Regiones Fc variantes.

Anticuerpo monoclonal que comprende una variante de una región Fc original,

en el que la region Fc original es una región Fc de IgG1 humana, en el que la región Fc variante comprende sustituciones 247I/339Q en la región Fc, y presentandoel anticuerpo monoclonal que comprende la región Fc variante ADCCpotenciada en comparación con el anticuerpo monoclonal que comprende la regiónFc original.

Antecedentes de la invención Hay al menos diecisiete anticuerpos monoclonales aprobados actualmente en los Estados Unidos para su uso como productos terapéuticos en seres humanos. Adicionalmente, hay varios cientos de anticuerpos monoclonales en ensayos clínicos y miles en pruebas preclínicas para el tratamiento de diversas enfermedades o trastornos incluyendo, por ejemplo, rechazo de trasplantes, cáncer, enfermedades inflamatorias, septicemia, nefritis, enfermedad de Alzheimer, alergias, diabetes, enfermedades autoinmunitarias, artritis, esclerosis múltiple y enfermedades infecciosas. El campo terapéutico de los anticuerpos monoclonales está posicionado para un rápido crecimiento en los próximos años. Tras las vacunas, los anticuerpos (o inmunoglobulinas, quot;Igquot;) constituyen el segundo tipo más común de agente biofarmacéutico que está sometiéndose a prueba clínicamente (Stockwin, L.H. et al. Biochemical Society Transactions, 31 :433-436, 2003) .

La ingeniería genética ha contribuido sustancialmente al crecimiento del campo de anticuerpos monoclonales terapéuticos. La eficacia de un posible anticuerpo monoclonal terapéutico variará a menudo con cambios modestos en la secuencia de proteína del anticuerpo. Un cambio de un único aminoácido en la región variable de un anticuerpo monoclonal tiene el potencial de alterar la afinidad con la que el anticuerpo se une al epítopo antigénico, así como propiedades del anticuerpo tales como la velocidad Kan O la velocidad Kaff. Tales cambios de aminoácidos pueden determinar el éxito o el fracaso de un anticuerpo monoclonal como agente terapéutico. De manera similar, cambios modestos en la secuencia de aminoácidos de la región Fc de un anticuerpo monoclonal pueden producir cambios profundos en las propiedades de función efectora del anticuerpo o la semivida de una proteína a la que está unida operativamente la región Fc.

La región Fc de un anticuerpo (es decir, los extremos carboxilo terminales de las cadenas pesadas de un anticuerpo que abarcan los dominios CH2, CH3 y una parte de la región bisagra (véase la figura 1) ) , tiene una variabilidad limitada y participa en efectuar los papeles fisiológicos desempeñados por el anticuerpo. Las funciones efectoras atribuibles a la región Fc de un anticuerpo varían con la clase y subclase de anticuerpo e incluyen (i) unión del anticuerpo mediante la región Fc a un receptor de Fc específico (UFcRquot;) sobre una célula que desencadena diversas respuestas biológicas incluyendo, por ejemplo, fagocitosis y destrucción de partículas recubiertas con anticuerpos, aclaramiento de complejos inmunitarios, liberación de mediadores inflamatorios, transferencia placentaria del anticuerpo y control de la producción de inmunoglobulinas, (ii) citotoxicidad dependiente del complemento (UCDCquot;) en la que la región Fc se une al componente C1q del complemento e inicia de ese modo la ruta clásica de activación del complemento que conduce a la lisis de la diana, (iii) citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (UADCCquot;) en la que determinadas células del sistema inmunitario humano, por ejemplo fagocitos y células NK, mediante un receptor Fcy, se unen a la región Fc de un anticuerpo mediante receptores de unión a anticuerpos específicos sobre las células inmunitarias y posteriormente señalizan la destrucción de la entidad a la que el anticuerpo esta unido y (iv) unión a mastocitos, basófilos y eosinófilos. La afinidad con la que una región Fc puede unirse a un FcR particular (por ejemplo, FcRn) , o el nivel con el que una región Fc puede mediar en la activi

dad de CDC o ADCC son factores importantes para determinar la eficacia y semi

vida de proteínas terapéuticas, particularmente anticuerpos monoclonales.

La modificación particularizada de aminoácidos en la región Fc de IgG humana es

5 un área activa de estudio que produce información sobre la relación estructura

función relevante para el desarrollo de proteínas terapéuticas, particularmente an

ticuerpos monoclonales (véanse, por ejemplo, la patente estadounidense

6.1 65.745 y la publicación PCT n.o W02004/035752 referentes a la alteración de

la semivida sérica de un polipéptido operativamente unido a una región Fc y la pa

lO tente estadounidense 6.737.056 y la publicación PCT n.o W02004/029207 refe

rentes a la alteración de una función efectora de un anticuerpo monoclonal que

comprende una región Fc modificada) .

