Régimen de inmunización con cebado de adenovirus suprimido en E4 y potenciación de adenovirus suprimido en E1.

Un adenovirus de cebado con E1 suprimido, con E4 suprimido, para su uso en un régimen de vacuna con unadenovirus de potenciación,

en donde dicho adenovirus de cebado tiene una cápside y comprende una secuenciade ácido nucleico que codifica al menos el producto de gen E3 de adenovirus, una región de adenovirus con E1suprimido, y una región de adenovirus con E4 suprimido, reduciendo con ello una respuesta inmune al adenovirusde cebado a continuación de la administración del adenovirus de cebado a un sujeto, comprendiendo además dichoadenovirus de cebado una casete de expresión heteróloga que comprende una secuencia de ácido nucleico quecodifica un primer producto que induce una respuesta inmune a un objetivo bajo el control de secuencias de controlregulatorias que dirigen expresión del primer producto, y donde dicho adenovirus de cebado está destinado a su usoen un régimen de vacuna junto con un adenovirus de potenciación con E1 suprimido que expresa un segundoproducto que es el mismo o que induce una respuesta inmune reactiva cruzada al objetivo, en donde el adenovirusde cebado y el adenovirus de potenciación tienen cápsides que son inmunológicamente distintas.

Régimen de inmunización con cebado de adenovirus suprimido en E4 y potenciación de adenovirus suprimido en E1.

Antecedentes de la invención Un adenovirus es un virus con ADN de doble cadena con un tamaño de genoma de aproximadamente 36 kilobases (kb) que ha sido ampliamente utilizado para aplicaciones de transferencia de gen debido a su capacidad para conseguir una transferencia de gen altamente eficiente en una diversidad de tejidos objetivo y a su gran capacidad de transgén. Convencionalmente, los genes E1 de adenovirus son suprimidos y reemplazados por una casete de transgén consistente en el promotor de elección, la secuencia de cADN del gen de interés y una señal poli A, dando como resultado un virus recombinante de replicación defectuosa.

Los adenovirus tienen una morfología característica con una cápside icosaédrica que consiste en tres proteínas principales, hexon (II) , base penton (III) y una fibra nudosa, junto con un número de otras proteínas menores, VI, VII, IX, Illa y Iva2 [W.C. Russell, J. Gen. Virol., 81, 2573-2604 (Nov. 2000) ]. El genoma de virus es un ADN lineal, de doble cadena, con una proteína terminal sujeta covalentemente a los terminales 5’, los cuales tienen repeticiones terminales invertidas (ITRs) . El ADN del virus está asociado íntimamente a la proteína VII altamente básica y a un péptido pequeño denominado mu. Otra proteína, V, está empaquetada con este complejo de ADN-proteína y proporciona un enlace estructural para la cápside con la proteína Vi. El virus contiene también una proteasa codificada por el virus, la cual es necesaria para el procesamiento de algunas proteínas estructurales para producir virus infecciosos maduros.

Se han descrito adenovirus recombinantes para el suministro de moléculas a células anfitrión para inducir una respuesta inmune. Véase la Patente US núm. 6.083.716, la cual proporciona vectores adenovirales suministrados a partir de dos adenovirus de chimpancé, el C1 y el C68 (denominados también Pan 9) y la solicitud de Patente Internacional núm. WO 02/33645 [Pan 5, Pan 6, Pan 7 – vectores derivados].

Lo que se necesita en el campo de las vacunas es un método de inmunización que pueda inducir una fuerte respuesta inmune a un objetivo con mínimas respuestas al portador de la vacuna.

Sumario de la invención Los métodos de la invención incluyen suministrar uno o más genes heterólogos seleccionados a un paciente mamífero mediante administración de un adenovirus suprimido en E1, E4, seguido de un adenovirus suprimido en E1. Adecuadamente, el segundo adenovirus administrado tiene una cápside que es diferente a la del adenovirus suministrado con anterioridad. Adecuadamente, el adenovirus potenciador contiene un producto que es el mismo que, o de reacción cruzada con, el suministrado por medio de la composición de cebado.

