Método de ajuste de calibración de ensayos de diagnostico.

Método de ajuste, de señal medida o de la actividad calculada por el instrumento,

o de una curva de calibraciónpredefinida (curva de precalibración) para un ensayo de exploración de coagulación sanguínea, realizado en uninstrumento con reactivos precalibrados, que comprende las siguientes etapas:

(i) definir un valor de señal o de actividad estándar para un solo ajustador o para dos ajustadores de calibraciónque tiene una concentración o una actividad predeterminada de un compuesto sometido a ensayo, medir paraeste ajustador (o justadores) la diferencia entre el valor (o valores) de señal o de actividad estándar y el valor (ovalores) de la señal medida por el instrumento o del valor (o valores) de actividad calculado a partir de la curva deprecalibración y, si la diferencia medida tiene un valor aceptable,

(ii) ajustar la señal medida por el instrumento o el valor de la actividad calculada por el instrumento o ajustar losvalores de la curva de precalibración de tal manera que el valor de señal medida o de la actividad calculada sobrela curva de precalibración para un solo ajustador o los dos ajustadores se vuelva a llevar a un valor de señal o deactividad idéntico al valor de señal o de actividad estándar determinado en la etapa (i) para un solo ajustador opara cada uno de los dos ajustadores,

(iii) aplicar el mismo ajuste que el descrito en (ii) a todas las muestras cuya señal o actividad se mide con dichosreactivos precalibrados.

Método de ajuste de calibración de ensayos de diagnostico La presente invención se refiere a un método directo o indirecto de ajuste de la calibración preestablecida sobre reactivos destinados para realizar ensayos de diagnostico en el campo de biología médica y más particularmente en el de la hemostasia.

La hemostasia se considera como un conjunto de mecanismos fisiológicos que contribuyen a la prevención y a la detención de sangrado. La hemostasia se compara frecuentemente con una balanza, puesto que la fluidez de la sangre se mantiene gracias a un equilibrio entre activadores e inhibidores del proceso de coagulación.

Cualquier ruptura en este equilibrio hará inclinar la balanza hacía un proceso patológico: la trombosis, resultante de la formación de un coágulo que puede provenir de un déficit de inhibidores, o la hemorragia resultante de sangrado que puede deberse a un déficit de factores de coagulación.

El análisis y la dosificación de factores activadores o inhibidores de la coagulación permiten de este modo establecer diagnósticos de predisposición o de riesgos de trombosis o de hemorragia en diferentes situaciones clínicas.

La inmensa mayoría de estos ensayos se realizan de manera rutinaria en laboratorios de análisis o de hospitales, de manera semi-automática o automática. Generalmente, según los ensayos efectuados y los instrumentos utilizados, los resultados consisten en una señal medida por el instrumento o en una actividad biológica calculada por el instrumento.

Como para la mayoría de los ensayos biológicos realizados en aparatos de análisis, cuando se efectúa un ensayo automático de hemostasia, es necesario disponer de una calibración que permita calcular directamente el índice o la actividad del factor estudiado. Estos datos de calibración se obtienen generalmente utilizando calibradores cuya actividad o concentración del analito diana está bien caracterizada, y a partir de los cuales pueden establecerse curvas de calibración que permiten atribuir una concentración o una actividad a una intensidad de señal proporcionada.

Sin embargo, en la medida en que un mismo ensayo puede realizarse a menudo en aparatos automáticos de diferentes gamas, es frecuente observar una variabilidad entre instrumentos. Esta variabilidad no siempre permite comparar directamente, para un mismo ensayo, los resultados obtenidos en aparatos diferentes que siempre utilizarían el mismo estándar de calibración.

Por otro lado, como muchos de los reactivos se presentan en forma líquida, estos pueden ser más sensibles al fenómeno de envejecimiento que los reactivos en forma liofilizada. Debido a esto, incluso si estos reactivos permanecen funcionales durante un tiempo determinado, pueden no obstante ver disminuir su sensibilidad parcialmente o variar en función del tiempo.

Por tanto esto produce una dificultad para interpretar los resultados obtenidos a partir de un mismo reactivo pero que derivan de ensayos realizados en periodos diferentes.

La solicitud US 2007/0020765 describe un método para estandarizar los tiempos de coagulación de una muestra, en la que se utiliza al menos dos calibradores para los cuales se han predeterminado tiempos de coagulación estándar en el

mismo sistema de ensayo que el aplicado a la muestra, y a partir de los cuales se establece una curva de calibración entre los tiempos estándar predeterminados y los tiempos reales medidos por esos mismos calibradores, en el ensayo utilizado.

