Métodos para proteger frente a apoptosis usando lipopéptidos.

Una composición que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula:

**Fórmula**

en la que,

R1 representa H o -CO-R4,

R2, R3 y R4 son independientemente H o alifático C6-C20 sustituido opcionalmente;

X es un péptido que comprende SEQ ID NO: 21; y

Z es S o CH2.

Métodos para proteger frente a apoptosis usando lipopéptidos Campo de la invención Esta invención se refiere al uso de inductores de NF-!B para proteger a mamíferos de los efectos de la apoptosis. Más específicamente, esta invención se refiere al uso de inductores de NF-!B para proteger a mamíferos de la exposición al estrés, tal como radiación y tratamientos del cáncer.

Antecedentes de la invención La progresión de células normales a células tumorales implica una pérdida de los mecanismos negativos de regulación del crecimiento, incluyendo resistencia a estímulos inhibidores del crecimiento y una ausencia de dependencia de factores de crecimiento y hormonas. Los tratamientos tradicionales del cáncer que están basados en radiación o fármacos citotóxicos se basan en las diferencias en el control del crecimiento de las células normales y malignas. Los tratamientos tradicionales del cáncer someten a las células a un estrés genotóxico severo. En estas condiciones, la mayoría de las células normales se paran y por lo tanto se salvan, mientras que las células tumorales continúan dividiéndose y mueren.

Sin embargo, la naturaleza de las estrategias convencionales del tratamiento del cáncer es tal que los tejidos normales que se dividen rápidamente o tendentes a la apoptosis están en peligro. El daño a estas células normales que se dividen rápidamente causa los efectos secundarios bien conocidos del tratamiento del cáncer (tejidos sensibles: hematopoyesis, intestino delgado, folículos pilosos) . La sensibilidad natural de dichos tejidos se complica por el hecho de que las células cancerosas adquieren frecuentemente defectos en la maquinaria del suicidio (apoptótica) y los procedimientos terapéuticos que causan la muerte en los tejidos sensibles normales pueden no ser eficaces en las células cancerosas. Los intentos convencionales para minimizar los efectos secundarios de las terapias del cáncer se basan en (a) hacer que las células tumorales sean más susceptibles al tratamiento, (b) hacer que las terapias del cáncer sean más específicas para las células tumorales, o (c) estimular la regeneración del tejido normal después del tratamiento (por ejemplo, eritropoyetina, GM-CSF, y KGF) . Cada uno de éstos, sin embargo, tiene una eficacia limitada. Como resultado, continúa existiendo una necesidad de agentes terapéuticos para mitigar los efectos secundarios asociados con la quimioterapia y la terapia con radiación en el tratamiento del cáncer. Esta invención satisface estas necesidades y proporciona otras ventajas relacionadas.

Resumen de la invención En la presente memoria se proporciona una composición que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula:

en la que, R1 representa H o -CO-R4,

R2, R3 y R4 son independientemente H o alifático C6-C20 sustituido opcionalmente; x es un péptido que comprende SEQ ID NO: 21 y Z es S o CH2. El compuesto puede ser un estereoisómero RR o RS, o mezcla de éstos. El compuesto también puede ser de la fórmula:

La composición de la presente invención puede usarse en un método para proteger a un mamífero de los efectos de uno o más tratamientos o afección que desencadena apoptosis.

La afección que desencadena la apoptosis puede ser radiación, lesión, envenenamiento, infección o choque térmico. El tratamiento que desencadena la apoptosis puede ser un tratamiento del cáncer. El tratamiento del cáncer puede ser quimioterapia o terapia con radiación. El tejido en el que la apoptosis se desencadena puede ser el bazo, timo, tracto GI, pulmones, riñones, hígado, sistema cardiovascular, endotelio de los vasos sanguíneos, sistema nervioso (central o periférico) , células progenitoras hematopoyéticas (médula ósea) , sistema inmune, folículos pilosos o el sistema reproductor.

