Anticuerpos contra la IL-17 humana y usos de los mismos.

Anticuerpo de unión a IL-17 humana, caracterizado por que el dominio variable de cadena pesada comprende una región CDR3 de SEC ID nº 1,

una región CDR2 de secuencia SEC ID nº 2, y una región CDR1 de secuencia SEC ID nº 3, y porque el dominio variable de cadena ligera comprende una región CDR3 de secuencia SEC ID nº 4 y una región CDR2 de SEC ID nº 5 y una región CDR1.

Anticuerpos contra la IL-17 humana y usos de los mismos

La presente invención se refiere a anticuerpos contra la IL-17A humana (anticuerpo de IL-17), a métodos para su producción, a composiciones farmacéuticas que contienen dichos anticuerpos y a usos de las mismas.

Antecedentes de la invención

La IL-17A humana (CTLA-8, Swiss Prot n° Q16552, denominada además IL-17) es una citoquina proinflamatoria producida por un subgrupo de células T de memoria (denominadas Th 17) que se cree participa en la patogénesis de la EM. La IL-17A desempeña un papel en la inducción de otras citoquinas inflamatorias, quimoquinas y moléculas de adhesión. El tratamiento de animales con anticuerpos neutralizadores de IL-17A reduce la incidencia y severidad de la enfermedad en la encefalomielitis autoinmunológica (Komiyama Y. et al., J. Immunol. 177:566-573, 26). IL-17A se sobreexpresa en el líquido cerebroespinal de los pacientes de EM (Hellings P.W. et al., Am. J. Resp. Cell Mol. Biol. 28:42-5, 23; Matusevicius D. et al., Múltiple Sclerosis 5:11-14, 1999; documento n° WO 25/51422). Además, los anticuerpos neutralizadores de IL-17A reducen la severidad y la incidencia del modelo de AR de ratón de artritis inducida con colágeno y pueden detectarse niveles elevados de IL-17A en el liquido sinovial de articulaciones inflamadas de pacientes de AR (Ziolkowska M. et al., J. Immunol. 164:2832-2838, 2; Kotake S. et al., J. Clin. Invest. 13:1345-1352, 1999; Hellings P.W. etai, Am. J. Resp. Cell Mol. Biol. 28:42-5, 23).

Los documentos n° WO 96/17939, n° US 5.716.623, n° WO 95/18826, n° WO 97/1532, n° WO 99/35276, n° WO /69436, n° WO 95/18826, n° US 6.274.711, n° WO 97/1532, n° US 6.63.372, n° WO 26/1317 se refieren a IL-17A y anticuerpos contra IL-17A.

Descripción resumida de la invención

La Invención comprende un anticuerpo que se une a IL-17, caracterizado porque el dominio variable de cadena pesada comprende una reglón CDR3 de secuencia SEC ID n° 1, una región CDR2 de secuencia SEC ID n° 2, y una reglón CDR1 de secuencia SEC ID n° 3, y porque el dominio variable de cadena ligera comprende una región CDR3 de secuencia SEC ID n° 4, una reglón CDR2 de SEC ID n° 5 y una región CDR1 de SEC ID n° 6. Preferentemente el anticuerpo se caracteriza porque el dominio variable de cadena pesada comprende SEC ID n° 7 y el dominio variable de cadena ligera comprende SEC ID n° 8. Preferentemente, el anticuerpo que se une a IL-17 y que se caracteriza por las secuencias de aminoácidos anteriormente indicadas y los fragmentos de secuencia de aminoácidos es del isotipo lgG1 humano modificado en la región bisagra en las posiciones aminoácidas 216 a 24, preferentemente en las posiciones aminoácidas 22 a 24, entre Ch1 y Ch2 y/o en la segunda región interdominio en las posiciones aminoácidas 327 a 331 entre Ch2 y Ch3. Preferentemente, el anticuerpo comprende las mutaciones L234A (alanina en lugar de leucina en la posición aminoácida 234) y L235A. En SEC ID n° 11 se muestra una región constante de cadena pesada preferente que incluye las mutaciones L234A y L235A.

Preferentemente el anticuerpo es un anticuerpo humanizado o humano. Preferentemente el anticuerpo según la invención inhibe a una concentración de 1 ng/ml de IL-17A de Cynomolgus la producción de IL-6 e IL-8 en un ensayo de liberación de citoquinas con un valor de IC5 de 1,5 nM o inferior, utilizando fibroblastos dérmicos de Cynomolgus.

