Péptidos modificados hidrófobos derivados de preS del virus de la hepatitis B (HBV), y su uso como inhibidores del acceso del HBV y el HDV.

Un péptido modificado hidrófobo derivado de preS del virus de la hepatitis B (HBV),

de fórmula Hm - P - Rn

en donde

P es dicho péptido derivado de preS, que comprende la secuencia de aminoácidos de ID. SEC. nº 11 o 5 ID. SEC. nº 12;

H es una modificación hidrófoba del péptido P derivado de preS, que es N-terminal con respecto a P y es seleccionada de entre acilación y adición de componentes hidrófobos;

R es una modificación C-terminal de dicho péptido P derivado de preS, que protege al péptido frente a la degradación;

m es al menos 1; y

n es 0 o al menos 1.

Péptidos modificados hidrófobos derivados de preS del virus de la hepatitis B (HBV) , y su uso como inhibidores del acceso del HBV y el HDV

La presente invención se refiere a péptidos modificados hidrófobos derivados de preS del virus de la hepatitis B (HBV; del inglés, hepatitis B virus) , que derivan de una secuencia de consenso de preS de HBV y están preferiblemente acilados en el extremo N y opcionalmente modificados en el extremo C. Estos péptidos modificados hidrófobos derivados de preS del HBV son inhibidores muy eficaces del acceso de HBV así como inhibidores del acceso de HDV y, por lo tanto, son adecuados para la inhibición de una infección por HBV y/o HDV, la prevención de una infección primaria por HBV y/o HDV, así como el tratamiento de una hepatitis B y/o D (crónicas) . La presente invención se refiere además a composiciones farmacéuticas y de vacuna que comprenden estos péptidos modificados hidrófobos derivados de preS del HBV.

Antecedentes de la invención Hoy en día, aproximadamente 2000 millones de personas portan marcadores serológicos de HBV. Aproximadamente 400 millones de ellas están crónicamente infectadas por el HBV. Según el Centro de Control de Enfermedades (CDC; del inglés, Center of Disease Control) , el 15-25% de las personas crónicamente infectadas por el HBV son propensas a desarrollar un carcinoma hepatocelular (HCC; del inglés, hepatocellular carcinoma) en un decenio si no reciben un tratamiento apropiado (1) . El HCC relacionado con el HBV tiene un mal pronóstico y, por lo tanto, el HBV ha sido clasificado por la Organización Mundial de la Salud (OMS) como el más importante carcinógeno humano presente en la naturaleza. A pesar de la existencia de una vacuna profiláctica, el número de infecciones aumentará en los próximos decenios a causa de la creciente población mundial y de la limitación de profilaxis en los países pobres.

En los países industrializados, el HBV se transmite esencialmente por vía parenteral. El 90-95% de los individuos inmunocompetentes agudamente infectados eliminan el virus, obteniendo de este modo una protección inmune para toda la vida. Aproximadamente el 5-10% de ellos desarrollan una hepatitis B crónica (300.000-500.000 personas enAlemania) . Por contraste, en zonas con alto número de endemias, particularmente en África Central y Asia Oriental, el principal modo de transmisión es el vertical de madre a hijo. Desafortunadamente, la infección de niños no totalmente inmunocompetentes da lugar a un curso crónico de la enfermedad de 90-98%. Por lo tanto, el HCC relacionado con la hepatitis B es la malignidad más común en muchos de estos países.

Los regímenes terapéuticos actualmente aprobados para el tratamiento de infecciones crónicas por el virus de la hepatitis B (HBV) o bien se dirigen a fases de replicación del genoma vírico después de una infección ya establecida (lamivudina, adefovir, entecavir) o bien actúan como moduladores del sistema inmune (interferón alfa) . Desafortunadamente, sólo el 10-25% de los pacientes mantienen una respuesta virológica ininterrumpida tras dichas terapias, lo que refleja inter alia la selección rápida de mutantes resistentes a nucleós (t) idos. Por lo tanto, a pesar de la disponibilidad de una vacuna preventiva, es de suma importancia el desarrollar nuevos agentes terapéuticos que se dirijan a fases de replicación hasta ahora no afectadas, tales como, por ejemplo, el acceso del virus.

La inhibición específica del acceso del virus es un concepto terapéutico atractivo para controlar y finalmente eliminar infecciones agudas y crónicas. Para el VIH, se ha llevado exitosamente a cabo la interferencia en el acceso del virus mediante un péptido consistente en 36 aminoácidos (Fuzeon®) derivado de la proteína gp41, que evita la fusión de la membrana vírica y la membrana celular (2) .

