Vacunas líquidas para múltiples serogrupos meningocócicos.

Una composición inmunogénica acuosa que, después de su administración a un sujeto,

es capaz de inducir una respuesta inmune que es bactericida frente a los serogrupos B, C, W135 y Y de N. meningitidis, comprendiendo la composición: (i) un antígeno sacárido capsular del serogrupo C conjugado; (ii) un antígeno sacárido capsular del serogrupo W135 conjugado; (iii) un antígeno sacárido capsular del serogrupo Y conjugado; y (iv) una proteína "NadA" en forma oligomérica, una proteína "741", una proteína "936", una proteína "953" y una proteína "287", en la que:

la NadA tiene una secuencia de aminoácidos que: (a) tiene 50% o más de identidad con SEC ID Nº: 2; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos de SEC ID Nº: 1 y que comprende un epítopo de SEC ID Nº: 1;

la 741 tiene una secuencia de aminoácidos que: (a) tiene 50% o más de identidad con SEC ID Nº: 3; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos de SEC ID Nº: 3 y que comprende un epítopo de SEC ID Nº: 3;

la 936 tiene una secuencia de aminoácidos que: (a) tiene 50% o más de identidad con SEC ID Nº: 4; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos de SEC ID Nº: 4 y que comprende un epítopo de SEC ID Nº: 4;

la 953 tiene una secuencia de aminoácidos que: (a) tiene 50% o más de identidad con SEC ID Nº: 5; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos de SEC ID Nº: 5 y que comprende un epítopo de SEC ID Nº: 5;

la 287 tiene una secuencia de aminoácidos que: (a) tiene 50% o más de identidad con SEC ID Nº: 6; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos de SEC ID Nº: 6 y que comprende un epítopo de SEC ID Nº 6; y

uno o más de los antígenos sacáridos capsulares del serogrupo C, W135 y Y están O-acetilados.

Vacunas líquidas para múltiples serogrupos meningocócicos

Campo técnico

La presente invención se refiere a inmunización contra meningitis bacteriana, y particularmente a inmunización combinada contra meningitis bacteriana provocada por múltiples patógenos.

Antecedentes de la técnica N. meningitidis es un patógeno humano Gram-negativo no móvil que coloniza la faringe y provoca meningitis (y, ocasionalmente, septicemia en ausencia de meningitis) . Provoca enfermedad tanto endémica como epidémica. Después de la introducción de la vacuna conjugada contra Haemophilus influenzae tipo B (Hib) , N. meningitidis es la principal causa de meningitis bacteriana en los Estados Unidos. Un tercer patógeno responsable de meningitis bacteriana es Streptococcus pneumoniae, pero está ahora disponible una vacuna eficaz (PrevNar™ [1]) . Como la vacuna de Hib, la vacuna neumocócica se basa en antígenos sacáridos capsulares conjugados.

Basándose en el polisacárido capsular del organismo, se han identificado diversos serogrupos de N. meningitidis, incluyendo A, B, C, H, I, K, L, 29E, W135, X, Y y Z. El serogrupo A es el patógeno implicado con mayor frecuenciaen enfermedad epidémica en el África sub-sahariana. Los serogrupos B y C son responsables de la amplia mayoría de casos en los Estados Unidos y en la mayoría de los países desarrollados. Los serogrupos W135 y Y son responsables del resto de los casos en los Estados Unidos y países desarrollados. Aunque el polisacárido capsular es un inmunógeno protector eficaz, cada serogrupo requiere un antígeno sacárido separado, y este enfoque no es adecuado para inmunizar contra el serogrupo B. Por lo tanto, el reciente éxito con vacunas de sacáridos conjugados contra serogrupo C (Menjugate™ [2], Meningitec™ y NeisVac-C™) no ha tenido ningún impacto en la enfermedad provocada por los serogrupos A, B, W135 o Y; por el contrario, presentan una presión selectiva hacia la aparición de estos serogrupos como causas principales de enfermedad meningocócica.

Se ha conocido durante muchos años una vacuna tetravalente inyectable de polisacáridos capsulares de los serogrupos A, C, Y y W135 [3, 4] y está aprobada para su uso humano. Los polisacáridos en esta vacuna no están conjugados y están presentes a una relación en peso de 1:1:1:1 [5], con 50 g de cada polisacárido purificado. Aunque es eficaz en adolescentes y adultos, induce una escasa respuesta inmune y corta duración de la protección y no puede usarse en niños [por ejemplo, ref. 6]. Además, las vacunas padecen la desventaja de requerir reconstitución a partir de formas liofilizadas en el momento del uso.