El desarrollo de proteínas terapéuticas novedosas, particularmente anticuerpos

15 monoclonales, se beneficiaría de la capacidad para diseñar racionalmente una re

gión Fc con modificaciones de aminoácidos particulares que confieren una pro

piedad beneficiosa deseada al anticuerpo de interés. No se esperaría que todos

los anticuerpos monoclonales mejorasen como agente terapéutico debido a la

misma modificación de aminoácido particular en la región Fc. Un anticuerpo mo

20 nocional terapéutico que se une a un antígeno diana puede beneficiarse de un

aumento en una función efectora particular mientras que un anticuerpo monoclo

nal terapéutico diferente que se une a un antígeno diana diferente puede benefi

ciarse de un aumento en una función efectora diferente, o incluso una disminu

ción. Un anticuerpo monoclonal terapéutico puede beneficiarse de la capacidad

25 para unirse a un receptor de Fc particular con mayor afinidad mientras que otro

anticuerpo puede mejorar como agente terapéutico uniéndose a ese receptor de

Fc a una afinidad inferior y por tanto aclarándose del cuerpo a una velocidad más

rápida. Además, una sustitución o modificación de aminoácido en una región Fc

particular y que da como resultado un efecto que beneficiaría a un anticuerpo te

30 rapéutico puede depender de la diana antigénica a la que se une el anticuerpo y/o

la enfermedad o el trastorno que va a mejorarse por el anticuerpo.

Son necesarios métodos y composiciones que alteran funciones efectoras particu

lares asociadas con la región Fc de un anticuerpo para mejorar las propiedades

de anticuerpos terapéuticos existentes así como para generar anticuerpos terapéuticos novedosos con propiedades deseadas. Pueden usarse anticuerpos monocionales con regiones Fc variantes para tratar diversas enfermedades o trastornos incluyendo, por ejemplo, trastornos inflamatorios, cáncer, trastornos autoinmunitarios, trastornos de señalización celular y enfermedades infecciosas. Adicionalmente, métodos y composiciones que alteran la semivida sérica de una proteína terapéutica, o bien aumentando la semivida y de ese modo permitiendo menos dosis o bien disminuyendo la semivida y de ese modo permitiendo un aclaramiento más rápido del cuerpo, beneficiarían la generación de anticuerpos terapéuticos así como otras proteínas terapéuticas.

Lo que se necesita con el fin de mejorar la eficacia de una proteína terapéutica, particularmente un anticuerpo monoclonal, son regiones Fc variantes con propiedades mejoradas.

Sumario de la invención El alcance de la invención está limitado por las reivindicaciones. La presente des

cripción proporciona regiones Fc variantes, es decir, regiones Fc que comprenden una sustitución de aminoácido descrita en el presente documento (por ejemplo, véase la tabla 1) , que confieren propiedades beneficiosas a los polipéptidos que comprenden dichas regiones Fc variantes.

Las posiciones de Fc de una región Fc original en las que puede hacerse cualquier sustitución de aminoácido para generar una región Fc variante incluyen las posiciones 279, 341, 343 Y 373 de la región Fc; en la que la numeración de los residuos, es decir, su número de posición, en la región Fc es la del índice de EU como en Kabat (véase... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo monoclonal que comprende una variante de una región Fc original, en el que la región Fc original es una región Fc de IgG1 humana, en el que la región Fc variante comprende sustituciones 2471/3390 en la región Fc, y presentando el anticuerpo monoclonal que comprende la región Fc variante ADCC potenciada en comparación con el anticuerpo monoclonal que comprende la región Fc original.

2. Anticuerpo monoclonal según la reivindicación 1, siendo el anticuerpo monoclonal un anticuerpo monoclonal quimérico, humanizado o humano.

3. Anticuerpo monoclonal según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, siendo el anticuerpo monoclonal un anticuerpo de longitud completa o un anticuerpo monoclonal de cadena sencilla.

4. Anticuerpo monoclonal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, uniéndose dicho anticuerpo específicamente a un antígeno diana humano seleccionado del grupo que consiste en CD3, CD20, CD25, TNFa, Her2/neu, CD33, CD52, EGFR, EpCAM, MUC1, GD3, CEA, CA125, HLADR, o cualquier precursor

o fragmento funcional de los mismos.

5. Procedimiento de producción de un anticuerpo monoclonal variante con respuesta de ADCC potenciada en comparación con el anticuerpo monoclonal original de dicho anticuerpo monoclonal variante, que comprende modificar por ingeniería genética la región Fc del anticuerpo monoclonal original para que comprenda sustituciones de aminoácidos 2471/3390, en el que la región Fc del anticuerpo monoclonal original es una región Fc de IgG1 humana.