El compuesto puede administrarse en combinación con un radioprotector. El radioprotector puede ser un antioxidante, tal como amifostina o vitamina E. El radioprotector también puede ser una citoquina, tal como factor de células madre. El radioprotector también puede ser flagelina, TGF∀ latente o un activador de un TLR.

Descripción breve de las figuras La Fig. 1 ilustra que la deficiencia de p53 aceleraba el desarrollo del síndrome gastrointestinal inducido por la radiación en ratones. El Panel A presenta gráficos del porcentaje de supervivencia de ratones expuestos a 9, 12, 5, 25 ó 5 x 2, 5 Gy de radiación gamma de cuerpo entero después de pretratamiento con un inhibidor de p53, pifitrina-alfa (PFT) , o DMSO (control) . También se expusieron ratones nulos para p53 a la dosis de radiación acumulativa fraccionada de 12, 5 Gy (5 x 2, 5 Gy) . El Panel B presenta gráficos del porcentaje de supervivencia de ratones de tipo salvaje y nulos para p53 después de exposición a dosis bajas (10 Gy) o altas (15 Gy) de radiación gamma de cuerpo entero. El Panel C presenta un gráfico que ilustra el porcentaje de supervivencia de ratones expuestos a 15 Gy de radicación gamma de cuerpo entero después de reconstitución con médula ósea (BM) de ratones de tipo salvaje o nulos para p53. El Panel D presenta secciones intestinales de parafina teñidas con hematoxilina-eosina de ratones de tipo salvaje y nulos para p53 en los puntos de tiempo indicados después de 15 Gy de radiación gamma. Los recuadros a las 24h muestran tinción TUNEL de regiones de las criptas.

La Fig. 2 ilustra las dinámicas de la proliferación y supervivencia celulares en los intestinos delgados de ratones de tipo salvaje y nulos para p53. El Panel A (izquierda) muestra autorradiografías de secciones de cuerpo completo de ratones de tipo salvaje y nulos para p53 a los que se inyectó 14C-timidina que se trataron con 15 Gy de radiación gamma o no se trataron. Las flechas apuntan a los intestinos. El Panel A (derecha) muestra fotomicrografías de la incorporación de BrdU en el intestino delgado de ratones de tipo salvaje y nulos para p53 a diferentes puntos de tiempo después de 15 Gy de radiación gamma. Las regiones de las imágenes a las 96h se muestran con un aumento mayor. El Panel B presenta un gráfico del número de células/cripta positivas para BrdU en el intestino delgado de ratones de tipo salvaje y nulos para p53 a diferentes puntos de tiempo después de 15 Gy de radiación gamma. El Panel C presenta fotomicrografías de células marcadas con BrdU en el intestino delgado de ratones de tipo salvaje y nulos para p53 a diferentes puntos de

tiempo después de 15 Gy de radiación gamma. El BrdU se inyectó 30 min antes de la irradiación y los ratones se sacrificaron a los puntos de tiempo indicados.

La Fig. 3 ilustra el efecto radioprotector del compuesto, CBLB601. Se muestran gráficos del porcentaje de supervivencia de ratones expuestos a 9, 12, 5, 25 ó 5 x 2, 5 Gy de radiación gamma de cuerpo entero después de pretratamiento con CBLB601 o PBS.

La Fig. 4 ilustra alteraciones en el tamaño del bazo después de exposición a 13 Gy de irradiación gamma de cuerpo entero después de pretratamiento con CBLB601 o PBS. A la izquierda hay un gráfico de pesos de bazos de ratones tratados con PBS y CBLB601, y a la derecha hay imágenes de bazos de los ratones control o tratados.

La Fig. 5 ilustra la determinación del tiempo óptimo para la inyección intraperitoneal de CBLB601. El Panel A muestra un gráfico del porcentaje de supervivencia de ratones expuestos a 10 Gy de irradiación de cuerpo entero (TBI) después de la administración intraperitoneal de PBS o CBLB601 24, 6, 1 ó 0, 5 h antes de la irradiación. El Panel B muestra un gráfico del porcentaje de supervivencia de ratones expuestos a 10 Gy de TBI después de la administración intraperitoneal de PBS o CBLB601 96, 72, 48, 24 ó 1 h antes de la irradiación.

