxia a piel como queratinocitos epidérmicos se han implicado en la patología de enfermedades cutáneas en humanos. La presente invención corrige estas necesidades al proporcionar antagonistas para citocina IL-31 proinflamatorias. Los antagonistas de la presente invención, los cuales pueden bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad de IL-31, incluyen receptores solubles de IL-31RA y anticuerpos anti-IL-31 neutralizantes. La invención proporciona además usos para los mismos en enfermedades inflamatorias así como composiciones y procedimientos relacionados.

La tecnología de anticuerpo monoclonal ha proporcionado una amplia gama de sustancias terapéuticas así como diagnósticos para uso en la identificación y tratamiento de enfermedades. Muchas aplicaciones clínicas se han enfocado en anticuerpos monoclonales murinos antihumanos, los cuales se generan en células de ratón pero los cuales específicamente se unen a un antígeno humano. Además, se han desarrollado anticuerpos quiméricos constituidos de secuencias de aminoácidos humanas y no humanas. Particularmente, las moléculas de anticuerpo híbrido que tienen regiones variables derivadas, por ejemplo de inmunoglobulina murina fusionada a regiones constantes derivadas de inmunoglobulina humana ya se han descrito. Véanse, por ejemplo, la patente de EE.UU. Nº . 4.416.567; Winter et al. (1991) Nature 349:293-299; y Lobuglio et al. (1989) Proc. Nat. Acad. Sci. EE.UU. 86:4220-4224. Además, puesto que las regiones constantes no se requieren para reconocimiento o unión de antígeno, los fragmentos de anticuerpo tales como F (ab) y F (ab’) 2 y Fv, los cuales no comprenden la porción Fc se han indicado como candidatos útiles para terapia clínica.

Se han descrito numerosas moléculas recombinantes o biosintéticas que comprenden sitios que se unen a antígeno en roedores. Particularmente, se han descrito moléculas que tienen sitios de unión a antígeno de roedor construido directamente sobre anticuerpos humanos por injerto de únicamente el sitio de unión de roedor, en vez de la totalidad del dominio variable, en los dominios de cadena pesada y ligera de inmunoglobulina humana. Véase, por ejemplo, Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327 y Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534-1536. Las moléculas que tienen un sitio que se une a antígeno, en donde por lo menos una de las regiones determinadora de complementariedad (CDR) del dominio variable se derivan de un anticuerpo monoclonal murino y las partes remanentes derivadas de inmunoglobulina de la molécula se derivan de inmunoglobulina humana que se han descrito en la publicación de patente del Reino Unido Nº . GB 2.276.169, publicada el 21 de septiembre de 1994. También se han descrito numerosos polipéptidos con sitio de unión a antígeno de cadena sencilla y moléculas de cadena sencilla Fv (sFv, ) . Véanse, por ejemplo, las patentes de EE.UU. NOS. 5.132.405 y 5.091.513 para Huston et al.; y la patente de EE.UU. Nº . 4.946.778 para Ladner et al.

Una o varias de las funciones efectoras del dominio Fc de un anticuerpo incluye fagocitosis, liberación de mediadores inflamatorios, regulación de la producción de anticuerpo y, lo que es más importante, citotoxicidad mediada por célula dependiente de anticuerpo (ADCC, ) y citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) . El grado con el cual cualquiera de estas funciones efectoras se induce dependiendo de la interacción del dominio Fc con los mediadores de proteína relevante, los receptores Fcγ y C1q, y difiere en base en las regiones constantes (Fc) subclase IgG y su interacción con estas proteínas.

El dominio Fc de IgG1 interactúa con FcγRI, FcγRIIa y FcγRIII sobre células efectoras del sistema inmunitario. El papel preciso de los diferentes receptores Fcγ permanece por dilucidarse pero se considera que FcγRIIIA es el receptor mediador de ADCC más importante que se expresa principalmente en células NK pero también en monocitos y macrófagos. IgG1 también se une a Clq y puede activar CDC el cual es mediado principalmente por células NK que expresan FcγRIII. El dominio Fc de IgG4 tiene una afinidad de unión muy reducida por diferentes receptores Fcγ y Clq, que corresponde con una ADCC y CDC reducidas. Aunque IgG1 muestra una actividad

generalmente alta hacia ADCC y CDC, se considera que IgG4 tiene poca o nula actividad ADCC o CDC.

