Procedimiento para seleccionar animales con una elevada capacidad de producción de embriones.

Procedimiento para predecir el número de embriones transferibles u ovocitos fecundables que puede producir unanimal hembra no humano individual después de un tratamiento de superovulación,

comprendiendo dichoprocedimiento la determinación de la concentración de la hormona anti-Mülleriana en una muestra de sangre antesde un tratamiento de superovulación en el ovario.

Procedimiento para seleccionar animales con una elevada capacidad de producción de embriones.

La presente invención se refiere a un procedimiento para seleccionar un animal hembra no humano con capacidad de producir un número apropiado de embriones u ovocitos fecundables.

En el ganado bovino, los programas de ovulación múltiple y transferencia de embriones (MOET) se han convertido en un gran negocio internacional. La transferencia de embriones se ha convertido en una herramienta útil para acelerar el progreso genético y la difusión nacional e internacional del mismo. La tecnología está bien establecida y participa en las estrategias de selección genética y cruces para mejorar las características zootécnicas de las razas lecheras y de carne al permitir amplificar el linaje de las hembras seleccionadas. Anualmente se producen en todo el mundo más de 500.000 embriones en vacas superovuladas (estimuladas con FSH) . En la actualidad, más del 90% de los futuros reproductores bovinos sometidos a ensayo se producen mediante la tecnología MOET. Sin embargo, el número de embriones transferibles (aproximadamente 6 por vaca donante superovulada) no ha variado significativamente en los últimos veinte años y la utilización de la tecnología MOET en las industrias de los animales se acerca a un punto muerto. De hecho, aproximadamente el 20% de las vacas no produce ningún embrión tras los tratamientos de superovulación, y la tasa de producción de embriones varía mucho entre individuos y es difícil de predecir. La ausencia de previsión sobre la capacidad de un animal hembra para producir embriones comporta costes adicionales en la gestión de los procesos de selección (movilización innecesaria de técnicos para animales que producen un número reducido de embriones transferibles) y reduce la posible aplicación de técnicas relacionadas a la transferencia de embriones, tales como el sexado de embriones.

Actualmente, el recuento de folículos antrales por ecografía ovárica es el único método disponible para preseleccionar “buenos donantes de embriones” en un rebaño de ganado (Durocher et al., 2006, Theriogenology 65: 102-115; Kawamata, 1994, J Vet Med Sci. 56: 965- 967) . Este método consiste en una ecografía transrectal. Requiere la presencia simultánea de 2 experimentadores competentes para la adquisición de imágenes ováricas y equipos especiales para la obtención y el tratamiento de imágenes de vídeo. Además, el número de folículos antrales en los ovarios está sometido a variaciones cíclicas a lo largo del tiempo (se pueden observar de 2 a 4 ondas foliculares durante un ciclo sexual de 21 días en la vaca) , lo que dificulta la interpretación de los resultados obtenidos. Por consiguiente, hace tiempo que los expertos en la materia buscan un método sencillo y eficaz para seleccionar los animales hembra que puedan producir un número apropiado de embriones u ovocitos fecundables.

Recientemente, se ha centrado la atención en la hormona anti-Mülleriana (AMH) en el contexto del tratamiento de la infertilidad anovulatoria en la mujer. Numerosos estudios clínicos han puesto de manifiesto que la AMH es el mejor marcador endocrino de la reserva folicular ovárica en el ser humano. Las concentraciones de AMH medidas en el líquido folicular son un indicador para el potencial de implantación de embriones en los seres humanos (Fanchin et al., J Clin Endocrinol Metab., mayo de 2007; 92 (5) : 1796-1802) . El documento WO 03/016514 da a conocer un método para predecir y controlar la respuesta de una mujer a un tratamiento contra la esterilidad en base a la medición de su nivel de AMH.

La AMH es una glucoproteína de 140 kDa perteneciente al factor de crecimiento transformante de tipo º (TGFº) , que se expresa únicamente en las gónadas. Originalmente se identificó por su papel en la diferenciación sexual fetal masculina durante el desarrollo embrionario, pero estudios posteriores han puesto de manifiesto que tiene un efecto inhibidor sobre el desarrollo y el funcionamiento de los órganos reproductores de ambos sexos. En el ovario, la expresión de AMH se limita a un solo tipo de células, las células de la granulosa (Vigier et al., 1984, Endocrinology

114: 1315-1320; Takahashi et al., 1986, Biol Reprod 35: 447-453) . La expresión de AMH alcanza su máximo en las células de la granulosa de folículos preantrales y antrales pequeños, disminuye durante el crecimiento folicular terminal y se han encontrado concentraciones bajas de AMH en el líquido folicular de grandes folículos antrales y preovulatorios (Monniaux et al., 2008, Biol Reprod 79: 387-396) . Este patrón de expresión en las células de la granulosa de folículos en crecimiento hace de la AMH un marcador ideal para el tamaño del pool de folículos ováricos. Los inventores han observado anteriormente que en la vaca, como en el ser humano, la concentración plasmática de AMH es un buen marcador del estado de la población folicular capaz de responder al tratamiento con FSH (hormona estimulante del folículo) y ovular (Rico et al., 2009, Biol Reprod 80: 50-59) .