A pesar de la disponibilidad de una vacuna profiláctica y de inhibidores de la transcriptasa inversa (RT; del inglés, reverse transcriptase) , están creciendo en todo el mundo el número de personas infectadas por el HBV y el número de muertes relacionadas con el HBV (actualmente cerca de 500.000 al año) . Aproximadamente dos terceras partes de los cánceres hepáticos primarios son atribuibles a una infección persistente por el HBV (3) .

El tratamiento actual sigue dos estrategias: (i) el tratamiento con interferón (IFN alfa) modula respuestas inmunes contra el HBV y presenta un efecto antiviral directo que conduce a un beneficio clínico de larga duración en aproximadamente el 30% de los pacientes tratados, sin erradicación del virus; y (ii) la administración de inhibidores de la transcriptasa inversa vírica suprime la replicación vírica y va acompañada de mejoras bioquímicas e histológicas significativas después de un año de tratamiento. Sin embargo, el tratamiento de larga duración está asociado con la aparición de cepas víricas resistentes (4) .

El HBV es el prototipo de una familia de pequeños virus de DNA con envoltura que afectan a mamíferos y aves (5) . La envoltura del HBV encierra tres proteínas, denominadas L (grande; del inglés, large) , M (mediana; del inglés, middle) y S (pequeña; del inglés, small) (véase la Figura 1A) . Comparten el dominio S C-terminal con cuatro regiones transmembranales. Las proteínas M y L llevan extensiones N-terminales adicionales de 55 aminoácidos (preS2) y, dependiendo del genotipo, 107 o 118 aminoácidos (preS1) (véase la Figura 1B) . En los viriones, la relación estequiométrica de L, M y S es aproximadamente 1:1:4, mientras que las partículas subvíricas (SVPs; del inglés, subviral particles) no infecciosas más abundantemente secretadas contienen casi exclusivamente S y solo cantidades mínimas de proteína L (6) . Durante la síntesis, el dominio preS1 de L es miristoilado y es translocado a través del retículo endoplasmático. Esta modificación es esencial para la infectividad del HBV (7, 8) .

Los estudios sobre los primeros pasos de la infección por HBV han sido limitados ya que hasta hace poco no se ha dispuesto de sistemas de cultivo celular ni de modelos en animales pequeños (9) . El desarrollo de la línea celular HepaRG susceptible al HBV facilitó investigaciones sistemáticas sobre el acceso del HBV y dio lugar al descubrimiento de inhibidores del acceso derivados de proteínas de envoltura (10) .

En la publicación de patente china CN 1733798 se describen polipéptidos derivados de la proteína L de la superficie del HBV, en donde el extremo N comprende una modificación por acilación con miristoilo.

Además, no existe hasta la fecha una terapia eficaz para la infección por HDV, un virusoide satélite que utiliza proteínas de la envoltura del HBV para el acceso a hepatocitos (15, 17, 20) . Existe en la técnica la necesidad de proporcionar terapias eficaces contra una infección por HDV.

De esta manera, la presente invención pretende mejorar los métodos y medios presentes en la técnica previa para la inhibición, prevención y/o tratamiento de una infección por HBV y de otras enfermedades relacionadas con el HBV, y, por lo tanto, un objetivo de la presente invención es proporcionar métodos y medios mejorados que permitan una inhibición, prevención y/o tratamiento dirigidos y eficaces de una infección por HBV y de enfermedades relacionadas con el HBV.

Otro objetivo de la presente invención es proporcionar métodos y medios para la inhibición, prevención y/o tratamiento de una infección por HDV y de enfermedades relacionadas con el HDV.

Sumario de la invención De acuerdo con la presente invención, este objeto se resuelve al proporcionar péptidos modificados hidrófobos derivados de preS del HBV.

Dichos péptidos modificados hidrófobos derivados de preS tienen la fórmula general:

Hm – P – Rn P es dicho péptido derivado de preS y comprende la secuencia de aminoácidos de la secuencia de consenso ID. SEC. nº 11 de preS de HBV o la secuencia ID. SEC. nº 12 de preS de HBV;

H es una modificación hidrófoba del péptido P derivado de preS, que es N-terminal con respecto a P y es seleccionada de entre acilación y adición de componentes hidrófobos;

R es una modificación C-terminal de dicho péptido P derivado de preS, que protege al péptido frente a la degradación;

m es al menos 1; y

n es 0 o al menos 1.

