Péptidos administrados oralmente para mejorar aterosclerosis.

Un péptido que mejora un síntoma de aterosclerosis, en el que dicho péptido varía en longitud hasta 30aminoácidos y:

la secuencia de aminoácidos del péptido comprende la secuencia de aminoácidos D-W-L-K-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F- (SEC ID N.º: 7)y

el péptido protege a un fosfolípido frente a oxidación por un agente oxidante.

Péptidos administrados oralmente para mejorar aterosclerosis

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas La presente solicitud es una continuación en parte del documento USSN 09/896, 841, presentado el 29 de junio, 5 2001, que es una continuación en parte del documento USSN 09/645, 454, presentado el 24 de agosto, 2000, los cuales se incorporan en el presente documento por referencia en su totalidad a todos los efectos.

Declaración de derechos a invenciones realizadas con fondos federales Este trabajo fue financiado con subvenciones del Servicio de Salud Pública de los Estados Unidos y las HL30568 y HL34343 del Instituto Nacional del Corazón, Pulmones y Sangre. El Gobierno de los Estados Unidos de América puede tener ciertos derechos en esta invención.

Campo de la invención La presente invención se refiere al campo de la aterosclerosis. En particular, la presente invención se refiere a la identificación de una clase de péptidos que son oralmente administrables y que mejoran uno o más síntomas de la aterosclerosis.

Antecedentes de la invención La enfermedad cardiovascular es una causa principal de morbilidad y mortalidad, particularmente en los Estados Unidos y en los países de Europa occidental. Están implicados varios factores causantes en el desarrollo de enfermedad cardiovascular, incluyendo la predisposición hereditaria a la enfermedad, género, factores de estilo de vida tales como fumar y dieta, edad, hipertensión e hiperlipidemia, incluyendo hipercolesterolemia. Varios de estos factores, particularmente hiperlipidemia e hipercolesterolemia (concentraciones de colesterol en sangre altas) proporcionan un factor de riesgo significativo asociado con aterosclerosis.

El colesterol está presente en la sangre como colesterol libre y esterificado en partículas de lipoproteínas, conocidas comúnmente como quilomicrones, lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) , lipoproteínas de baja densidad (LDL) y lipoproteínas de alta densidad (HDL) . La concentración de colesterol total en la sangre está influenciada por (1)

absorción de colesterol del tracto digestivo, (2) síntesis de colesterol a partir de constituyentes dietéticos tales como carbohidratos, proteínas, grasas y etanol y (3) eliminación del colesterol de sangre por tejidos, especialmente el hígado y conversión subsiguiente del colesterol a ácidos biliares, hormonas esteroides y colesterol biliar.

El mantenimiento de las concentraciones de colesterol en sangre está influenciado también tanto por factores genéticos como por factores ambientales. Los factores genéticos incluyen concentración de enzimas limitadoras de 30 la velocidad en biosíntesis de colesterol, concentración de receptores para lipoproteínas de baja densidad en el hígado, concentración de enzimas que limitan la velocidad para conversión de ácidos biliares de colesteroles, velocidades de síntesis y secreción de lipoproteínas y género de la persona. Los factores ambientales que influyen en la hemostasis de concentración de colesterol en sangre en seres humanos incluyen composición de la dieta, incidencia de fumar, actividad física y uso de una diversidad de agentes farmacéuticos. Las variables de la dieta incluyen cantidad y tipo de grasa (ácidos grasos saturados y poliinsaturados) , cantidad de colesterol, cantidad y tipo de fibra y quizás cantidades de vitaminas tales como vitamina C y D y minerales tales como calcio.

Los estudios epidemiológicos muestran una correlación inversa de niveles de lipoproteína de alta densidad (HDL) y apolipoproteína (apo) A-I con la aparición de niveles ateroscleróticos (Wilson y col. (1998) Arteriosclerosis 8: 737741) . La inyección de HDL en conejos alimentados con una dieta aterogénica ha mostrado inhibir formación de lesiones ateroscleróticas (Badimon y col. (1990) J. Clin. Invest. 85: 1234-1241) .

