Nuevos métodos de diagnóstico.

Un método de ayuda en el diagnóstico de un trastorno relacionado con el receptor p11/5-HT enun sujeto que comprende determinar el nivel de p11 en una muestra de sangre de dicho sujeto ycomparar dicho nivel de p11 con una referencia,

donde un nivel reducido de nivel de p11 comparadocon la referencia constituye un diagnóstico positivo de trastorno relacionado con el receptor p11/5-HT,donde dicho trastorno relacionado con el receptor p11/5-HT es la depresión.

NUEVOS MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO Descripción CAMPO TÉCNICO [0001] La presente invención introduce una asociación biológica entre p11 y los receptores 5-HT1B y 5-HT4, proporcionando una herramienta de diagnóstico para la identificación de pacientes que padecen trastornos relacionados con el receptor p11/5-HT.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN [0002] Los fármacos antidepresivos y ansiolíticos actualmente disponibles se dirigen a las rutas operativas, de degradación y biosintéticas de neurotransmisores monoamina como norepinefrina, dopamina y, en especial, serotonina (5-hidroxitriptamina o 5-HT) . La serotonina, descubierta por primera vez a finales de los años 40, desempeña un papel crucial en la modulación de numerosas funciones en el cuerpo que incluyen el estado de ánimo, el sueño, el apetito y las actividades sexuales. Actúa tanto como neurotransmisor dentro del sistema nervioso central como también como modulador de la señal periférica. Por consiguiente, las alteraciones en la actividad y disponibilidad de la serotonina se han asociado a la depresión, trastornos alimentarios (p.ej., bulimia) , trastorno obsesivo compulsivo (TOC) , adicción a las drogas, trastorno por déficit de atención (TDA) , trastorno por déficit de atención e hiperactividad (TDAH) , síndrome premenstrual, trastornos de ansiedad, agresión, trastornos del sueño, disfunción sexual, trastornos gastrointestinales (p.ej. síndrome del intestino irritable) , manía, migraña y trastorno bipolar. Los antidepresivos convencionales generalmente regulan la transmisión de la señal mediante (1) la prevención de la degradación de serotonina inhibiendo la monoaminooxigenasa o (2) el aumento del transporte neuronal de serotonina inhibiendo la recaptación de serotonina por las neuronas presinápticas. Sin embargo, a pesar de más de medio siglo de estudio intensivo de las rutas de la serotonina, la comprensión de estas rutas es incompleta y no existen pruebas diagnósticas o biomarcadores basados de manera bioquímica para la disfunción de las rutas de la serotonina. [0003] Los receptores 5-HT (serotonina) son heterogéneos y se encuentran en la superficie de una variedad de células. El receptor 5-HT1B es uno de los 14 subtipos de receptores de serotonina y se encuentra de manera abundante a lo largo del sistema nervioso central. La estructura, distribución y función aparente de los receptores 5-HT1B son muy similares en roedores y seres humanos. Este receptor se ha asociado a un intervalo diverso de funciones fisiológicas y comportamientos que incluyen estado de ánimo, cognición, agresión, adicción, sueño y alimentación. Los receptores 5-HT1B se encuentran en neuronas que contienen serotonina y que no contienen serotonina. Los receptores 5-HT1B se encuentran predominantemente en la parte presináptica de la neurona, donde actúan como autorreceptores terminales implicados en la regulación de liberación de serotonina por las neuronas. Cuando se estimulan mediante enlace a sertonina, inhiben la liberación de serotonina adicional por la neurona; cuando no se estimulan, aumenta la liberación de serotonina. De este modo, el bloqueo de estos receptores 5-HT1B tiende a aumentar los niveles de serotonina. Existen pruebas de que los receptores 5-HT1B son heterorreceptores, implicados en el control de la liberación de otros neurotransmisores, como acetilcolina, glutamato, dopamina, norepinefrina y ácido gamma aminobutírico, así como serotonina. Algunos receptores 5-HT1B se encuentran también de manera postsináptica. El receptor 5-HT4 se encuentra en el sistema gastrointestinal, donde interviene en la motilidad gastrointestinal, así como el sistema nervioso central. Mientras que 5-HT1B se asocia generalmente a la disminución en AMPc, el receptor 5-HT4 se asocia al aumento en la actividad de AMPc. Los receptores 5-HT4 en el cerebro modulan la liberación de neurotransmisores (acetilcolina, dopamina, serotonina y GABA) y mejoran la transmisión sináptica. También desempeñan un papel en la mejora de la memoria, fomentando la liberación de proteína precursora del amiloide soluble no amiloidogénica (sAPPalpha, en inglés) . Puesto que se considera ampliamente que la enfermedad de Alzheimer es mediada por la deposición de formación de placas de beta amiloide, aumentar la función del receptor 5-HT4, aumentando así la liberación de sAPPalpha, representa un método potencial para el tratamiento o profilaxis de la enfermedad de Alzheimer. [0004] La proteína p11 es miembro de la familia de proteínas S100 mano-EF. p11 también se conoce