6. Composición farmacéutica que comprende el anticuerpo monoclonal variante según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

7. Anticuerpo monoclonal según las reivindicaciones 1 a 4, para su uso como medicamento.

zrircmli P iiiiiii g ttttEtt

MEM e ggn20

444.3 JO

wvee e Illt 2quot;

N 11114 W WM M

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11. 0.00.00.0.0. W 4:4066.12. c610.

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2333gt22 3222322 222220

.56AZ SA

mramw.lramm

rliblinp*Mr

11111iii FIG. 3

A. CH2 original ( SEQ ID NO: 9 )

A PELLGG PS VFLFP P KP KDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNANTK P REEQYNS TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEY KC KVSNKAL PAP I EKT I SKAK

B. CH3 original (SEQ ID NO:10)

GQPREPQVYTLPPSREEMTKNOVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWMIGNVFSCSVMHE, ALHNHYTQKSLSLSPGK

C. Polipeptido original (alotipo f) (SEQ ID NO:11)

ASTKG PSVFPLA PS SKSTSGGTAALGCLVKDY FPE PVTVS WNS GALTSGVHTFPAVLQS S GLY S LS SVVTVPS SSLGTQTY I CNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHTCP PC PAPELLGG PSVFLFP PKPKDTLM I SRTPEVTCVVVDVSHED PEVKFNWYVDGVEVMNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYYCKVSNKALPAP I EKT I S KAKGQ PREPQVYTLP P SREE MT KNQVSLTCLVKG FY PSD I AVEWE SNGQP ENNY KTTP PVLD SDG S F FLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

D. Polipeptido original (alotipo a, z) (SEQ ID NO:12)

AS TKG PSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFP E PVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSS GLYS LS SVVTVP S SSLGTQTY I CNVNH KPSNTKVDKKVEPKS CDKTHTC PPC PA PELLGG PS VFL FPPKPHL TLM I SRTPEVTCVVVDVSH EDPEVKPNWYVOGVEVHNAKTKPREEQYN S TYRVVSVLTVLH QDWLNGKEY KC KVSNKAL PAP I E KT I S KAKGQ PRE PQVYTLP PSRDE LT KNQVSLTCLVKG FY PSD IAVEWE SNGQ PENNY KTTP PVLDSDGS FFLYSKLTVDKSRW QQNVFSCSVNIHEALHNHYTQKSLSLS PGK

FIG. 4

A. (SEQ ID NO: 13)

EIVLTQSPGT LSLSPGERAT LSCRASSSVP YIHWYQQKPG QAPRLLIYAT SALASGIPDR FSGSGSGTDF TLT/SRLEPE DFAVYYCQQW LSNPPTF

B. (SEC+ ID NO: 14)

EVQLVQSGAE VKKPGESLKI SCKGSGRTFT SYNMHWVRQM PGKGLEWMGA IYPLTGDTSY NQKSKLQVTI SADKSISTAY LQWSSLKASD TAMYYCARST YVGGDWQFDV W

C. LCVR de anti-CD20 (II) (SEQ ID NO: 15)

QIVLSQSPAI LSASPGEKVT MTCRASSSVS YIHWFQQKPG SSPKPWIYAT SNLASGVPVR FSGSGSGTSY SLTISRVEAE DAATYYCQQW TSNPPTF

D. HCVR de anti-CD20 (II) (SEQ ID NO: 16)

QVQLOQPGAE LVKAGASVKM SCKASGYTFT SYNMHWVKQT PGRGLEWIGA

IYPGNGDTSY NQKFKGKATL TADKSSSTAY MQLSSLTSED SAVYYCARST YYGGDWYFNV W

E. Anti CD2 0- ( I )

LCVR CDR1 ( SEQ ID NO; 17 ) : RASSSVPYIH

LCVR CDR2 ( SEQ ID NO: 1 8 ) : ATSALAS

LcyR CDR3 ( SEQ ID NO: 1 9 ) : QQWLSNPPT

HCVR CDR1 (SEQ ID NO: 20) : GRTFTSYNMH HCVR CDR2 (SEQ ID NO: 21 ) : AIYPLTGDTSYNQKSKL HCVR CDR3 (SEQ ID NO: 22 ) : STYVGGDWQFDV

Anti-CD20 (II ) LCVR CDR1 (SEQ ID NO: 23 ) : RASSSVSYIH LCVR CDR2 (SEQ ID NO: 24 ) : ATSNLAS LCVR CDR3 (SEQ ID NO: 25 ) : QQWTSNPPT

HCVR CDR1 (SEQ ID NO: 26 ) : GYTFTSYNMH HCVR CDR2 (SEQ ID NO: 27 ) : AIYPGNGDTSYNQKFKG HCVR CDR3 (SEQ ID NO: 28 ) : STYYGGDWYFNV