La ovulación es un primer paso necesario pero no suficiente para obtener ovocitos fecundables y embriones transferibles. Los demás pasos, que comprenden la supervivencia del ovocito ovulado en el oviducto, el tránsito y la supervivencia del esperma en el tracto genital femenino tras la inseminación, la fecundación y el desarrollo embrionario temprano hasta la mórula o el estadio de blastocito, también son decisivos para la producción de ovocitos y embriones de buena calidad. Los resultados previos han demostrado que la superovulación puede disminuir la competencia de desarrollo de los ovocitos bovinos (Lonergan et al., 1994, Mol Reprod Dev 37: 48-53; Blondin et al., 1996, Theriogenology 46: 1191-1203) y que una alta capacidad de ovulación puede producir a veces una baja proporción de embriones transferibles (Ireland et al., 2007, Human Reprod 22: 1687-1695) . Estos resultados pueden explicarse por una mala sincronización entre la ovulación y el momento de la inseminación, o por perfiles endocrinos anormales de esteroides que pueden afectar al transporte del esperma y al desarrollo y la supervivencia embrionarios en caso de múltiples ovulaciones (Greve y Callesen, Reprod Nutr Dev 41: 451-459) .

Debido a la multiplicidad de las hormonas, los factores de crecimiento y las interacciones célula-célula que influyen en el número y la calidad de los ovocitos y embriones, hasta ahora no existe ningún método fiable capaz de predecir el número de ovocitos fecundables y embriones transferibles que pueden ser producidos por una vaca donante potencial tras un tratamiento de superovulación.

Ahora, los inventores han descubierto que la concentración plasmática de AMH podría ser no sólo un marcador endocrino de la población folicular, sino también un marcador predictivo fiable del número de embriones transferibles u ovocitos fecundables que puede producir un animal tras un tratamiento de superovulación. La presente invención da a conocer, por primera vez, un método de pronóstico para determinar la capacidad de producción de embriones u ovocitos por parte de animales potencialmente donantes de embriones u ovocitos a partir del resultado de la medición de la concentración de AMH en una muestra biológica de dichos donantes potenciales. Los inventores han demostrado que la concentración plasmática o sérica de AMH puede permanecer estable en animales individuales durante varios meses, y esta propiedad hace que este pronóstico se lleve a cabo únicamente mediante un análisis de sangre para cada animal.

En el primer aspecto, la presente invención da a conocer un procedimiento para predecir el número de embriones transferibles u ovocitos fecundables que puede producir un animal hembra no humano individual tras el tratamiento de superovulación, comprendiendo dicho procedimiento la determinación de la concentración de hormona anti-Mülleriana en una muestra de sangre antes de llevar a cabo un tratamiento ovárico de superovulación.

En el contexto de la presente invención, “número adecuado de embriones transferibles u ovocitos fecundables” debe entenderse como por lo menos 10 embriones transferibles, o por lo menos 10 ovocitos fecundables.

Los embriones transferibles son los que se califican como embriones “buenos” de acuerdo con la norma morfológica clásica de forma y color que se utiliza en la práctica habitual (Callesen et al., 1995, J Anim Sci. 73: 1539-1543) y las definiciones elaboradas por la Sociedad Internacional de Transferencia de Embriones. Según la presente invención, la producción de embriones u ovocitos se alcanza según técnicas bien conocidas en la técnica anterior. Un animal donante... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para predecir el número de embriones transferibles u ovocitos fecundables que puede producir un animal hembra no humano individual después de un tratamiento de superovulación, comprendiendo dicho procedimiento la determinación de la concentración de la hormona anti-Mülleriana en una muestra de sangre antes de un tratamiento de superovulación en el ovario.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, que comprende las siguientes etapas:

a) medir la concentración de la hormona anti-Mülleriana en una muestra de sangre,

b) comparar dicha concentración con dos valores de referencia, respectivamente correspondientes a “alto” y “bajo”,

y en el que, si la concentración de la hormona anti-Mülleriana es mayor que el valor de referencia “alto”, entonces se considera que el animal tiene una buena capacidad de producir embriones transferibles u ovocitos fecundables; en cambio, si la concentración de la hormona anti-Mülleriana es inferior al valor de referencia “bajo”, se considera que el animal tiene una baja capacidad de producir embriones transferibles u ovocitos fecundables.

3. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la concentración de la hormona anti-Mülleriana que se mide es la concentración plasmática o sérica de la hormona anti-Mülleriana.

4. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el animal es un rumiante.

5. Procedimiento según la reivindicación 4, en el que el rumiante se selecciona de entre el grupo que comprende las especies bovina y caprina.

6. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en el que el valor de referencia “alto” de la concentración plasmática de la hormona anti-Mülleriana en la especie bovina está comprendido entre 160 pg/ml y

200 pg/ml, siendo preferentemente de 180 pg/ml para la producción de más de 10 embriones transferibles u ovocitos fecundables por tratamiento ovárico de superovulación, y el valor de referencia “bajo” de la concentración plasmática de la hormona anti-Mülleriana en la especie bovina está comprendido entre 80 pg/ml y 110 pg/ml, siendo preferentemente de 90 pg/ml para la producción de menos de 5 embriones transferibles u ovocitos fecundables por tratamiento ovárico de superovulación.