Péptidos que se unen específicamente al receptor del HGF (CMET) y usos de los mismos.

Un polipéptido o polipéptido multimérico que comprende una secuencia de aminoácidos:

Gly-X1-Cys-X2-Cys-X3-Gly-Pro-Pro-X4-Phe-XS-Cys-X6-Cys-X7-X8-X9-X10-Pro (SEQ ID NO: 1), en la que

X1 es Ser,

X2 es His, Tyr o Asn,

X3 es Ser o Gly,

X4 es cualquier aminoácido distinto de Cys,

X5 es Glu,

X6 es Trp,

X7 es Tyr,

X8 es Gly, Asp, Ala, Glu o Ser,

X9 es Thr o Ser, y

X10 es Glu o Asp

Péptidos que se unen específicamente al receptor del HGF (CMET) y usos de los mismos

Antecedentes de la invención El factor de crecimiento de hepatocitos (también conocido como factor de dispersión) es un factor de crecimiento multifuncional implicado en diversos procesos fisiológicos tales como la embriogénesis, la cicatrización de heridas y la angiogénesis. Se ha descubierto que el HGF, a través de interacciones con su receptor de alta afinidad (cMet) , está implicado en el crecimiento, la invasión y la metástasis de tumores. De hecho, la desregulación de la expresión de cMet (por ejemplo, la sobreexpresión de cMet en epitelio neoplásico de adenomas colorrectales y en otros carcinomas en comparación con mucosa normal) y/o de su actividad, así como la hiperactividad del receptor de cMet a través de un bucle estimulador autocrino con HGF, se han demostrado en una variedad de tejidos tumorales e induce la transformación oncogénica de líneas celulares específicas.

En general, el HGF lo producen las células estromales, que forman parte de muchos tumores epiteliales; sin embargo, se cree que la producción de HFG por las propias células tumorales comprende la principal ruta que conduce a la hiperproliferación de tumores específicos. Los bucles estimuladores autocrinos de HGF/cMet se han detectado en gliomas, osteosarcomas y carcinomas mamarios, de próstata, de pecho, de pulmón y otros.

La interrupción de la interacción del HFG con el receptor cMet ralentiza la progresión tumoral en modelos animales. Además de estimular la proliferación de determinadas células cancerosas a través de la activación de cMet, el HGF también protege frente a la citotoxicidad inducida por agentes que dañan el ADN en una variedad de líneas celulares susceptibles a fenotipos hiperproliferativos (por ejemplo, cáncer de mama) . Por lo tanto, evitar que el HGF se una a cMet podría predisponer determinadas células cancerosas a la citotoxicidad de determinados fármacos.

Además de los trastornos hiperproliferativos, cMet también se ha relacionado con la angiogénesis. Por ejemplo, la estimulación de cMet conduce a la producción de factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) , que, a su vez, estimula la angiogénesis. Adicionalmente, la estimulación de cMet también se ha relacionado con la promoción de la cicatrización de heridas.

Además de identificar el receptor cMet como objetivo terapéutico para trastornos hiperproliferativos, angiogénesis y cicatrización de heridas, la gran discrepancia entre los niveles de expresión de tejidos neoplásicos y los correspondientes normales indica que cMet es un objetivo atractivo para aplicaciones de formación de imágenes dirigidas a trastornos hiperproliferativos.

Los documentos US 2002-136721, Parr y otros ("Hepatocyte growth factor activators, inhibitors and antagonists and their implication in cancer intervention." HISTOLOGY AND HISTOPATHOLOGY. ENE 2001, vol. 16, n.º 1, enero de 2001, págs. 251-268) , Date y otros ("HGF/NK4 is a specific antagonist for pleiotrophic actions of hepatocyte growth factor". FEBS LETTERS., vol. 420, n.º 1, 22 de diciembre de 1997, págs. 1-6) y Bardelli y otros ("A peptide representing the carboxyl-terminal tail of the met receptor inhibits kinase activity and invasive growth" J. BIOL. CHEM., vol. 274, n.º 41, octubre de 1999, págs. 29274-29281) divulgan polipéptidos que se unen a cMet y que tienen una actividad antagonista. El asunto objeto de la presente invención difiere sustancialmente de dichos polipéptidos descritos.

Sumario de la invención La presente invención se refiere a péptidos, complejos peptídicos y composiciones que tienen la capacidad de unirse a cMet y antagonizar la actividad del factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) evitando que el HGF se una a cMet. Además, la presente invención se refiere a tales péptidos, complejos peptídicos y composiciones que tienen la capacidad de unirse a cMet con el propósito de detectar y dirigirse a este receptor, inhibiendo la actividad de cMet independiente de las propiedades antagonistas del HGF. La implicación del eje HGF/cMet en una variedad de funciones celulares que incluyen la proliferación celular, la cicatrización de heridas y la angiogénesis, que conducen a trastornos hiperproliferativos tales como el cáncer, hacen a la presente invención particularmente útil para interrumpir acontecimientos fisiológicos mediados por el HGF, para dirigir sustancias, por ejemplo, agentes terapéuticos, incluidos agentes radioterápicos, a dichos sitios.