De acuerdo con la presente invención, este objeto se resuelve además al proporcionar una composición farmacéutica que comprende al menos un péptido modificado hidrófobo derivado de preS del HBV, como el definido en esta memoria, y opcionalmente un vehículo y/o un excipiente farmacéuticamente aceptables.

De acuerdo con la presente invención, este objeto se... [Seguir leyendo]

1. Un péptido modificado hidrófobo derivado de preS del virus de la hepatitis B (HBV) , de fórmula

Hm – P – Rn en donde P es dicho péptido derivado de preS, que comprende la secuencia de aminoácidos de ID. SEC. nº 11 o ID. SEC. nº 12; H es una modificación hidrófoba del péptido P derivado de preS, que es N-terminal con respecto a P y es seleccionada de entre acilación y adición de componentes hidrófobos; R es una modificación C-terminal de dicho péptido P derivado de preS, que protege al péptido frente a la degradación; m es al menos 1; y n es 0 o al menos 1.

2. Un péptido modificado hidrófobo derivado de preS según la Reivindicación 1, en donde H y/o R están unidos a P por medio de un conector o espaciador.

3. Un péptido modificado hidrófobo derivado de preS de la Reivindicación 1 o 2, en donde H es una modificación hidrófoba por acilación con ácidos carboxílicos, ácidos grasos, ácidos grasos de C8 a C22, o aminoácidos con cadenas laterales lipófilas.

4. Un péptido modificado hidrófobo derivado de preS de la Reivindicación 3, en donde H es una modificación hidrófoba por acilación con miristoilo (C14) , palmitoilo (C16) o estearoilo (C18) .

5. Un péptido modificado hidrófobo derivado de preS de la Reivindicación 1 o 2, en donde H es una modificación hidrófoba por adición de componentes hidrófobos seleccionados de entre colesterol, derivados de colesterol, fosfolípidos, glicolípidos, ésteres de glicerol, esteroides, ceramidas, derivados de isopreno, adamantano, farnesol, grupos alifáticos, y compuestos poliaromáticos.

6. Un péptido modificado hidrófobo derivado de preS de las Reivindicaciones 1 a 5, en donde R es una modificación con un componente seleccionado de entre una amida, un D-aminoácido, un aminoácido modificado, un aminoácido cíclico, un polímero natural o sintético, tal como PEG, y glicocola.

7. Un péptido que comprende un péptido modificado hidrófobo derivado de preS de las Reivindicaciones 1 a 6, que comprende además una etiqueta, preferiblemente seleccionada de entre un colorante fluorescente, un radioisótopo y un agente de contraste.

8. Un péptido que comprende un péptido modificado hidrófobo derivado de preS de las Reivindicaciones 1 a 7, que está fusionado con un péptido o una proteína, preferiblemente seleccionados de entre albúmina y dominios de Fc de IgGs humanas.

9. El péptido de las Reivindicaciones 1 a 8 para uso en el diagnóstico, la prevención y/o el tratamiento de una enfermedad de un paciente.

10. El péptido de las Reivindicaciones 1 a 8 para el uso de la Reivindicación 9, en donde la enfermedad es una infección por HBV y/o HDV, una infección primaria por HBV y/o HDV, hepatitis B y/o D, o hepatitis B y/o D crónicas.

11. El péptido de las Reivindicaciones 1 a 8 para el uso de la Reivindicación 9 o 10, en donde el péptido se administra al paciente por una vía de administración seleccionada de entre las vías subcutánea, intravenosa, oral, nasal, intramuscular, transdérmica, por inhalación y por supositorios.

12. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un péptido de las Reivindicaciones 1 a 8, y un vehículo y/o un excipiente farmacéuticamente aceptables.

13. Una composición farmacéutica de la Reivindicación 12, en donde la cantidad terapéuticamente eficaz está en el intervalo de 10 µg a 1 mg por kg de peso corporal, preferiblemente de 10 µg a 100 µg.