FIG. 5

A.SEQ ID NO:29: Secuencia de aminoAcidos de la cadena ligera completa de AMC 13s

E I VLTQS PGTLSLS PGERATLSCRASSSVPY I HWYQQKPGQAPRLL I YATSALASG I PDR

FSGSGSGTDFTLT I S RLEPED FAVYYCQQWL SNP PTFGQGTKLE I KRTVAAPSVF I FPPS DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSOESVTEQDSKDSTYSLSSTLTL SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

-La region constante est& subrayada

3.SEQ ID NO:30: Secuencia de Acid° nucleic° de la cadena ligera completa de ANS 133

GAAATTGTGTTGACG CAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACC CTCTCCTGCAGGG CCAGCTCAAGTGTACCGTACATCCACTGGTACCAGCAGAAACCTGGC CAGGCTCCCAGGCTCCTGATCTATGCCAGA-T-CGGGIPC4GGGTTCTGGCATCCe-AGACAGG TTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAA GATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTGGCTGAGTAACCCACCCACTTTTGGCCAGGGG ACCAAGCTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCT GATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCC AGAGAGGCCAAAGTAC.AGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAG AGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGC CTCAGCAGCACCCTGACGCTG AGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTG

AGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG

FIG. 6

A.scm rco NO: 31: Secuencia de aminolcidos de la cadena pesada cempleta de AXE 133 (variants 2471/33912) EVQLVQSGAEVKKPGESIXISCKGSGRTFTSYNNHWVROMPGKGLEWMGAIYPLTGDTSY NQKSKLQVTISADKSISTAYLQNSSLKASEITAMYYCARSTYVGGDWWWWGKGTTVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVICDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTOTYICNVNHKPSNTINDKWEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKTICDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVICFNWTVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHOWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKQKGQPRENNYTLPFSRD ELTKNCIVSLTCINKGFYPSDIAVENESNG (RENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR NQQGNVFSCSVMNEALHNHYTOKSIASLSPGK

- La region constante esta subrayada; Las variantes estan en negrita

B.SEQ 1D NO: 32: Secuencia de &cid° nucleico de la cadena pesada campleta de AMR 133 (variants 2471/339 (2) GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGATC

TCCTGTAAGGGTTCTGGCCGTACATTTACCAGTTACAATATGCACTGGGTGCGCCAGATG CCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGGCTATTTATCCCTTGACGGGTGATACTTCCTAC AATCAGAAGTCGAAACTCCAGGTCACCATCTCAGCCGACAAGTCCATCAGCACCGCCTAC CTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTGCGAGATCGACT TACGTGGGCGGTGACTGGCAGTTCGATGTCTGGGGCAAGGGGACCACGGTCACCGTCTCC TCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCT GGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGOTG TCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCC TCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGMGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTTGAG CCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGG GGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAAATCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACC CCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAAC TGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTAC AACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGC AAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGA.GAAAACCATC TCCAAACAGAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAC GAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGAC ATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCC GTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGG TGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTOCACAACCACTAC

ACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA

-Las variantes estan en negrita y subrayadas

FIG. 6

C. EINQ rp NO: 33: Socuencia de .inoaidog de la cadana plead complota de AN 133 (247I/3390)

EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGRTFTSYNMHWVRQMPGKGLEMMGAIYPLTGDTSY

NQKSKLQVTISADKSISTAYLQVISSLKASDTAMYYCARSTYVGGDWQFDVWGKGTTVTVS

SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWI4SGALTSGVHTFPAVLQS

SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNEKPSNTICVDKKVEPK, SCDKTHTCPPCPAPELLG

GPSVFLFPPKIKDTLMISRTPEVTCVVVDVSMEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY

NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKDKGQPREPQVYTLPPSRD

ELTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR

WOQGNVFSCSVMHEAL}INHYTQlKSLSLSPGK

_ La region constante estA subrayada; las variantes estan en negrita

D. 81Q ID NO: 34: Seauencia de Acid° nucleic° de la cadena peaada eempleta de ANC 133 (247I/339D)

GAGGTGC.AGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGATC

TCCTGTAAGGGTTCTGGCCGTACATTTACCAGTTACAATATGCACTGGGTOCGCCAGATG

CCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGGCTATTTATCCCTTGACGGGTGATACTTCCTAC

AATCAGAAGTCGAAACTCCAGGTCACCATCTCAGCCGACAAGTCCATCAGCACCGCCTAC

CTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTGCGAGATCGACT

TACGTGGGCGGTGACTGGCAGTTCGATGTCTGGGGCAAGGGGACCACGGTCACCGTCTCC TCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCT GGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTG TCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCC TCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTTGAG CCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGG GGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAAATCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACC CCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAAC TGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTAC AACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACIGGCTGAATGGC AAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATC TCCAAAGACAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAC GAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAOCGAC ATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCC GTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGG TGGC.AGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTAC

ACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGITTCCOGGTAAATGA

-Las variantes estan en negrita y subrayadas