Sorprendentemente, en respuesta a la necesidad de proporcionar materiales mejorados para, posiblemente, inhibir o afectar, por ejemplo, a la hiperproliferación y/o la angiogénesis, se ha descubierto que polipéptidos no naturales reivindicados en la reivindicación 1 se unen específicamente a cMet. La conjugación o la fusión de tales polipéptidos con agentes eficaces tales como inhibidores de cMet o agentes tumoricidas también pueden usarse para tratar tumores patógenos, por ejemplo, haciendo que el conjugado o la fusión "migren" al sitio de proliferación y/o angiogénesis activa, proporcionando así un medio eficaz para tratar afecciones patógenas asociadas con la hiperproliferación y/o la angiogénesis.

La presente invención se refiere a polipéptidos que se unen a cMet e incluye el uso de un único polipéptido de unión como un monómero o en una construcción multimérica, así como el uso de más de un polipéptido de unión de la invención en construcciones multiméricas. Los polipéptidos de unión de acuerdo con la presente invención son útiles en cualquier aplicación en la que sean ventajosos la unión, la unión o el aislamiento de cMet. Un aspecto particularmente importante de tales polipéptidos de unión es la inhibición de la actividad de cMet, bien por medio de la competición con el HGF por la unión a cMet o inhibiendo directamente la actividad de cMet independientemente de si el HGF está unido o no. Por ejemplo, en algunos casos, la señalización de cMet puede producirse en ausencia de unión del HGF. En tales situaciones, un polipéptido de unión que inhibe la actividad de señalización de cMet independientemente de si el HGF está unido, sería útil en la inhibición de la señalización de cMet.

Otro uso particularmente ventajoso de los polipéptidos de unión divulgados en el presente documento es en un procedimiento de formación de imágenes de proliferación celular y/o angiogénesis in vivo. El procedimiento implica el uso de polipéptidos de unión específicos de acuerdo con la invención para detectar un sitio de proliferación celular y/o angiogénesis, donde los polipéptidos de unión se han marcado de forma detectable para su uso como agentes de formación de imágenes, incluidos agentes de contraste de formación de imágenes de resonancia magnética (RMN) , agentes de formación de imágenes de rayos X, agentes de formación de imágenes radiofarmacéuticos, agentes de formación de imágenes de ultrasonido y agentes de formación de imágenes ópticas.

Otro uso ventajoso más de los polipéptidos de unión a cMet divulgados en el presente documento es dirigir agentes terapéuticos (incluidos compuestos capaces de proporcionar un efecto terapéutico, radioterápico o citotóxico) o vehículos de administración para agentes terapéuticos (incluidos fármacos, material genético, etc.) a sitios de hiperproliferación y/o angiogénesis u otro tejido que exprese cMet.

El receptor de cMet forma parte de la familia de receptores tirosina cinasa de moléculas de señalización. Para los propósitos de la presente invención, la función del receptor tirosina cinasa puede incluir una cualquiera de: oligomerización del receptor, fosforilación de receptor, actividad cinasa del receptor, reclutamiento de moléculas de señalización posteriores, inducción de genes, inducción de proliferación celular, inducción de migración celular o sus combinaciones. En la presente invención también se engloban moléculas "heteroméricas", usado en el presente documento para referirse a moléculas que contienen más de un péptido de unión a cMet descrito en el presente documento, de forma que cada péptido de unión de la molécula heteromérica se une a un sitio diferente, por ejemplo, "epítopo", de cMet. Por ejemplo, las construcciones heteroméricas de polipéptidos de unión proporcionados en el presente documento, podrían, por ejemplo, unirse a través de un péptido de unión a, por ejemplo, el sitio de unión de HGF de cMet, al mismo tiempo que otro péptido de unión de la molécula heteromérica se une a un sitio de unión de alta afinidad de cMet diferente. Dirigirse a dos o más epítopos distintos de cMet con una única construcción de unión... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido o polipéptido multimérico que comprende una secuencia de aminoácidos: Gly-X1-Cys-X2-Cys-X3- Gly-Pro-Pro-X4-Phe-XS-Cys-X6-Cys-X7-X8-X9-X10-Pro (SEQ ID NO: 1) , en la que X1 es Ser, X2 es His, Tyr o Asn, X3 es Ser o Gly, X4 es cualquier aminoácido distinto de Cys, X5 es Glu, X6 es Trp, X7 es Tyr, X8 es Gly, Asp, Ala, Glu o Ser,

X9 es Thr o Ser, y X10 es Glu o Asp.

2. El polipéptido o polipéptido multimérico de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 o 13.

3. El polipéptido o polipéptido multimérico de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 7.

4. El polipéptido o polipéptido multimérico de acuerdo con la reivindicación 1, que consiste en la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 7.

5. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de una afección que implica la activación de cMet, que comprende un polipéptido o polipéptido multimérico de acuerdo con la reivindicación 1.

6. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, en la que la afección es un tumor sólido.

7. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, en la que se selecciona el tumor del grupo que consiste en: tumores de mama, tiroides, glioblastoma, próstata, mesotelioma maligno, colorrectal, hepatocelular, hepatobiliar, renal, osteosarcoma y cervical.

8. Un procedimiento de purificación de cMet o un complejo de cMet y HGF a partir de una solución que lo contenga, que comprende:

poner en contacto la solución con al menos un polipéptido o polipéptido multimérico de acuerdo con la reivindicación 1, y

separar el polipéptido o polipéptido multimérico de la solución.