La apo A-I humana ha sido un sujeto de estudio intenso debido a sus propiedades antiaterogénicas. Las alipoproteínas intercambiables, incluyendo apo A-I, poseen dominios de asociación a lípidos (Brouillette y Anantharamaiah (1995) Biochim. Biophys. Acta 1256: 103-129; Segrest y col. (1990) FEBS Lett. 38: 247-253) . Se ha postulado que apo A-I posee ocho secuencias 22meras que se repiten en tándem, la mayoría de las cuales tienen el 45 potencial de formar estructuras helicoidales anfipáticas de clase A (Segrest y col. (1974) FEBS Lett. 38: 247-253) . Las características de la hélice anfipática de clase A incluyen la presencia de residuos cargados positivamente en la interfase polar-no polar y residuos cargados negativamente en el centro de la fase polar (Segrest y col. (1974) FEBS Lett. 38: 247-253; Segrest y col. (1974) Proteins: Structure, Function, and Genetics 8: 103-117) . Se ha mostrado que apo A-I se asocia fuertemente con fosfolípidos para formar complejos y para promover flujo de salida de colesterol

de células enriquecidas en colesterol. [Insertar página 2A] El desarrollo y mantenimiento de niveles séricos de apo A-I para mitigar de forma efectiva uno o más síntomas de aterosclerosis hasta este momento ha demostrado ser difícil de alcanzar.

El documento WO 99/16408 proporciona péptidos y análogos peptídicos que imitan las propiedades estructurales y farmacológicas de ApoA-1 humana. Los péptidos y análogos peptídicos se dice que son útiles para tratar una diversidad de trastornos asociados con dislipidemina. El documento US4.643.988 divulga péptidos de la fórmula A1-B1-B2-C1-D-B3-B4-A2-C2-B5-B6-A3-C3-B7-C4-A4-B8-B9 en la que A1, A2, A3 y A4 son independientemente ácido aspártico o ácido glutámico, u homólogos o análogos de los mismos; B1, B2, B3, B4, B5, B6, B7, B8 y B9 son independientemente triptófano, fenilalanina, leucina, alanina, tirosina, isoleucina, valina o alfa-naftilalanina, u homólogos o análogos de los mismos; C1, C2, C3 y C4 son independientemente lisina o arginina u homólogos o análogos de las mismas, y D es serina, treonina, alanina, glicina, o histidina, con la condición de que, cuando A1 y A2 son ácido aspártico, A3 y A4 son ácido glutámico, B2 y B7 son leucina, B3 y B9 son fenilalanina, B4 es torosina, B5 es valina y C1, C2, C3 y C4 son lisina y B6, B8 y D son alanina, B1 no es triptófano. Estos péptidos se dice que son útiles en el tratamiento y prevención de aterosclerosis.

Sumario de la invención La presente invención proporciona péptidos novedosos la administración de los cuales mitiga uno o más síntomas de aterosclerosis. En particular, fue un descubrimiento de esta invención que los péptidos que comprenden una hélice anfipática de clase A cuando se formula con residuo (s) de aminoácido (s) "D" y/o que tienen extremos aminoterminal y carboxilo terminal protegidos se pueden administrar oralmente a un organismo, se asimilan y

administran fácilmente al suero y son efectivos para mitigar uno o más síntomas de aterosclerosis.

De acuerdo con la presente invención se proporciona un péptido según se define en la reivindicación 1. Las realizaciones de la invención pueden comprender características según se definen en las reivindicaciones dependientes.

También se describen en el presente documento variantes que no caen dentro del ámbito de la invención, pero se proporcionan como un antecedente general. Así, se proporciona un péptido que mejora un síntoma de aterosclerosis, donde el péptido varia en longitud hasta aproximadamente 30 aminoácidos y la secuencia de aminoácidos del péptido comprende la secuencia de aminoácidos D-W-L-K-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F- (SEC ID N.º: 7) y el péptido protege un fosfolípido frente a oxidación por un agente oxidante, de acuerdo con la reivindicación 1. El péptido puede comprender adicionalmente un grupo protector. El péptido puede comprender adicionalmente un grupo protector acoplado al extremo amino terminal y/o al extremo carboxilo terminal. Los grupos protectores incluyen, pero no están limitados a, acetilo, amida y grupos alquilo de 3 a 20 átomos de carbono, Fmoc, t-boc, grupo 9-fluorenoacetilo, grupo 1-fluorenocarboxílico, grupo 9-fluorenocarboxílico, grupo 9-fluorenona-1-carboxílico, benciloxicarbonilo, Xantilo (Xan) , Tritilo (Trt) , 4-metiltritilo (Mtt) , 4-metoxitritilo (Mmt) , 4-metoxi-2, 3, 6-trimetilbencenosulfonilo (Mtr) , metilsileno-2-sulfonilo (Mts) , 4, 4-dimetoxibencidrilo (Mbh) , Tosilo (Tos) , 2, 2, 5, 7, 8-pentametil

croman-6-sulfonilo (Pmc) , 4-metilbencilo (MeBzl) , 4-metoxibencilo (MeOBzl) , Benciloxi (BzlO) , Bencilo (Bzl) , Benzoílo (Bz) , 3-nitro-2-piridinasulfenilo (Npys) , 1- (4, 4-dimetil-2, 6-diaxociclohexilideno) etilo (Dde) , 2, 6-diclorobencilo (2, 6-DiCi-Bzl) , 2-clorobenciloxicarbonilo (2-Cl-Z) , 2-bromobenciloxicarbonilo (2-Br-Z) , Benciloximetilo (Bom) , t-butoxicarbonilo (Boc) ,... [Seguir leyendo]

1. Un péptido que mejora un síntoma de aterosclerosis, en el que dicho péptido varía en longitud hasta 30 aminoácidos y:

la secuencia de aminoácidos del péptido comprende la secuencia de aminoácidos D-W-L-K-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F- (SEC ID N.º: 7)

y

el péptido protege a un fosfolípido frente a oxidación por un agente oxidante.

