Lactoferrina.

Una composición constituida esencialmente por polipéptido de lactoferrina para uso en el tratamiento o laprevención de la osteoporosis,

en donde dicho polipéptido de lactoferrina tiene una pureza de al menos 65% basadaen peso seco y en donde dicho polipéptido de lactoferrina contiene no más de dos iones metálicos por molécula delactoferrina.

Lactoferrina Esta solicitud reivindica prioridad con respecto a la Solicitud de Patente de Nueva Zelanda No. de Serie 518121, presentada el 3 de abril de 2002

Antecedentes La lactoferrina es una glicoproteína de 80 kD fijadora de hierro presente en la mayoría de los fluidos exocrinos, con inclusión de lágrimas, bilis, moco bronquial, fluidos gastrointestinales, moco cervico-vaginal, fluido seminal, y leche. La misma es un constituyente principal de los gránulos específicos secundarios de los neutrófilos polimorfonucleares circulantes. La fuente más rica de lactoferrina es la leche de mamífero y el calostro.

La lactoferrina circula a una concentración de 2-7 μg/ml. La misma tiene múltiples funciones biológicas supuestas, que incluyen la regulación del metabolismo del hierro, la función inmune, y el desarrollo del embrión. La lactoferrina tiene actividad anti-microbiana contra una diversidad de patógenos que incluyen bacterias Gram-positivas y Gramnegativas, levaduras, y hongos. El efecto antimicrobiano de la lactoferrina está basado en su capacidad de fijación de hierro, que es esencial para el crecimiento de los patógenos. La lactoferrina inhibe también la replicación de diversos virus y aumenta la susceptibilidad de algunas bacterias a los antibióticos y lisozima por fijación al componente lipídico A de los lipopolisacáridos en las membranas bacterianas.

EP 1.116.490A1 da a conocer el uso de lactoferrina para mejora de la función hepática.

US 5.932.259 da a conocer el uso de una fracción básica de proteínas aislada de leche como un agente de fortalecimiento de los huesos.

US 2002/0004073 da a conocer suplementos dietéticos para consumo humano que comprenden calostro y lactoferrina para uso en la inhibición de infecciones y aumento de la reparación y curación de los tejidos.

JP 2000281586 da a conocer el uso de una composición hierro/lactoferrina para uso en el fortalecimiento del hueso en donde la composición contiene un complejo hierro/lactoferrina que tiene al menos 3 átomos de hierro por molécula de lactoferrina.

Kanyshkova et al “lactoferrin and its biological function”; Biochemistr y 66 (1) 2001, páginas 1-7 da a conocer que la lactoferrina tiene dos sitios de fijación de hierro.

De acuerdo con la presente invención, se proporciona un polipéptido de lactoferrina para uso en el tratamiento o la prevención de la osteoporosis, en donde dicho polipéptido de lactoferrina tiene una pureza de al menos 65% basada en peso seco y en donde dicho polipéptido de lactoferrina contiene no más de dos iones metálicos por molécula de lactoferrina.

Preferiblemente, dicho polipéptido de lactoferrina contiene dos iones metálicos por molécula.

Ventajosamente, dicho polipéptido de lactoferrina contiene iones hierro, cobre, cobre, cobalto, manganeso, cinc o magnesio.

Más preferiblemente, dicho polipéptido de lactoferrina contiene iones hierro.

Convenientemente, dicho polipéptido de lactoferrina es humano o recombinante.

El polipéptido de lactoferrina tiene preferiblemente una pureza de al menos 75%, más preferiblemente al menos 85% y aún más preferiblemente al menos 95%.

La invención proporciona también una composición nutriente farmacéutica que comprende dicho polipéptido de lactoferrina de la invención, junto con una composición farmacéutica que comprende dicho polipéptido de lactoferrina de la invención.

Ventajosamente, las composiciones de la invención comprenden además un agente adicional mejorador del hueso.

Convenientemente, dicho agente mejorador del hueso se selecciona de calcio, cinc, magnesio, vitamina C, vitamina D, vitamina E y vitamina K2.

Sumario 45 Esta invención se refiere a un polipéptido de lactoferrina que es capaz de estimular el crecimiento esquelético e inhibir la resorción ósea.

Específicamente, esta invención caracteriza un polipéptido puro de lactoferrina que contiene no más de dos (es decir 0, 1, ó, preferiblemente, 2) iones metálicos por molécula. Un polipéptido “puro” es un polipéptido exento de otras macromoléculas biológicas y que tiene una pureza de al menos 65% (v.g., al menos 70, 75, 80, 85, 90, 95, ó 99%) basada en peso seco. La pureza de un polipéptido puede medirse por cualquier método estándar apropiado, por ejemplo, por cromatografía en columna, electroforesis en gel de poliacrilamida, o análisis HPLC. El polipéptido de lactoferrina puede ser un polipéptido existente naturalmente, un polipéptido recombinante, o un polipéptido sintético.

