Antagonistas de IL-17A, IL-17F e IL-23P19 y procedimientos de uso.

Un antagonista de IL-23, IL-17A e IL-17F que comprende:

(i) un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une con la subunidad p19 de IL-23 como se muestra en SEC ID Nº:

4; y

(ii) un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une con IL-17A como se muestra en SEC ID Nº: 2 e IL-17F como se muestra en SEC ID Nº: 6, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une con IL-17A e IL-17F comprende:

la secuencia de aminoácidos de HCDR1, la secuencia de aminoácidos de HCDR2 y la secuencia de aminoácidos de HCDR3 de la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma de la Designación de Depósito de Patente de ATCC PTA-7988; y

la secuencia de aminoácidos de LCDR1, la secuencia de aminoácidos de LCDR2 y la secuencia de aminoácidos de LCDR3 de la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma de la Designación de Depósito de Patente de ATCC PTA-7988.

Antagonistas de IL-17A, IL-17F e IL-23P19 y procedimientos de uso Campo de la invención La presente invención se refiere, en general, a la identificación y el aislamiento de antagonistas de IL-17A, IL-17F e 5 IL-23 (mediante p19) y procedimientos de uso de los mismos.

Antecedentes de la invención Las citocinas son proteínas pequeñas, solubles, que median en una diversidad de efectos biológicos, incluyendo la inducción de proliferación, desarrollo, diferenciación y/o migración de células inmunitarias, así como la regulación del crecimiento y diferenciación de muchos tipos celulares (véase, por ejemplo, Arai y col., Annu. Rev. Biochem. 59: 783 10 (1990) ; Mosmann, Curr. Opin. Immunol. 3: 311 (1991) ; Paul y Seder, Cell 76: 241 (1994) ) . Las funciones inmunitarias inducidas también pueden incluir una respuesta inflamatoria, caracterizada por una acumulación sistémica o local de células inmunitarias. Aunque tienen efectos protectores del huésped, estas respuestas inmunitarias pueden producir consecuencias patológicas cuando la respuesta implica inflamación excesiva y/o crónica, como en trastornos autoinmunitarios (tales como esclerosis múltiple) y cáncer/enfermedades neoplásicas (Oppenheim y Feldmann (eds.) Cytokine Reference, Academic Press, San Diego, CA (2001) ; von Andrian y Mackay New Engl. J. Med. 343: 1020 (2000) ; Davidson y Diamond, New Engl. J. Med. 345: 340 (2001) ; Lu y col, Mol. Cancer Res. 4: 221 (2006) ; Dalgleish y O’Byrne, Cancer Treat Res. 130: 1 (2006) ) .

IL-17A, IL-17F e IL-23 son citocinas implicadas en la inflamación. La interleucina 17A humana (también conocida como “IL-17A”) es una citocina que estimula la expresión de interleucina 6 (IL-6) , la molécula de adhesión intracelular 1 (ICAM-1) , interleucina-8 (IL-8) , el factor estimulante de colonias de macrófagos y granulocitos (GM-CSF) , y la expresión de prostaglandina E2, y desempeña un papel en la maduración preferente de precursores hematopoyéticos CD34+ en neutrófilos (Yao y col., J. Immunol. 155: 5483 (1995) ; Fossiez y col., J. Exp. Med. 183: 2593 (1996) ) . La interleucina 23 humana (también conocida como “IL-23”) es una citocina que se ha indicado que promueve la proliferación de linfocitos T, en particular linfocitos T de memoria.

IL-17A e IL-17F comparten el 55 % de identidad (Kolls y Linden, 2004) . Además de su similitud de secuencia, parece que ambas de estas citocinas se producen por tipos celulares similares, más notablemente linfocitos T CD4+ de memoria, activados. Véase, por ejemplo, Agarwal y col., “Interleukin-23 promotes a distinct CD4 T cell activation state characterized by the production of interleukin-17” J. Biol. Chem. 278: 1910-191 (2003) ; véase también Langrish y col. “IL-23 drives a pathogenic T cell population that induces autoimmune inflammation” J. Exp. Med. 201: 233-240

(2005) ; y Starnes y col. “Cutting edge: IL-17F, a novel cytokine selectively expressed in activated T cells and monocytes, regulates angiogenesis and endothelial cell cytokine production” J. Immunol. 167: 4137-4140 (2001) .