El tiempo de coagulación medido en la muestra se convierte en tiempo de coagulación estandarizado usando la curva de 50 calibración así establecida.

Este método consiste por tanto en crear localmente una calibración cada vez que se utiliza un nuevo kit para medir un tiempo de coagulación en un ensayo de hemostasia.

El objeto de la presente invención es proporcionar un método de ajuste para instrumentos de análisis y los reactivos precalibrados asociados, permitiendo dicho método limitar o evitar fluctuaciones de los resultados obtenidos con el tiempo y/o según el tipo de instrumento utilizado para los ensayos.

La presente invención también tiene como objeto un método de ajuste, de señal medida o de la actividad calculada por el

instrumento o de una curva de calibración predefinida (curva de precalibración) para un ensayo de exploración de coagulación sanguínea, realizado en un instrumento con reactivos precalibrados, que comprende las siguientes etapas: (i) definir un valor de señal o de actividad, teniendo dicho valor estándar, para un solo ajustador, o para dos ajustadores de calibración, una concentración o una actividad predeterminada en un compuesto sometido a ensayo, y medir, para este ajustador o ajustadores, la diferencia entre el valor (o valores) estándar de señal o de actividad y el valor (o valores) de señal medida por el instrumento o el valor (o valores) de actividad calculado (s) a partir de la curva de precalibración y, si la diferencia medida tiene un valor aceptable,

(ii) ajustar la señal medida por el instrumento o el valor de la actividad calculada por el instrumento o ajustar el valor (o valores) de la curva de precalibración de manera que el valor de señal medida o de la actividad calculada en la curva de precalibración para un solo ajustador o para los dos ajustadores, se vuelva a llevar a un valor de señal o de actividad idéntico al valor de señal o de actividad estándar determinado en la etapa (i) para un solo ajustador o para cada uno de los dos ajustadores,

(iii) aplicar el mismo ajuste que el descrito en (ii) a todas las muestras sometidas a ensayo cuya señal o actividad se mide con dichos reactivos precalibrados.

Por diferencia medida que tiene un “valor aceptable” se entiende una diferencia que queda comprendida entre dos valores del intervalo de valores considerados como admisibles por el experto en la técnica, para el reactivo y el instrumento utilizados.

Esta diferencia puede ser más o menos importante en función de la sensibilidad del ensayo realizado y del orden de 20 magnitud de las señales medidas.

Por esta razón, el límite por encima del cual el ajuste de la precalibración no será posteriormente aceptable, debe definirse con respecto al tipo de ensayo e instrumento utilizados.

El experto en la técnica, acostumbrado a analizar los resultados obtenidos por los aparatos de análisis automáticos, puede detectar fácilmente al realizar los ensayos, si los valores a partir de los cuales los resultados se consideran anómalos, serían debidos al reactivo utilizado o al instrumento.

También es capaz de definir las diferencias entre los valores de señal o de actividad estándar y los valores de señal

medida por el instrumento o de actividad calculada en la curva de precalibración según la etapa (i) del método de la invención, que sean lo suficientemente pequeños como para no ocultar las anomalías de los reactivos o de los aparatos utilizados.

Preferentemente, la diferencia medida es, a lo sumo, del 20 al 30%. 35 Según una variante preferida, el método de la invención se realiza con un solo ajustador.

Según un modo de realización particular de la invención, el ajuste, mediante un solo ajustador, de una señal medida en el ámbito de un ensayo determinado, conforme con las etapas (i) y (ii) del procedimiento según la invención puede 40 realizarse de la siguiente manera:

-para la etapa (i) de establecimiento del valor estándar se actúa de la siguiente manera:

El valor de la señal estándar asignado al ajustador se calcula a partir de los resultados establecidos en el momento de la 45 etapa de determinación de la precalibración del producto en cuestión. La determinación de la precalibración consiste en pasar patrones a índices conocidos del analito a dosificar (compuesto sometido a ensayo) sobre un panel de varios instrumentos. Cada uno de los patrones se pasa por duplicado, por triplicado o por cuadruplicado en cada instrumento.

Al mismo tiempo, el ajustador que valora la señal también se pasa simultáneamente por duplicado, por triplicado o por 50 cuadruplicado sobre esos mismos instrumentos.

A continuación se calcula la media aritmética, la media truncada o la mediana fuera del instrumento sobre todos los valores de señal así obtenidos, por separado para cada patrón y para el ajustador.