El documento WO02/058737 describe una composición inmunológica que comprende dos o más conjugados de proteína-polisacárido de polisacáridos capsulares de N. meningitidis serogrupos A, C, W135 y Y. También se describen la formulación de vacuna y modos de administración de las composiciones, y se analizan los problemas asociados con la escasa inmunogenicidad de los polisacáridos del serogrupo B.

Para el serogrupo B, ha sido difícil encontrar una vacuna. Se han ensayado vacunas basadas en vesículas de membrana externa [por ejemplo, ref. 7], pero la protección se restringe típicamente a la cepa usada para realizar la vacuna.

Por lo tanto, sigue existiendo la necesidad de una vacuna que proteja contra los serogrupos meningocócicos A, C, W135 y Y en niños, y también una que no requiera reconstitución antes de la administración. Además, sigue existiendo la necesidad de una vacuna que proteja ampliamente contra el serogrupo B.

Divulgación de la invención La invención satisface todas estas diversas necesidades, y se basa en el hallazgo de que la eficacia de un conjugado de serogrupo W135 se potencia mediante la adición de antígenos proteicos derivados de una cepa del serogrupo B.

Por lo tanto la invención proporciona una composición inmunógena acuosa que, después de su administración a un sujeto, es capaz de inducir una respuesta inmune que es bactericida contra los serogrupos B, C, W135 y Y de N. meningitidis, comprendiendo la composición: (i) un antígeno sacárido capsular del serogrupo C conjugado; (ii) un antígeno sacárido capsular del serogrupo W135 conjugado; (iii) un antígeno sacárido capsular del serogrupo Y conjugado; y (iv) una proteína “NadA” en forma oligomérica, una proteína “741”, una proteína “936”, una proteína “953” y una proteína “287”. La composición acuosa también puede inducir una respuesta inmune que es bactericida contra el serogrupo A de N. meningitidis y por lo tanto puede comprender además: (v) un antígeno sacárido capsular del serogrupo A conjugado.

Los antígenos sacáridos preferidos son oligosacáridos.

Serogrupos C, W135 y Y

Se han conocido durante muchos años técnicas para preparar polisacáridos capsulares a partir de meningococos, y típicamente implican un procedimiento que comprende las etapas de precipitación de polisacáridos (por ejemplo, usando un detergente catiónico) , fraccionamiento con etanol, extracción con fenol frío (para retirar proteínas) y ultracentrifugación (para retirar LPS) [por ejemplo, véase ref. 8].

Un procedimiento más preferido [9] implica precipitación de polisacáridos seguida de solubilización del polisacárido precipitado usando un alcohol inferior. La precipitación puede conseguirse usando un detergente catiónico tal como sales de tetrabutilamonio y cetiltrimetilamonio (por ejemplo, las sales de bromuro) , o sales de bromuro de hexadimetrina y miristiltrimetilamonio. Se prefiere particularmente bromuro de cetiltrimetilamonio (“CTAB”) [10]. La solubilización del material precipitado puede conseguirse usando un alcohol inferior tal como metanol, propan-1-ol, propan-2-ol, butan-1-ol, butan-2-ol, 2-metil-propan-1-ol, 2-metil-propan-2-ol, dioles, etc., pero el etanol es particularmente adecuado para solubilizar complejos CTAB-polisacárido. Puede añadirse etanol al polisacárido precipitado para proporcionar una concentración de etanol final (basándose en el contenido total de etanol y agua) de entre 50% y 95%.

Después de la resolubilización, el polisacárido puede tratarse adicionalmente para retirar contaminantes. Esto es particularmente importante en situaciones en las que incluso una contaminación menor no es aceptable (por ejemplo, para producción de vacuna humana) . Esto típicamente implicará una o más etapas de filtración, por ejemplo puede usarse filtración de profundidad, filtración a través de carbono activado, filtración por tamaño y/o ultrafiltración.

Una vez filtrado para retirar los contaminantes, el polisacárido puede precipitarse para tratamiento y/o procesamiento adicional. Esto puede usarse convenientemente intercambiando cationes (por ejemplo, mediante la adición de sales de calcio o sodio) .

Después de la purificación, los sacáridos capsulares se conjugan con proteínas portadoras como se describe posteriormente.

Se desvelan procedimientos adicionales y alternativos para purificación y conjugación de sacáridos meningocócicos en las referencias 11 y 12.

Como una alternativa a la purificación, los sacáridos capsulares de la presente invención pueden obtenerse por síntesis total o parcial, por ejemplo, se desvela síntesis de Hib en la ref. 13 y síntesis de MenA en la ref. 14.