La Fig. 6 ilustra la determinación de la dosis óptima de CBLB601. El Panel A muestra un gráfico del porcentaje de supervivencia de ratones expuestos a 10 Gy de TBI después de la administración intraperitoneal de PBS ó 1, 3, 10, 20, 30 #g de CBLB601/ratón 24 h antes de la irradiación. El Panel B muestra un gráfico del porcentaje de supervivencia de ratones expuestos a 10 Gy de TBI después de la administración intraperitoneal de PBS ó 0, 1, 0, 3, 1, 3, 10 ó 15 #g de CBLB601/ratón 24 h antes de la irradiación.

La Fig. 7 ilustra la determinación de la dosis de radiación protegida por CBLB601. El Panel A muestra un gráfico del porcentaje de supervivencia de ratones expuestos a 10, 11, 12, 13, 14 ó 15 Gy de TBI después de la administración intraperitoneal de PBS 24 h antes de la irradiación. El Panel B muestra un gráfico del porcentaje de supervivencia de ratones expuestos a 10, 11, 12, 13, 14 ó 15 Gy de TBI después de la administración intraperitoneal de 3... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula:

en la que,

R1 representa H o -CO-R4, R2, R3 y R4 son independientemente H o alifático C6-C20 sustituido opcionalmente; X es un péptido que comprende SEQ ID NO: 21; y Z es S o CH2.

2. La composición según la reivindicación 1 para uso en un método para proteger a un mamífero de los efectos de uno o 10 más tratamientos o afecciones que desencadenan la apoptosis.

3. La composición según la reivindicación 1 o uso de la reivindicación 2, en la que la afección se selecciona del grupo que consiste en radiación, lesión, envenenamiento, infección y choque térmico.

4. La composición según la reivindicación 1 para uso de la reivindicación 3, en la que la afección es radiación.

5. La composición según la reivindicación 1 para uso de la reivindicación 2, en la que el tratamiento es un tratamiento del 15 cáncer.

6. La composición según la reivindicación 1 para uso de la reivindicación 5, en la que dicho tratamiento es quimioterapia o terapia con radiación.

7. La composición según la reivindicación 1 para uso de la reivindicación 2, en la que R1 es H y R2 y R3 son alifáticos C16

o sustituciones de éstos.

8. La composición según la reivindicación 1 para uso de la reivindicación 2, en la que el compuesto es un estereoisómero RR o RS o mezcla de éstos.

9. La composición según la reivindicación 1 para uso de la reivindicación 4, en la que la composición es para administración en combinación con un radioprotector.

10. La composición según la reivindicación 1 para uso de la reivindicación 9, en la que el radioprotector es un 25 antioxidante.

11. La composición según la reivindicación 1 para uso de la reivindicación 10, en la que el antioxidante se selecciona del grupo que consiste en amifostina y vitamina E.

12. La composición según la reivindicación 1 para uso de la reivindicación 9, en la que el radioprotector es una citoquina.

13. La composición según la reivindicación 1 para uso de la reivindicación 12, en la que la citoquina es factor de células madre.

14. La composición o uso de la reivindicación 9, en la que el radioprotector es flagelina.

15. La composición según la reivindicación 1 para uso de la reivindicación 9, en la que el radioprotector es TGF∀ latente.

16. La composición según la reivindicación 1 para uso de la reivindicación 9, en la que el radioprotector es un activador de un TLR.

17. La composición según la reivindicación 1 para uso de la reivindicación 2, en la que la apoptosis se desencadena en un tejido seleccionado del grupo que consiste en el bazo, timo, tracto GI, pulmones, riñones, hígado, sistema cardiovascular, endotelio de los vasos sanguíneos, sistema neural central y periférico, células progenitoras hematopoyéticas (médula ósea) , sistema inmune, folículos pilosos y sistema reproductor.