Una realización adicional de la invención es una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo según la invención. Preferentemente el anticuerpo de la composición farmacéutica se une a IL-17 con una afinidad de por lo menos 1"8 M"1 a 1"12 M-1, es del isotipo lgG1 humano modificado en la región bisagra en las posiciones aminoácidas 216 a 24, preferentemente en las posiciones aminoácidas 22 a 24, entre Ch1 y Ch2, y/o en la segunda región interdominio en las posiciones aminoácidas 327 a 331 entre Ch2 y Ch3. Preferentemente el anticuerpo es del isotipo lgG1 humano, comprendiendo las mutaciones L234A (alanina en lugar de leucina en la posición aminoácida 234) y L235A.

Una realización adicional de la invención es la utilización de un anticuerpo según la invención para la preparación de una composición farmacéutica. Preferentemente el anticuerpo de la composición farmacéutica se une a IL-17 con una afinidad de por lo menos 1"8 M"1 a 1"12 M-1, es del isotipo lgG1 humano modificado en la región bisagra en las posiciones aminoácidas 216 a 24, preferentemente en las posiciones aminoácidas 22 a 24, entre Ch1 y Ch2, y/o en la segunda región interdominio en las posiciones aminoácidas 327 a 331 entre CH2 y Ch3. Preferentemente el anticuerpo es del isotipo lgG1 humano, comprendiendo las mutaciones L234A (alanina en lugar de leucina en la posición aminoácida 234) y L235A.

Una realización adicional de la invención es la utilización de un anticuerpo según la invención para el tratamiento de la esclerosis múltiple, la artritis reumatoide, la soriasis, la enfermedad de Crohn, la enfermedad pulmonar obstructiva

crónica (EPOC), el asma y el rechazo del trasplante. Una realización adicional de la invención es un método para la preparación de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo según la invención. Preferentemente el anticuerpo de la composición farmacéutica se une a IL-17 con una afinidad de por lo menos 1'8 M'1 a 1'12 M-1, es del isotipo lgG1 humano modificado en la reglón bisagra en las posiciones aminoácidas 216 a 24, preferentemente en las posiciones aminoácidas 22 a 24, entre Ch1 y Ch2, y/o en la segunda región interdomlnlo en las posiciones aminoácidas 327 a 331 entre CH2 y Ch3. Preferentemente el anticuerpo es del isotipo lgG1 humano, comprendiendo las mutaciones L234A (alanina en lugar de leuclna en la posición aminoácida 234) y L235A.

Una realización adicional de la Invención es un ácido nucleico codificante de una cadena pesada de un anticuerpo que se une a IL-17, caracterizado porque comprende una región CDR3 de cadena pesada de SEC ID n° 1 y preferentemente las mutaciones L234A y L235A en el dominio constante de cadena pesada de lgG1. Preferentemente el anticuerpo comprende además una región CDR2 de cadena pesada de SEC ID n° 2 y una reglón CDR1 de SEC ID n° 3. Una realización adicional de la invención es un ácido nucleico codificante de una cadena ligera de un anticuerpo que se une a IL-17, caracterizado porque comprende una reglón CDR3 de cadena ligera según la Invención y preferentemente las mutaciones L234A y L235A en el dominio constante de cadena pesada de lgG1. Preferentemente el anticuerpo comprende además una región CDR2 de cadena pesada de SEC ID n° 2 y una reglón CDR1 de SEC ID n° 3. Una realización adicional de la invención es un ácido nucleico codificante de un anticuerpo según la invención caracterizado porque comprende un dominio variable de cadena pesada de SEC ID n° 7 y un dominio variable de cadena ligera de SEC ID n° 8 y preferentemente las mutaciones L234A y L235A en el dominio constante de cadena pesada de lgG1.