La afinidad de unión de mAb IgG4 negativo efecto se reduce grandemente si n se suprime cuando se compara con otros mAb de otro isotipo de IgG. No obstante, la capacidad para interactuar con el receptor Brambell (FcRn) se retiene en el IgG4 y por lo tanto afecta la farmacocinética del mAb isotipo IgG4 a través de una vida media aumentada.

Por lo tanto, existe la necesidad de moléculas que proporcionen secuencias de aminoácidos de anti-IL-31 humana junto con la molécula Fc de IgG4 humana para tratar inflamación mediada por IL-31.

El documento WO 03/060090 describe la citocina identificada como “ligando Zcytor17.

El documento US 2006/188500 describe procedimientos de pronóstico de respuesta terapéutica en la dermatitis atópica con antagonistas de IL-31.

Presta et al., Advanced Drug Deliver y Reviews, Vol. 58 (5-6) , 7 de agosto de 2006, páginas 640-656 describe ingeniería de anticuerpos terapéuticos para minimizar la inmunogenicidad y optimizar la función.

R&D Systems Inc. (http://rndsystems.com/prf/MAB2824.pdf) , 18 de abril de 2006 proporciona detalles del producto para un anticuerpo de IL-31 humano identificado en el número de catálogo MAB2824.

El documento WO 2006/122079 (publicado el 16 de noviembre de 2006) describe anticuerpos monoclonales de IL31 y procedimientos de uso.

El documento WO 2007/143231 (publicado el 13 de diciembre de 2007) describe procedimientos de tratamiento del dolor e inflamación de tejido neuronal usando antagonistas de IL-31.

Breve descripción de las figuras La figura 1 es una alineación de las secuencias de aminoácidos de los dominios variables a partir de las cadenas ligeras y cadenas pesadas de los clones 292.12.3.1, 292.84.1.6, 292.63.5.3, y 294.144.3.5.

La figura 2 es una alineación de las secuencias de aminoácidos de los dominios variables a partir de las cadenas ligeras y cadenas pesadas de clones y 292.12.3.1 y 292.84.1.6.

Las figuras 3 y 4 son alineaciones de las secuencias de aminoácidos en las regiones variables ligera y pesada de anticuerpos monoclonales de ratón anti-IL-31 humana.

Descripción detallada de la invención Antes de establecer la invención con detalle, puede ser útil para la comprensión de la misma definir los siguientes términos:

Como se utiliza en el presente documento, el término “anticuerpos” incluye anticuerpos policlonales, anticuerpos policlonales purificados por afinidad, anticuerpos monoclonales y fragmentos de unión de antígeno tales como fragmentos F (ab’) 2 y Fab proteolíticos. Los anticuerpos intactos manipulados genéticamente o fragmentos tales como los anticuerpos quiméricos, fragmentos Fv, anticuerpos de cadena sencilla y similares, así como los péptidos que se unen a antígeno sintético y los polipéptidos también se incluyen. Los... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo aislado que se une a IL-31 humana, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo humanizado derivado del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma depositado ante la American Type Culture Collection que tiene la Designación de depósito de patente ATCC PTA-6815;

en el que dicho anticuerpo comprende un dominio constante de inmunoglobulina de cadena pesada el cual es IgG4 humana; en el que dicho dominio constante de IgG4 humana tiene una mutación Ser o Pro en la posición 241 de Kabat.

2. Uso de un anticuerpo monoclonal según la reivindicación 1 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de dermatitis atópica, prurigo nodular, prurito o linfoma de linfocitos T cutáneos.

3. Un anticuerpo monoclonal según la reivindicación 1 para su uso en el tratamiento de dermatitis atópica, prurigo nodular, prurito o linfoma de linfocitos T cutáneos.