Sin estar sujetos a ninguna teoría, se considera que debido a que el primer vector carece de secuencias E4 de adenovirus, las cuales contienen epítopes CTL, se modula la respuesta inmune a la administración posterior de adenovirus. Por ello, el método de la invención proporciona un cebado de la respuesta inmune en el producto portado por los adenovirus, sin cebado concomitante de una respuesta inmune para el portador de adenovirus.

Estas y otras realizaciones y ventajas de la invención se describen con mayor detalle en lo que sigue.

Descripción detallada de la invención En un aspecto, la invención proporciona un adenovirus de cebado suprimido en E1, suprimido en E4, para su uso en un régimen de vacuna con un adenovirus potenciador, en el que dicho adenovirus de cebado tiene una cápside y comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica al menos el producto de gen E3 del adenovirus, una región de adenovirus suprimida en E1, y una región de adenovirus suprimida en E4, reduciendo con ello una respuesta inmune al adenovirus de cebado a continuación de la administración del adenovirus de cebado a un sujeto, comprendiendo además dicho adenovirus de cebado una casete de expresión heteróloga que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un primer producto que induce una respuesta inmune a un objetivo bajo el control de secuencias de control reguladoras que dirigen expresión del primer producto, y donde dicho adenovirus de cebado se destina a un uso en un régimen de vacuna junto con un adenovirus potenciador suprimido en E1 que expresa un segundo producto que es el mismo o que induce al objetivo a una respuesta inmune de reacción cruzada, en donde el adenovirus de cebado y el adenovirus potenciador tienen cápsides que son inmunológicamente distintas.

En un aspecto alternativo, la invención proporciona un adenovirus potenciador suprimido en E1, para su uso en un régimen de vacuna y un adenovirus de cebado, en donde dicho adenovirus potenciador tiene una cápside y comprende una región de adenovirus suprimida en E1 y una casete de expresión heteróloga que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un producto para inducir una respuesta inmune a un objetivo bajo el control

de secuencias de control reguladoras que dirigen expresión del producto, en donde el adenovirus potenciador está destinado a su uso en un régimen de vacuna junto con un adenovirus de cebado que contiene una secuencia de ácido nucleico que codifica al menos el producto de gen E3 de adenovirus, una región con E1 suprimido, y una región con E4 suprimido, reduciendo con ello una respuesta inmune al adenovirus de cebado a continuación de la administración del adenovirus de cebado a un sujeto, en donde dicho adenovirus de cebado expresa un producto que es el mismo o que induce una respuesta inmune de reacción cruzada al objetivo, en donde el adenovirus de cebado y el adenovirus potenciador tienen cápsides que son inmunológicamente distintas.

La invención proporciona también, según otro aspecto, un producto que comprende: (a) un adenovirus de cebado que tiene una primera cápside, comprendiendo dicho adenovirus una secuencia de ácido nucleico que codifica al menos el producto de gen E3 de adenovirus, una supresión en la región de E1, una supresión en la región de E4, reduciendo con ello una respuesta inmune al adenovirus a continuación de la administración del adenovirus de cebado a un sujeto, comprendiendo además dicho adenovirus una primera casete de expresión heteróloga que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un primer producto para inducir una respuesta inmune bajo el control de secuencias de control reguladoras que dirigen expresión del producto en el sitio de la supresión de E1 y/o en la región con E4 suprimido; (b) un adenovirus potenciador que tiene una segunda cápside que es inmunológicamente distinta de la primera cápside, comprendiendo dicho adenovirus una supresión en la región E1, una segunda casete de expresión heteróloga que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un segundo producto para inducir una respuesta inmune bajo el control de secuencias de control reguladoras que dirigen expresión del producto en el sitio de la supresión de E1, en donde el segundo producto es el mismo o que induce una respuesta inmune de reacción cruzada en el objetivo; (c) un contenedor para los adenovirus de (a) y de (b) ; y (d) instrucciones para el uso del adenovirus de cebado (a) y del adenovirus potenciador (b) , para su uso en la inmunización de un animal frente a un objetivo.