2. El péptido de la reivindicación 1, en el que la secuencia de aminoácidos del péptido consiste en la secuencia de aminoácidos D-W-L-K-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F- (SEC ID N.º: 7) .

3. El péptido de la reivindicación 1 o 2, en el que todos los aminoácidos enantioméricos son aminoácidos “L”.

4. El péptido de la reivindicación 1 o 2, que comprende al menos un aminoácido “D”.

5. El péptido de la reivindicación 4, en el que todos los aminoácidos enantioméricos son aminoácidos “D”.

6. El péptido de cualquier reivindicación precedente, en el que dicho péptido comprende adicionalmente al menos un grupo protector.

7. El péptido de la reivindicación 6, en el que dicho al menos un grupo protector está acoplado al extremo amino terminal y/o al extremo carboxilo terminal.

8. El péptido de la reivindicación 7, en el que un primer grupo protector está acoplado al extremo amino terminal y un segundo grupo protector está acoplado al extremo carboxilo terminal.

9. El péptido de la reivindicación 6 a 8, en el que cada uno de dichos al menos un grupo protector está seleccionado independientemente del grupo que consiste en acetilo, amida, grupos alquilo de 3 a 20 carbonos, Fmoc, grupo 9fluorenoacetilo, grupo 1-fluorenocarboxílico, grupo 9-fluorenocarboxílico, grupo 9-fluorenona-1-carboxílico, benciloxicarbonilo, Xantilo (Xan) , Tritilo (Trt) , 4-metiltritilo (Mtt) , 4-metoxitritilo (Mmt) , 4-metoxi-2, 3, 6-trimetilbencenosulfonilo (Mtr) , Mesitileno-2-sulfonilo (Mts) , 4, 4-dimetoxibenzhidrilo (Mbh) , Tosilo (Tos) , 2, 2, 5, 7, 8pentametilo-croman-6-sulfonilo (Pmc) , 4-metilbencilo (MeOBzl) , 4-metoxibencilo (MeOBzl) , Benciloxi (BzlO) , Bencilo (Bzl) , Benzoílo (Bz) , 3-nitro-2-piridinasulfenilo (Npys) , 1- (4, 4-dimetil-2, 6-diclorociclohexilideno) etilo (Dde) , 2, 6diclorobencilo (2, 6-DiCl-Bzl) , 2-clorobenciloxicarbonilo (2-Cl-Z) , 2-bromobenciloxicarbonilo (2-Br-Z) , Benciloximetilo (Bom) , t-butoxicarbonilo (Boc) , ciclohexiloxi (cHxO) , t-butoximetilo (Bum) , t-butoxi (tBuO) , t-butilo (tBu) , Acetilo (Ac) , un grupo benzoílo, un grupo carbobenzoxi, un grupo propilo, un grupo butilo, un grupo pentilo, un grupo hexilo y Trifluoroacetilo (TFA) .

10. El péptido de acuerdo con la reivindicación 8, el que dicho primer grupo protector es un grupo protector seleccionado del grupo que consiste en un grupo benzoílo, un acetilo, un propionilo, un carbobenzoxi, un propilo, un butilo, un pentilo, un hexilo y un alquilo de 3 a 20 carbonos.

11. El péptido de acuerdo con la reivindicación 8 o la reivindicación 10, en el que dicho segundo grupo protector es una amida.

12. El péptido de acuerdo con la reivindicación 11, en el que dicho grupo protector es un acetilo.

13. El péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en el que dicho péptido está mezclado con un excipiente farmacológicamente aceptable.

14. El péptido de acuerdo con la reivindicación 13, en el que dicho excipiente farmacológicamente aceptable es adecuado para administración oral a un mamífero.

15. El péptido de acuerdo con la reivindicación 13 o la reivindicación 14, en el que dicho péptido está formulado como una formulación de dosificación unitaria.

16. El péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-15 para su uso en la prevención o tratamiento de aterosclerosis.

17. El péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-15 para su uso en la prevención o tratamiento de una complicación coronaria asociada con una respuesta de fase aguda a una inflamación.