Anticuerpos humanos que se adhieren a mesotelina, y usos de los mismos.

Un anticuerpo monoclonal aislado, o una parte de unión a antígeno del mismo,

en donde el anticuerpo es un anticuerpo humano que se adhiere a mesotelina humana y comprende:

(a) una región variable de cadena pesada CDR1 que comprende la SEC ID NO: 2;

(b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende la SEC ID NO: 5;

(c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende la SEC ID NO: 8;

(d) una región variable de cadena ligera CDR1 que comprende la SEC ID NO: 11;

(e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende la SEC ID NO: 14; y

(f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende la SEC ID NO: 17, o

(a') una región variable de cadena pesada CDR1 que comprende la SEC ID NO: 3;

(b') una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende la SEC ID NO: 6;

(c') una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende la SEC ID NO: 9;

(d') una región variable de cadena ligera CDR1 que comprende la SEC ID NO: 12;

(e') una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende la SEC ID NO: 15; y

(f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende la SEC ID NO: 18.

Anticuerpos humanos que se adhieren a mesotelina, y usos de los mismos

Antecedentes de la Invención La mesotelina es una glicoproteína que está presente en la superficie de las células del recubrimiento mesotelial de las cavidades corporales peritoneal, pleural y pericardial. Originalmente se purificó a partir de la línea de célula de cáncer pancreático humano HPC–Y5 y se demostró que tenía capacidad potenciadora de megacariocitos y por lo tanto se denominó factor potenciador de megariocitos (MPF) (Yamaguchi et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:805–808) . El ADNc de mesotelina fue clonado de una genoteca preparada a partir de la línea de células HPC–Y5 (Kojima et al. (1995) J. Biol. Chem. 270:21984–21990) . El ADNc fue también clonado usando el anticuerpo monoclonal K1, que reconoce los mesoteliomas (Chang y Pastan (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:136–40) . Estructuralmente, la mesotelina se expresa en la superficie de las células como un polipéptido precursor de 60 kDa, el cual es procesado proteolíticamente en un componente escindido de 31 kDa (correspondiente a MPF) y un componente adherido a membrana de 40 kDa (Hassan et al. (2004) Clin. Cancer. Res. 10:3937–3942) .

Además de estar expresada en células mesoteliales normales, la mesotelina está hiperexpresada en varios tipos de tumores humanos incluyendo todos los mesoteliomas, muchos cánceres de ovario y pancreáticos, y algunos cánceres de estómago, pulmón y endometrio. Por ejemplo, la mesotelina se expresa en aproximadamente 70 % de todos los cánceres de ovario, aproximadamente 82 % de adenocarcinomas papilares, serosos, aproximadamente 83 % de todos los adenocarcinomas pancreáticos y aproximadamente el 86 % de todos los adenocarcinomas pancreáticos ductales Se han preparado ratones mutantes en los cuales en los cuales el gen de mesotelina fue disociado por recombinación homóloga (Bera, T.K. y Pastan, I. (2000) Mol. Cell. Biol. 20:2902–2906) . No se detectó ninguna anormalidad anatómica, hematológica o reproductiva, lo cual indica que la función mesotelina no es esencial para el crecimiento o reproducción, por lo menos en aquellos ratones.

La mesotelina interactúa específicamente con CA125 (conocida también como MUC–16) , una glicoproteína de tipo mucina que está presente en la superficie de las células tumorales que fueron previamente identificadas como un antígeno de cáncer de ovario. Además, la adhesión de CA125 a mesotelina adherida a membrana actúa como intermediaria en la adhesión de células heterotípicas, y CA125 y mesotelina están co–expresadas en adenocarcinoma de ovario de un grado avanzado (Rump, A. et al. (2004) J. Biol. Chem. 279:9190–9198) . La expresión de mesotelina en el recubrimiento del peritoneo está correlacionada con el sitio preferido de formación de metástasis del cáncer de ovario y se cree que la adhesión de mesotelina–CA125 facilita la metástasis peritoneal de los tumores de ovario (Gubbels, J.A. et al. (2006) Mol. Cancer 5:50) .