Aunque IL-17F comparte homología de secuencia con IL-17A, hay diferencias claves entre estas moléculas. Por ejemplo, se detecta ARNm de IL-17F en muchos tejidos diferentes (tales como hígado, pulmón, ovario, hígado fetal, mastocitos y basófilos) , mientras que la expresión de IL-17A se restringe principalmente a linfocitos T. Véase Fossiez, F., y col., “T cell IL-17 induces stromal cells to produce pro-inflammator y and hematopoietic cytokines”, J. Exp. Med. 183 (6) : 2593-2603, (1996) ; Toy, D. y col., “Cutting edge: IL-17 signals througha heteodimeric receptor complex”, J. Immunol. 177 (1) : 36-39 (2006) . Adicionalmente, IL-17F se une con IL-17RA con una afinidad mucho menor que IL-17A.

Además, ambas se han implicado de forma similar como agentes contribuyentes a la progresión y patología de una diversidad de enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias en seres humanos y en modelos de ratón de enfermedades humanas. Específicamente, IL-17A e IL-17F se han implicado como citocinas efectoras principales que desencadenan respuestas inflamatorias y por lo tanto contribuyen a varias enfermedades autoinflamatorias incluyendo esclerosis múltiple, artritis reumatoide y enfermedades inflamatorias del intestino.

Recientemente se ha mostrado que usando una combinación de un antagonista para IL-17A y un antagonista para 45 IL-23, se previno la recaída en un modelo de ratón de esclerosis múltiple. Véase la Solicitud de Patente de Estados Unidos del mismo propietario que la presente Número de Serie 11/762.738, presentada el 13 de junio de 2007, y la Publicación WIPO Número 2007/147019, publicada el 21 de diciembre 2007. Sin embargo, existe la necesidad del tratamiento de trastornos inflamatorios que antagonizarían no solamente IL-17A e IL-23, sino también IL-17F. Las actividades in vivo demostradas de IL-23, IL-17A e IL-17F ilustran el potencial clínico o terapéutico de, y la 50 necesidad de, antagonistas de IL-23, IL-17A e IL-17F. Específicamente, los anticuerpos que se unen con IL-23 y con IL-17A o IL-17F que inhiben las actividades inmunológicas tanto de IL-17A como de IL-17F poseerían dichas cualidades terapéuticas nuevas. La presente invención cumple esta necesidad proporcionando anticuerpos antagonistas y fragmentos de anticuerpo que se unen con IL-23, IL-17A e IL-17F, como se define en las reivindicaciones, incluyendo antagonistas que están comprendidos en una molécula. El documento WO

2007/027761 describe el tratamiento de enfermedad inflamatoria ocular autoinmunitaria mediante la administración de agentes que antagonizan una o ambas de la actividad de IL-17 e IL-23.

El documento US 2005/244874 describe procedimientos de tratamiento usando antagonistas de IL-17 y/o IL-23, y procedimientos para diagnosticar la propensión de un sujeto a desarrollar inflamación cutánea, en particular, psoriasis.

El documento WO 2004/071517 describe procedimientos de diagnóstico y tratamiento de trastornos inflamatorios y autoinmunitarios del sistema nervioso central y el tracto gastrointestinal.

El documento WO 2005/010044 describe un heterodímero de IL-17 e IL-17F designado IL-17A/F, y procedimientos para tratar trastornos cartilaginosos degenerativos y otras enfermedades inflamatorias.

McKenzie y col., Trends in Immunology, Vol. 27 (1) , 1 de enero de 2006, páginas 17-23, describen la ruta inmunitaria de IL-23/IL-17.

La presente invención aborda estas necesidades proporcionando antagonistas de las citocinas proinflamatorias IL17A, IL-17F e IL-23, como se define en las reivindicaciones. Son antagonistas proporcionados por la invención anticuerpos o fragmentos de anticuerpo que se unen con IL-17A e IL-17F, incluyendo anticuerpos que reaccionan de forma cruzada con IL-17A e IL-17F, y anticuerpos o fragmentos de anticuerpo que se unen con la subunidad p19 de IL-23. La secuencia polinucleotídica de la IL-17A humana se muestra en SEC ID Nº: 1 y la secuencia polipeptídica correspondiente se muestra en SEC ID Nº: 2. La secuencia polinucleotídica de la subunidad p19 humana de IL-23 se muestra en SEC ID Nº: 3 y la secuencia polipeptídica correspondiente se muestra en SEC ID Nº: 4. La secuencia polinucleotídica de la IL-17F humana se muestra en SEC ID Nº: 5 y la secuencia polipeptídica correspondiente se muestra en SEC ID Nº: 6.