De ese modo, la invención hace posible un método de inducir específicamente una respuesta inmune celular y/o humoral administrando secuencialmente un adenovirus carente de una región funcional E1 y E4 y un adenovirus carente de una región funcional E1. Cada uno de los adenovirus contiene una casete de expresión heteróloga que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un producto para inducir una respuesta inmune bajo el control de secuencias de control reguladoras que dirigen expresión del producto. Los productos portados por el adenovirus de cebado y por el adenovirus potenciador, pueden ser el mismo. Alternativamente, los productos portados por el adenovirus de cebado y por el adenovirus potenciador difieren, pero la respuesta inmune al producto del adenovirus potenciador es imprimida por el producto del adenovirus anterior.

En una realización, los productos codificados son los mismos, con el fin de proporcionar un efecto de cebado/potenciación al producto, lo que induce inmunidad al objetivo (por ejemplo, un patógeno causante de enfermedad) del que deriva el producto, o a un objetivo reactivo cruzado. En una realización, los elementos de control regulatorio y otros elementos del casete de expresión heteróloga difieren en el adenovirus administrado. Adecuadamente, el segundo adenovirus administrado... [Seguir leyendo]

1. Un adenovirus de cebado con E1 suprimido, con E4 suprimido, para su uso en un régimen de vacuna con un adenovirus de potenciación, en donde dicho adenovirus de cebado tiene una cápside y comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica al menos el producto de gen E3 de adenovirus, una región de adenovirus con E1 suprimido, y una región de adenovirus con E4 suprimido, reduciendo con ello una respuesta inmune al adenovirus de cebado a continuación de la administración del adenovirus de cebado a un sujeto, comprendiendo además dicho adenovirus de cebado una casete de expresión heteróloga que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un primer producto que induce una respuesta inmune a un objetivo bajo el control de secuencias de control regulatorias que dirigen expresión del primer producto, y donde dicho adenovirus de cebado está destinado a su uso en un régimen de vacuna junto con un adenovirus de potenciación con E1 suprimido que expresa un segundo producto que es el mismo o que induce una respuesta inmune reactiva cruzada al objetivo, en donde el adenovirus de cebado y el adenovirus de potenciación tienen cápsides que son inmunológicamente distintas.

2. Un adenovirus de potenciación con E1 suprimido para su uso en un régimen de vacuna con un adenovirus de cebado, en donde dicho adenovirus de potenciación tiene una cápside y comprende una región de adenovirus con E1 suprimido y una casete de expresión heteróloga que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un producto para inducir una respuesta inmune a un objetivo bajo el control de secuencias de control regulatorias que dirigen expresión del producto, en donde el adenovirus de potenciación está destinado a su uso en un régimen de vacuna junto con un adenovirus de cebado que contiene una secuencia de ácido nucleico que codifica al menos el producto de gen E3 de adenovirus, una región con E1 suprimido, y una región con E4 suprimido, reduciendo con ello una respuesta inmune al adenovirus de cebado a continuación de la administración del adenovirus de cebado a un sujeto, en donde dicho adenovirus de cebado expresa un producto que es el mismo o que induce una respuesta inmune reactiva cruzada al objetivo, en donde el adenovirus de cebado y el adenovirus de potenciación tienen cápsides que son inmunológicamente distintas.

3. Un adenovirus de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el producto del adenovirus de cebado y el producto de adenovirus de potenciación son los mismos.

4. Un adenovirus de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el producto del adenovirus de cebado y el producto del adenovirus de potenciación inducen respuestas inmunes que son de reacción cruzada.

5. Un adenovirus de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde las secuencias regulatorias para el producto son diferentes en el adenovirus que comprende la región suprimida en E1 y en E4, y en el adenovirus que comprende la región suprimida en E1.

6. Un adenovirus de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el adenovirus de cebado que comprende una región suprimida en E1 y E4, expresa el producto de gen E3 bajo el control de un promotor heterólogo.