La determinación de la ecuación de precalibración se calcula fuera del instrumento por regresión mínimos cuadrados en diferentes pares (señal media o mediana; concentración del patrón) .

El valor de señal estándar del ajustador corresponde respectivamente a la media aritmética, a la... [Seguir leyendo]

1. Método de ajuste, de señal medida o de la actividad calculada por el instrumento, o de una curva de calibración predefinida (curva de precalibración) para un ensayo de exploración de coagulación sanguínea, realizado en un 5 instrumento con reactivos precalibrados, que comprende las siguientes etapas:

(i) definir un valor de señal o de actividad estándar para un solo ajustador o para dos ajustadores de calibración que tiene una concentración o una actividad predeterminada de un compuesto sometido a ensayo, medir para este ajustador (o justadores) la diferencia entre el valor (o valores) de señal o de actividad estándar y el valor (o valores) de la señal medida por el instrumento o del valor (o valores) de actividad calculado a partir de la curva de precalibración y, si la diferencia medida tiene un valor aceptable,

(ii) ajustar la señal medida por el instrumento o el valor de la actividad calculada por el instrumento o ajustar los valores de la curva de precalibración de tal manera que el valor de señal medida o de la actividad calculada sobre la curva de precalibración para un solo ajustador o los dos ajustadores se vuelva a llevar a un valor de señal o de actividad idéntico al valor de señal o de actividad estándar determinado en la etapa (i) para un solo ajustador o para cada uno de los dos ajustadores,

(iii) aplicar el mismo ajuste que el descrito en (ii) a todas las muestras cuya señal o actividad se mide con dichos reactivos precalibrados.

2. Método según la reivindicación 1, donde la concentración o la actividad del compuesto de ensayo del ajustador se fija de tal manera que la proporción señal/fondo sea elevada en el ensayo en cuestión.

3. Método de ajuste según la reivindicación 1 caracterizado por que se usa un solo ajustador.

4. Método de ajuste según la reivindicación 2 caracterizado por que la diferencia medida de acuerdo con la etapa (i) es, a lo sumo, del 20 al 30%.

5. Método de ajuste según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que la composición del ajustador con respecto a factores de coagulación se define en función de dicho ensayo de exploración de coagulación,

conteniendo dicho ajustador al menos el compuesto estudiado en el ensayo usado, cuya concentración o actividad se ha predeterminado.

6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que el ajustador consiste en:

-plasma liofilizado estabilizado o un grupo de plasmas liofilizados estabilizados. -proteínas plasmáticas purificadas o semipurificadas, constituyendo dichas proteínas el suministro de factores necesarios para realizar la reacción producida en el ámbito del ensayo realizado y que adicionalmente comprenden el compuesto estudiado, cuya concentración o actividad está predeterminada.

7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado por que el ensayo de exploración de coagulación sanguínea es un ensayo de tipo análisis inmunológico en fase sólida dispersa.

8. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, donde el ensayo de exploración funcional es un ensayo de análisis de Dímeros-D. 45

9. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde el ensayo de exploración de coagulación es un ensayo TCA, TP, TT o cualquier otro ensayo enzimológico clásico.

10. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, donde el ajustador no se utiliza para preparar la curva de 50 precalibración.

11. El uso del método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para corregir:

-la influencia de los cambios de los reactivos, particularmente reactivos líquidos, utilizados en un aparato

automático para realizar un ensayo de diagnóstico de biología médica, particularmente debido a la vida útil de dichos reactivos, o -la influencia del instrumento utilizado para un ensayo de diagnóstico de biología médica.

12. El uso de un ajustador de calibración en un método para ajustar la señal medida o una actividad calculada o una 60 curva de calibración predefinida según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en un ensayo de exploración de coagulación sanguínea, caracterizado por que el ajustador se selecciona entre:

-un plasma liofilizado estabilizado o de un grupo de plasmas liofilizados estabilizados, cuya concentración o actividad de un compuesto sometido a ensayo en un ensayo de exploración de coagulación sanguínea se predetermina, o

-proteínas plasmáticas purificadas o semipurificadas, proporcionando dichas proteínas el suministro de factores necesarios para realizar la reacción producida en el ámbito del ensayo realizado y que adicionalmente comprende el compuesto estudiado, cuya concentración o actividad está predeterminada, y -siendo dicho ajustador de tal manera que la concentración o actividad del compuesto sometido a ensayo se seleccione en un intervalo correspondiente a una proporción señal/ruido elevada para dicho ensayo de exploración.