IL-17A es una citocina que estimula la expresión de IL-6, ICAM-1, IL-8, GM-CSF, y la expresión de prostaglandina E2, y desempeña un papel en la maduración preferente de precursores hematopoyéticos CD34+ a neutrófilos (Yao y col., J. Immunol. 155: 5483 (1995) ; Fossiez y col., J. Exp. Med. 183: 2593 (1996) ) .

Las citocinas proinflamatorias IL-17A e IL-17F tienen un alto grado de similitud de secuencia, comparten muchas propiedades biológicas y se producen ambas por linfocitos T activados. Se han implicado ambas como factores que contribuyen a la progresión de diversas enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias incluyendo esclerosis múltiple, enfermedad inflamatoria del intestino, artritis reumatoide y asma. De hecho, los reactivos que anulan la función de IL-17A alivian significativamente la incidencia y gravedad de la enfermedad en varios modelos de ratón de enfermedad humana. IL-17A media sus efectos mediante interacción con su receptor afín, el receptor de IL-17 (IL-17RA) , y para IL-17F, IL-17RA. Por lo tanto, la presente invención contempla que un anticuerpo de reacción cruzada, también denominado en el presente documento de unión cruzada, puede ser útil como un antagonista tanto para IL-17A como para IL-17F, y por lo tanto para bloquear tanto IL-17A como IL-17F. En consecuencia, la presente... [Seguir leyendo]

1. Un antagonista de IL-23, IL-17A e IL-17F que comprende:

(i) un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une con la subunidad p19 de IL-23 como se muestra en SEC ID Nº: 4; y

(ii) un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une con IL-17A como se muestra en SEC ID Nº: 2 e IL-17F como se muestra en SEC ID Nº: 6, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une con IL-17A e IL-17F comprende:

la secuencia de aminoácidos de HCDR1, la secuencia de aminoácidos de HCDR2 y la secuencia de aminoácidos de HCDR3 de la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma de la Designación de Depósito de Patente de ATCC PTA-7988; y la secuencia de aminoácidos de LCDR1, la secuencia de aminoácidos de LCDR2 y la secuencia de aminoácidos de LCDR3 de la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma de la Designación de Depósito de Patente de ATCC PTA-7988.

2. El antagonista de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une con IL-17A e IL-17F comprende la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma de la Designación de Depósito de Patente de ATCC PTA-7988.

3. El antagonista de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une con IL-17A e IL-17F comprende la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma de la Designación de Depósito de Patente de ATCC PTA-7988.

4. El antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une con IL-17A e IL-17F comprende la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena pesada y la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma de la Designación de Depósito de Patente de ATCC PTA-7988.

5. El antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une con IL-17A e IL-17F es humanizado.

6. El antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo es quimérico.

7. El antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6 en el que el fragmento de anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en Fv, Fab, Fab’, F (ab) 2 y F (ab’) 2.

8. El antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es un anticuerpo monocatenario.

9. El antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es biespecífico.

10. El antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende además un resto de PEG.

11. El antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende además un resto Fc humano.

12. El antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es tetravalente.

13. El antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-12, para uso en el tratamiento de inflamación.

14. El antagonista para uso de acuerdo con la reivindicación 13, en el que la inflamación está asociada con una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en esclerosis múltiple (MS) , inflamación crónica, diabetes autoinmunitaria, artritis reumatoide (RA) , artritis psoriásica, asma, lupus eritematoso sistémico, psoriasis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, síndrome del intestino irritable (IBS) y enfermedad inflamatoria del intestino (IBD) .

15. Un antagonista de IL-23, IL-17A e IL-17F que comprende:

(i) un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une con la subunidad p19 de IL-23 como se muestra en SEC ID Nº: 4; y

(ii) un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une con IL-17A como se muestra en SEC ID Nº: 2 e IL-17F como se muestra en SEC ID Nº: 6, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une con IL-17A e IL-17F comprende un anticuerpo humanizado de reacción cruzada o fragmento de anticuerpo del mismo

derivado del anticuerpo producido por el hibridoma de la Designación de Depósito de Patente de ATCC PTA7988.