7. Un adenovirus de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la casete de expresión del adenovirus de cebado que comprende una región suprimida en E1 y E4 y/o el adenovirus de potenciación que comprende la supresión de E1, está situada en la región con E1 suprimido.

8. Un adenovirus de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la casete de expresión del adenovirus de potenciación que comprende la supresión de E1 está situada en una región con E3 suprimido.

9. Un adenovirus de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la cápside del adenovirus de cebado que comprende una región con E1 y E4 suprimidos o el adenovirus de potenciación que comprende la supresión de E1, se selecciona a partir de C5, C7 o C9.

10. Un adenovirus de acuerdo con cualquiera de la las reivindicaciones 1 a 9, en donde la cápside del adenovirus de cebado que comprende una región suprimida en E1 y E4 o la cápside del adenovirus de potenciación con E1 suprimido, se elige en el grupo consistente en Adhu5 y C1.

11. Un adenovirus de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde el régimen de vacuna comprende además el uso de una vacuna de ADN.

12. Un adenovirus de acuerdo con la reivindicación 11, en donde dicha vacuna de ADN es para ser administrada con anterioridad a la administración del adenovirus de cebado que comprende una región con E1 y E4 suprimidos o del adenovirus de potenciación que comprende la región con E1 suprimido.

13. Un adenovirus de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde el régimen de vacuna comprende además el uso de una vacuna a base de proteína.

14. Un adenovirus de acuerdo con la reivindicación 12, en donde dicha vacuna a base de proteína es para ser

suministrada después del adenovirus que comprende una región con E1 y E4 suprimidos y del adenovirus que comprende la región con E1 suprimido.

15. Un producto que comprende:

(a) un adenovirus de cebado que tiene una primera cápside, comprendiendo dicho adenovirus una secuencia de ácido nucleico que codifica al menos el producto de gen E3 de adenovirus, una supresión en la región de E1, una supresión en la región de E4, reduciendo con ello una respuesta inmune al adenovirus a continuación de la administración del adenovirus de cebado a un sujeto, comprendiendo además dicho adenovirus una primera casete de expresión heteróloga que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un primer producto para inducir una respuesta inmune bajo el control de secuencias de control regulatorias que dirigen expresión del producto en el sitio de supresión de E1 y/o en la región con E4 suprimido;

(b) un adenovirus de potenciación que tiene una segunda cápside que es inmunológicamente distinta de la primera cápside, comprendiendo dicho adenovirus una supresión en la región de E1, una segunda casete de expresión heteróloga que comprende secuencia de ácido nucleico que codifica un segundo producto para inducir una respuesta inmune bajo el control de secuencias de control regulatorias que dirigen expresión del producto en el sitio de la supresión de E1, en donde el segundo producto es el mismo o que induce una respuesta inmune reactiva cruzada al objetivo;

(c) un contenedor para el adenovirus de (a) y de (b) , y

(d) instrucciones para el uso del adenovirus de cebado (a) y del adenovirus de potenciación (b)

para su uso en la inmunización de un animal frente a un objetivo.

16. El producto de acuerdo con la reivindicación 15, en donde las secuencias regulatorias para el primer producto y para el segundo producto son diferentes.

17. El producto de acuerdo con la reivindicación 15 ó 16, en donde el adenovirus de (as) expresa el producto de gen E3 bajo el control de un promotor heterólogo.

18. El producto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, en donde la casete de expresión de (a) y/o de (b) está situada en la región con E1 suprimido.

19. El producto de acuerdo con la reivindicación 17 ó 18, en donde la casete de expresión (b) está situada en una región con E3 suprimido.

20. El producto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 15 a 19, en donde la primera cápside se selecciona en el grupo consistente en C5, C6 y C7.

21. El producto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 15 a 20, en donde la segunda cápside se selecciona en el grupo consistente en C68 y C1.

22. El producto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 15 a 21, que comprende además una vacuna de ADN.

23. El producto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 15 a 22, que comprende además una vacuna a base de proteína.