Uno o más de los antígenos sacáridos capsulares del serogrupo C, W135 y Y están O-acetilados. Cualquier hiperacetilación puede estar en posiciones específicas en el sacárido. Por ejemplo, la mayoría de las cepas del serogrupo C tienen grupos O-acetilo en las posiciones C-7 y C-8 de los restos de ácido siálico, pero aproximadamente el 15% de los aislados clínicos carecen de estos grupos de O-acetilo [15, 16]. La acetilación no parece afectar a la eficacia protectora (por ejemplo, a diferencia del producto Menjugate™, el producto NeisVac-C™ usa un sacárido des-Oacetilado, pero ambas vacunas son eficaces) . El sacárido del serogrupo W135 es un polímero de unidades de disacáridos de ácido siálico-galactosa. El sacárido del serogrupo Y es similar al sacárido del serogrupo W135, excepto que la unidad de repetición de disacáridos incluye glucosa en lugar de galactosa. Como los sacáridos del serogrupo C, los sacáridos MenW135 y MenY tienen O-acetilación variable, pero en las posiciones 7 y 9 del ácido siálico [17]. Cualquiera de dichas modificaciones químicas preferentemente tiene lugar antes de la conjugación, pero puede como alternativa o adicionalmente tener lugar durante la conjugación.

Los sacáridos de diferentes serogrupos se purifican preferentemente por separado,... [Seguir leyendo]

1. Una composición inmunogénica acuosa que, después de su administración a un sujeto, es capaz de inducir una respuesta inmune que es bactericida frente a los serogrupos B, C, W135 y Y de N. meningitidis, comprendiendo la composición: (i) un antígeno sacárido capsular del serogrupo C conjugado; (ii) un antígeno sacárido capsular del serogrupo W135 conjugado; (iii) un antígeno sacárido capsular del serogrupo Y conjugado; y (iv) una proteína “NadA” en forma oligomérica, una proteína “741”, una proteína “936”, una proteína “953” y una proteína “287”,

en la que:

la NadA tiene una secuencia de aminoácidos que: (a) tiene 50% o más de identidad con SEC ID Nº: 2; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos de SEC ID Nº: 1 y que comprende un epítopo de SEC ID Nº: 1; la 741 tiene una secuencia de aminoácidos que: (a) tiene 50% o más de identidad con SEC ID Nº: 3; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos de SEC ID Nº: 3 y que comprende un epítopo de SEC ID Nº: 3; la 936 tiene una secuencia de aminoácidos que: (a) tiene 50% o más de identidad con SEC ID Nº: 4; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos de SEC ID Nº: 4 y que comprende un epítopo de SEC ID Nº: 4; la 953 tiene una secuencia de aminoácidos que: (a) tiene 50% o más de identidad con SEC ID Nº: 5; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos de SEC ID Nº: 5 y que comprende un epítopo de SEC ID Nº: 5; la 287 tiene una secuencia de aminoácidos que: (a) tiene 50% o más de identidad con SEC ID Nº: 6; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos de SEC ID Nº: 6 y que comprende un epítopo de SEC ID Nº 6; y uno o más de los antígenos sacáridos capsulares del serogrupo C, W135 y Y están O-acetilados.

2. La composición de la reivindicación 1, que comprende: un primer polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº: 2; un segundo polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº: 7; y un tercer polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº: 8.

3. La composición de la reivindicación 1 o reivindicación 2, que comprende además: (v) un antígeno sacárido capsular del serogrupo A conjugado.

4. La composición de cualquier reivindicación precedente, en la que los sacáridos están conjugados con una proteína portadora seleccionada de: toxoide diftérico, toxoide del tétanos, proteína D de H. influenzae y CRM197.

5. La composición de cualquier reivindicación precedente, que comprende además un antígeno sacárido que protege frente a H. influenzae de tipo B (Hib) .

6. La composición de cualquier reivindicación precedente, que comprende además un antígeno que protege contra

Streptococcus pneumoniae.

7. La composición de cualquier reivindicación precedente, que comprende un adyuvante de fosfato de aluminio.

8. La composición de cualquier reivindicación precedente, envasada en un recipiente sellado herméticamente.

9. La composición de la reivindicación 8, en la que el recipiente es un frasco o una jeringa.

10. La composición de cualquier reivindicación precedente, para su uso como un medicamento.

11. Una composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para su uso en un procedimiento para inducir una respuesta de anticuerpos en un mamífero.