como cadena ligera de anexina II, cadena ligera de lipocortina II, cadena ligera de calpactina I, 42C o proteína relacionada con S-100 y estos términos pueden usarse aquí de manera intercambiable. R. Donato, Biochim. Biophys. Acta, 1450, 191 (1999) . Está presente en una variedad de células independientemente o como un heterotetrámero. El heterotetrámero se compone de dos copias de p36, también conocidas como cadena pesada de calpactina I o anexina II, y dos copias de p11. Dentro de la célula, el heterotetrámero se sitúa en la superficie citoplasmática de la membrana plasmática en el citoesqueleto submembranoso y se sugiere que el complejo puede desempeñar un papel en los eventos de tráfico como exocitosis, endocitosis y adhesión célula-célula. Se ha afirmado que p11 interviene en la invasión de células tumorales, crecimiento tumoral y metástasis. US 2004/0142897A1. No se ha identificado previamente la implicación de p11 con los receptores 5-HT o trastornos psiquiátricos. SVENNINGSOSON PER AT AL:quot;Alterations in 5-HT1B receptor function by p11 in depression-like states quot;SCIENCE (WASHINGTON D C) , vol. 311, nº 5757, enero 2006 (2006-01) , págs. 77-80, XP2512278, ISSN:0036-8075) muestra que p 11 (S100A10) es un ligando para el receptor 5-HT1B y que las alteraciones en la función del receptor 5-HT1B actúan mediante p11 en estados similares a la depresión. RESUMEN DE LA INVENCIÓN [0005] Los solicitantes han descubierto de manera sorprendente que las proteína p11 interactúa específicamente con receptores 5-HT1B y parece que ayuda a regular la señalización de la serotonina química mensajera del cerebro, una diana clave de numerosos agentes psicoterapéuticos. Svenningsson et al., Science (2006) 331:77-80; Svenningsson et al., Current Opinion in Pharmacology (2006) , 6:1-6. p 11 parece desempeñar un papel crucial en el reclutamiento de receptores 5-HT1B hacia la membrana plasmática neuronal donde son más funcionales. Además, los solicitantes han descubierto que p11 también interactúa con receptores 5-HT4. Los solicitantes han demostrado que los niveles p11 pueden estar implicados directamente en el desarrollo de la depresión, trastornos de ansiedad y enfermedades psiquiátricas similares que se cree que implican receptores de serotonina defectuosos. La comparación de niveles de p11 en los cerebros de sujetos deprimidos (seres humanos y modelos de ratones deprimidos) con los de aquellos de sujetos no deprimidos (seres humanos y ratones de control no deprimidos) muestra un nivel sustancialmente inferior de p11 en sujetos deprimidos en comparación con sujetos no deprimidos. Además, los niveles p11 tienden a ser superiores en sujetos tratados con diversos tipos de antidepresivos, incluyendo antidepresivos tricíclicos, inhibidores de monoaminooxidasa (MAOI) y terapia electroconvulsiva. Existe una sobreexpresión de p11 en animales tratados con antidepresivos. Por ejemplo, hemos observado que los monos que reciben el inhibidor selectivo de la recaptación de serotonina fluoxetina muestran un aumento significativo (más del doble) en la expresión de p11 en las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y se han demostrado efectos similares en los cerebros de ratones que reciben fluoxetina. De modo similar, los modelos animales con un gen p11 knock-out o desactivado presentan menos receptores 5-HT1B en la membrana plasmática neuronal, presentan señalización de serotonina reducida y muestran un fenotipo similar a la depresión. De manera interesante, la expresión de p11 disminuye en respuesta a niveles excesivos de hormonas glucocorticoides, que se liberan a menudo en respuesta al estrés, que teniendo en cuenta el trabajo de los solicitantes, proporciona una posible explicación bioquímica para la conexión observada entre la depresión y los eventos altamente estresantes. Basándose en estos sorprendentes descubrimientos por parte de los Solicitantes, p11 ha mostrado ser una diana de diagnóstico adecuada así como una diana del fármaco y herramienta de exploración para el desarrollo de tratamientos para trastornos previamente asociados a receptores 5-HT1B o 5-HT4, o con la función de la serotonina (o falta de la misma) . De este modo, la presente invención proporciona un método de ayuda en el diagnóstico... [Seguir leyendo]

1. Un método de ayuda en el diagnóstico de un trastorno relacionado con el receptor p11/5-HT en un sujeto que comprende determinar el nivel de p11 en una muestra de sangre de dicho sujeto y

comparar dicho nivel de p11 con una referencia, donde un nivel reducido de nivel de p11 comparado con la referencia constituye un diagnóstico positivo de trastorno relacionado con el receptor p11/5-HT, donde dicho trastorno relacionado con el receptor p11/5-HT es la depresión.

2. El método según la reivindicación 1, donde la muestra de sangre comprende células 10 mononucleares de sangre periférica (PMBC) .

3. El método según la reivindicación 2, donde las PMBC se seleccionan de entre monocitos, células NK y células T CD-8+.

4. El método según la reivindicación 2, donde las PMBC son células NK.