El anticuerpo según la Invención se caracteriza porque las cadenas constantes son de origen humano. Dichas cadenas constantes son bien conocidas del estado de la técnica y han sido descritas por Kabat (ver, por ejemplo, Johnson, G. y Wu, T.T., Nuclelc Aclds Res. 28 (2) 214-218). Por ejemplo, una reglón constante de cadena pesada humana útil comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID n° 11 con las mutaciones L234A y L235A. Por ejemplo, una reglón constante de cadena ligera humana útil comprende una secuencia de aminoácidos de una reglón constante de cadena ligera kappa de SEC ID n° 12. Resulta preferente además que el anticuerpo es de origen ratón y comprende el marco de secuencia variable de anticuerpo de un anticuerpo de ratón según Kabat (ver, por ejemplo, Johnson G. y Wu T.T., Nuclelc Aclds Res. 28:214-218, 2).

El anticuerpo según la Invención se caracteriza especialmente porque inhibe la liberación de interleuquina-8 (IL8) de las células CCD25-SK. El anticuerpo según la invención neutraliza específicamente la activación celular mediada por IL17 con un valor de ICsode ,5 nM (16 ng/ml) o inferior. El anticuerpo según la invención se une específicamente a IL17 con un valor de IC5 de 1 nM o inferior.

El anticuerpo según la invención preferentemente es de isotipo lgG1 humano. Se muestran regiones constantes de cadena pesada y1 preferentes en SEC ID n° 11 y en SEC ID n° 11 sin las mutaciones L234Ay L235A.

El anticuerpo según la invención se caracteriza preferentemente porque no se une al factor C1q del complemento humano y por lo tanto evita la función efectora de CDC.

El anticuerpo según la invención preferentemente es de isotipo... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo de unión a IL-17 humana, caracterizado por que el dominio variable de cadena pesada comprende una región CDR3 de SEC ID n° 1, una región CDR2 de secuencia SEC ID n° 2, y una región CDR1 de secuencia SEC ID n° 3, y porque el dominio variable de cadena ligera comprende una región CDR3 de secuencia SEC ID n° 4 y una región CDR2 de SEC ID n° 5 y una reglón CDR1.

2. Anticuerpo según la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo Inhibe a una concentración de 1 ng/ml de IL-17A de Cynomolgus la producción de IL-6 e IL-8 en un ensayo de liberación de citoqulnas con un valor de IC5o de 1,5 nM o inferior, utilizando fibroblastos dérmicos de Cynomolgus.

3. Anticuerpo según la reivindicación 1, caracterizado por que el dominio variable de cadena pesada comprende SEC ID n° 7 y el dominio variable de cadena ligera comprende SEC ID n° 8.

4. Anticuerpo según las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que es de isotipo lgG1 humano modificado en la región bisagra en las posiciones amlnoácldas 216 a 24 (numeración según el índice EU de Kabat) y/o en la segunda reglón ¡nterdominio en las posiciones amlnoácldas 327 a 331 entre Ch2 y Ch3.

5. Anticuerpo según la reivindicación 4, caracterizado por que comprende las mutaciones L234A (alanina en lugar de leuclna en la posición amlnoáclda 234) y L235A (numeración según el índice EU de Kabat).

6. Composición farmacéutica, caracterizada por que comprende un anticuerpo según las reivindicaciones 1 a 5.

7. Anticuerpo según las reivindicaciones 1 a 5 para la utilización en el tratamiento de la esclerosis múltiple, la artritis reumatolde, la sorlasls, la enfermedad de Crohn, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), el asma y el rechazo del trasplante.

8. Ácido nucleico codificante de una cadena pesada de un anticuerpo que se une a IL-17, caracterizado por que dicho anticuerpo comprende una reglón CDR3 de cadena pesada de SEC ID n° 1, una región CDR2 de cadena pesada de SEC ID n° 2, una región CDR1 de cadena pesada de SEC ID n° 3, una región CDR3 de cadena ligera de SEC ID n° 4, una región CDR2 de cadena ligera de SEC ID n° 5 y una región CDR1 de cadena ligera de SEC ID n°

9. Vector de expresión, caracterizado por que comprende un ácido nucleico según la reivindicación 8, para la expresión de un anticuerpo que se une a IL-17 según la reivindicación 1 en una célula huésped procariótica o eucariótica.

1. Método para la producción de un anticuerpo recombinante de unión a IL-17, caracterizado por que expresa un ácido nucleico según la reivindicación 8 en una célula huésped procariótica o eucariótica y recuperar dicho anticuerpo a partir de dicha célula o del sobrenadante del cultivo celular.