5 <110><120> <130><150><151> LISTADO DE SECUENCIAS Universitätsklinikum Heidelberg Péptidos modificados hidrófobos derivados de preS del virus de la hepatitis B (HBV) , y su uso como inhibidores del acceso del HBV y el HDV U30234PCT PCT/EP2008/000591

10 <160><170> 28 PatentIn version 3.3

15 <210><211><212><213> 1 59 PRT Artificial

20 <220> <223> <400> Secuencia de consenso de preS1 de HBV (posiciones (-11) a 48) 1

<210> 2 25 <211> 59

<212> PRT

<213> Virus de la hepatitis B

<400> 2

<400> 11

<213> Virus de la hepatitis B (posiciones 5 a 33, genotipo D)

<400> 19

<210> 21 15 <211> 47

10 <210><211><212><213> 3 59 PRT Virus de la hepatitis B

<400> 3

5 <210><211><212><213><220> <223> 4 59 PRT Artificial Secuencia de preS1 de HBV posiciones (-11) a 48, que corresponde al genotipo C de HBV, pero Q46K

<400> 4

15 <210><211><212><213> 5 48 PRT Virus de la hepatitis B

<400> 5

5 <210><211><212><213> 6 58 PRT Virus de la hepatitis B

<400> 6

10 <210><211><212><213> 7 59 PRT Virus de la hepatitis B

15 <400> 7

5 <210><211><212><213> 8 58 PRT Virus de la hepatitis B

<400> 8

10

<210> 9

<211> 59

<212> PRT

<213> Virus de la hepatitis B

15

<400> 9

5 <210><211><212> 10 48 PRT

<213> Virus de la hepatitis B del mono lanudo

<400> 10

<210> 11

<211> 47

<212> PRT

<213> Artificial

15

<220>

<223> Secuencia de consenso de preS1 de HBV (posiciones 2 a 48)

5 <210><211><212><213> 12 47 PRT Artificial

10 <220> <223> Secuencia de preS1 de HBV, posiciones 2 a 48, correspondiente al genotipo C de HBV, pero Q46K

<400> 12

15 <210><211><212><213> 13 20 PRT Virus de la hepatitis B (posiciones 2 a 21, genotipo C)

20 <400> 13

<210> 14

<211> 17

<212> PRT

<213> Virus de la hepatitis B (posiciones 5 a 21, genotipo C)

<400> 14

<210> 15

<211> 7

<212> PRT

<213> Virus de la hepatitis B (posiciones 9 a 15)

<400> 15

<210> 16

<211> 47

<212> PRT

<213> Virus de la hepatitis B (posiciones 2 a 48, genotipo D)

<400> 16

5 <210><211><212><213> 17 44 PRT Virus de la hepatitis B (posiciones 5 a 48, genotipo D)

<400> 17

10 <210><211><212><213> 18 32 PRT Virus de la hepatitis B (posiciones 2 a 33, genotipo D)

<400> 18

<210> 19

<211> 29

20 <212> PRT

32

<210> 20

<211> 20

<212> PRT

<213> Virus de la hepatitis B (posiciones 2 a 21, genotipo D)

10

<400> 20

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Secuencia de consenso de preS1 de HBV, posiciones 2 a 48, correspondiente al genotipo C (pero Q46K) , con sustitución Ala en las posiciones 21, 23, 29, 30

<400> 21

5 <210><211><212><213> 22 59 PRT Artificial

10 <220> <223> <400> Secuencia de preS1 de HBV, posiciones (-11) a 48, correspondiente al genotipo C (pero Q46K) , D20A 22

15 <210><211><212><213> 23 47 PRT Artificial

20 <220> <223> 34 Secuencia de preS1 de HBV, posiciones 2 a 48, correspondiente al genotipo C (pero Q46K) , D20A

<400> 23

<210> 24

<211> 59

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Secuencia de preS1 de HBV, posiciones (-11) a 48, correspondiente al genotipo C (pero Q46K) , S27A, N29A

<400> 24

<210> 25

<211> 47

<212> PRT

20 <213> Artificial

<220>

<223> Secuencia de preS1 de HBV, posiciones 2 a 48, correspondiente al genotipo C (pero Q46K) , S27A, N29A

<400> 25

<210> 26

<211> 59

<212> PRT

<213> Artificial 10

<220>

<223> Secuencia de preS1 de HBV, posiciones (-11) a 48, correspondiente al genotipo C (pero Q46K) , D20A, S27A, N29A

<400> 26

<210> 27 20 <211> 47

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Secuencia de preS1 de HBV, posiciones 2 a 48, correspondiente al genotipo C (pero Q46K) , D20A, S27A, N29A

<400> 27

<210> 28

<211> 47

<212> PRT 15 <213> Artificial

<220>

<223> Secuencia de preS1 de HBV, posiciones 2 a 48, correspondiente al genotipo C, con sustituciones Ala en las posiciones 21, 23, 29, 30

<400> 28