La técnica anterior desvela un anticuerpo monoclonal, K1, que se une con mesotelina (Chang et al. (1992) Cancer Research 52: 181-186; Brinkman et al. (1997) Int. J. Cancer 71: 638-644; Li et al. (2004) Anticancer Research 24: 1327-1335; Hassan et al. (2000) J. Immunotherapy 23 (4) : 473-479 y Chowdhur y et al. (1998) PNAS USA 95: 669674) . Además el documento WO99/28471 desvela un sc-Fv que se une con mesotelina.

En vista de lo que antecede, son interesantes los agentes adicionales para modular la actividad de mesotelina 45

Compendio La presente descripción provee anticuerpos monoclonales aislados, en particular, humanos, que se adhieren específicamente a mesotelina y que tienen propiedades deseables tales como adhesión de elevada afinidad con la mesotelina humana, internalización por las células que expresan mesotelina, inhibición de la adhesión de mesotelina a CA125, y/o intermediación de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) . Los anticuerpos de la invención pueden usarse, por ejemplo, para detectar mesotelina o para inhibir el crecimiento de células que expresan mesotelina tales como células tumorales que expresan mesotelina.

La invención proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o una porción de adhesión a antígeno del mismo, en el que el anticuerpo es un anticuerpo humano que se adhiere a mesotelina humana y comprende:

(a) una región variable de cadena pesada CDR1 que comprende la SEC ID NO: 2;

(b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende la SEC ID NO: 5;

(c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende la SEC ID NO: 8;

(d) una región variable de cadena ligera CDR1 que comprende la SEC ID NO: 11;

(e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende la SEC ID NO: 14; y

(f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende la SEC ID NO: 17, o (a’) una región variable de cadena pesada CDR1 que comprende la SEC ID NO: 3;

(b’) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende la SEC ID NO: 6; (c’) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende la SEC ID NO: 9;

(d’) una región variable de cadena ligera CDR1 que comprende la SEC ID NO: 12;

(e’) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende la SEC ID NO: 15; y

(f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende la SEC ID NO: 18.

Un anticuerpo particularmente preferido, o parte de unión a antígeno del mismo, comprende:

(a) una región variable de cadena pesada CDR1 que comprende la SEC ID NO: 2;

(b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende la SEC ID NO: 5;

(c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende la SEC ID NO: 8;

(d) una región variable de cadena ligera CDR1 que comprende la SEC ID NO: 11;

(e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende la SEC ID NO: 14; y

(f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende la SEC ID NO: 17.

Otro anticuerpo particularmente preferido, o parte de unión a antígeno del mismo, comprende: 15

(a) una región variable de cadena pesada CDR1 que comprende la SEC ID NO: 3;

(b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende la SEC ID NO: 6;

(c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende la SEC ID NO: 9;

(d) una región variable de cadena ligera CDR1 que comprende la SEC ID NO: 12;

(e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende la SEC ID NO: 15; y

(f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende la SEC ID NO: 18.

En otro aspecto, la invención se refiere a un anticuerpo monoclonal aislado, o a una porción de éste de adhesión al antígeno, que comprende:

(i) (a) una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 20; y (b) una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 23.

(ii) (a) una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 21; y (b) una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 24.

Los anticuerpos de esta descripción pueden ser, por ejemplo, de un isotipo IgG1 o IgG4. Alternativamente, pueden ser fragmentos de anticuerpos, tales como los fragmentos Fab, Fab’ o Fab’2, o anticuerpos de cadena única.

Esta invención provee también un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo de la invención, o una parte de unión a antígeno del mismo, ligado a una molécula asociada, en el que el conjugado de molécula compañero es un agente terapéutico que está conjugado con el anticuerpo por un enlazador químico. Se describen en el presente documento inmunoconjugados que comprenden un anticuerpo de la invención, o una parte de unión a antígeno del mismo, ligada con el Compuesto Citotoxina A, que se identifica a continuación aquí, y que ha sido discutido en la 2008/083312. La invención provee los siguientes inmunoconjugados preferidos, que comprenden Citotoxina A ligada a un anticuerpo de esta invención, donde el anticuerpo (i) compite por entrecruzamiento con el Anticuerpo de Referencia (a) , (b) , o (c) para la adhesión a un epítopo de mesotelina humana; (ii) de acuerdo con la Realización A;

(iii) de acuerdo con la Realización B; o (iv) de acuerdo con la Realización C. Algunos de estos conjugados de anticuerpo–molécula asociada son capaces de ser internalizados en células que expresan mesotelina y que son capaces de intermediar en ADCC.

Dichos conjugados de anticuerpo–molécula asociada pueden estar conjugados a través de ligadores químicos. En algunas realizaciones, el ligador es un ligador... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal aislado, o una parte de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo es un anticuerpo humano que se adhiere a mesotelina humana y comprende:

(a) una región variable de cadena pesada CDR1 que comprende la SEC ID NO: 2;

(b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende la SEC ID NO: 5;

(c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende la SEC ID NO: 8;

(d) una región variable de cadena ligera CDR1 que comprende la SEC ID NO: 11;

(e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende la SEC ID NO: 14; y

(f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende la SEC ID NO: 17, o (a’) una región variable de cadena pesada CDR1 que comprende la SEC ID NO: 3; (b’) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende la SEC ID NO: 6; (c’) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende la SEC ID NO: 9; (d’) una región variable de cadena ligera CDR1 que comprende la SEC ID NO: 12; (e’) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende la SEC ID NO: 15; y

(f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende la SEC ID NO: 18.

2. El anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada CDR1 que comprende la SEC ID NO: 2;

(b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende la SEC ID NO: 5;

(c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende la SEC ID NO: 8;

(d) una región variable de cadena ligera CDR1 que comprende la SEC ID NO: 11;

(e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende la SEC ID NO: 14; y

(f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende la SEC ID NO: 17.

3. El anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la reivindicación 1 que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada CDR1 que comprende la SEC ID NO: 3;

(b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende la SEC ID NO: 6;

(c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende la SEC ID NO: 9;

(d) una región variable de cadena ligera CDR1 que comprende la SEC ID NO: 12;

(e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende la SEC ID NO: 15; y

(f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende la SEC ID NO: 18.

4. El anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de las reivindicaciones 1 o 2, que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 20; y

(b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 23.

5. El anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de las reivindicaciones 1 o 3, que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 21; y

(b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 24.

6. Una composición que comprende el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de las reivindicaciones anteriores y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

7. Un conjugado de anticuerpo-molécula asociada que comprende el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, y una molécula asociada, en donde la molécula asociada es un agente terapéutico que está conjugado con el anticuerpo por un enlazador químico.

8. Un conjugado de anticuerpo-molécula asociada de acuerdo con la reivindicación 7 para uso en el tratamiento de un cáncer caracterizado por células que expresan mesotelina.

9. El conjugado de la reivindicación 8 para uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el cáncer es un mesotelioma, un cáncer pancreático, un cáncer ovárico, un cáncer de estómago, un cáncer de pulmón o un cáncer endometrial.

10. El conjugado de la reivindicación 8 para uso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en mesoteliomas, adenocarcinomas de ovario serosos papilares, carcinomas de ovario de células claras, carcinomas de ovario Mulerianos mixtos, carcinomas de ovario mucinosos endometroides, adenocarcinomas pancreáticos, adenocarcinomas pancreáticos ductales, carcinomas serosos uterinos, adenocarcinomas de pulmón, carcinomas del conducto biliar extrahepático, adenocarcinomas gástricos,

adenocarcinomas esofágicos, adenocarcinomas colorrectales y adenocarcinomas de mama.

11. Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

12. Un vector de expresión que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 11.

13. Una célula hospedadora que comprende el vector de expresión de la reivindicación 12.

% lisis específica