Variantes de un polipéptido de lactoferrina de tipo salvaje (v.g., un fragmento del polipéptido de lactoferrina de tipo salvaje que contiene al menos 2 (v.g., 4, 6, 8, 10, 20, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700) aminoácidos, o una proteína recombinante que contiene una secuencia del polipéptido de lactoferrina) que mantienen la actividad biológica de un polipéptido de lactoferrina de tipo salvaje están dentro del alcance de la invención. Un polipéptido de lactoferrina de la invención puede ser de origen mamífero, v.g., de leche humana o bovina. El ion metálico fijado al polipéptido puede ser un ion hierro (como en un polipéptido de lactoferrina existente naturalmente) , un ion cobre, un ion cromo, un ion cobalto, un ion manganeso, un ion cinc, o un ion magnesio.

Un polipéptido de lactoferrina de la invención puede utilizarse para estimular el crecimiento esquelético (v.g., por promover la proliferación células osteoblásticas y condrocitos) e inhibir la resorción ósea (v.g., por inhibición del desarrollo de osteoclastos) . Una preparación de un polipéptido de lactoferrina de la invención (v.g., lactoferrina 15 aislada de leche de bovino, puede contener polipéptidos de una sola especie, v.g., fijando cada molécula dos iones hierro. El mismo puede contener también polipéptidos de especies diferentes, v.g., algunas moléculas que no fijan ion alguno en tanto que otras fijan cada una uno o dos iones; algunas moléculas que fijan cada una un ion hierro y otras que fijan cada una un ion cobre; algunas moléculas que fijan cada una un polipéptido de lactoferrina biológicamente activo (de longitud total o más cortos que la longitud total) , que contiene 0, 1, ó 2 iones metálicos y otras que son cada una un fragmento (igual o diferente) del polipéptido; o siendo todas las moléculas cada una un fragmento (igual o diferente) de un polipéptido de lactoferrina de longitud total que contiene 0, 1, ó 2 iones metálicos. Por ejemplo, una mixtura de polipéptidos de lactoferrina de longitud total y diversos fragmentos de polipéptidos de lactoferrina de longitud total pueden prepararse a partir de un hidrolizado, v.g., un material digerido parcialmente tal como un material digerido con proteinasa de polipéptidos de lactoferrina de longitud total. En caso contrario, aquélla puede obtenerse por mezcladura de polipéptidos de lactoferrina de longitud total con diversos fragmentos de polipéptidos de lactoferrina de longitud total (v.g., fragmentos sintéticos) . Una mixtura de diversos fragmentos de polipéptidos de lactoferrina de longitud total, por otra parte, puede prepararse, por ejemplo, por digestión completa (es decir, tal que no queda polipéptido alguno de longitud total después de la digestión) de polipéptidos de lactoferrina de longitud total, o por mezcladura de fragmentos diferentes de polipéptidos de lactoferrina de longitud total.

La invención caracteriza adicionalmente una composición nutriente farmacéutica, que puede ser leche, zumo, una bebida refrescante, un tentempié, o un suplemento dietético. La composición nutriente farmacéutica contiene un polipéptido de lactoferrina de la invención o una mixtura del polipéptido y fragmentos del polipéptido en una cantidad mayor que la cantidad existente naturalmente. Se ha encontrado que la lactoferrina estimula la proliferación células osteoblásticas y condrocitos e inhibe el desarrollo de osteoclastos. Así pues, una composición nutriente farmacéutica de esta invención es útil para prevención y tratamiento de trastornos óseos tales como osteoporosis y artritis u osteo-artritis reumatoide. La composición nutriente farmacéutica puede incluir adicionalmente una cantidad adecuada de otro agente mejorador del hueso, tal como calcio, cinc, magnesio, vitamina C, vitamina D, vitamina E, vitamina K2, o una mixtura de las mismas.

Adicionalmente, esta invención caracteriza una composición farmacéutica que contiene un polipéptido de lactoferrina de la invención o una mixtura del polipéptido y fragmentos del polipéptido y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Opcionalmente, la composición farmacéutica incluye también otro agente mejorador... [Seguir leyendo]

1. Una composición constituida esencialmente por polipéptido de lactoferrina para uso en el tratamiento o la prevención de la osteoporosis, en donde dicho polipéptido de lactoferrina tiene una pureza de al menos 65% basada en peso seco y en donde dicho polipéptido de lactoferrina contiene no más de dos iones metálicos por molécula de lactoferrina.

2. La composición de la reivindicación 1, en donde dicho polipéptido de lactoferrina contiene dos iones metálicos por molécula.

3. La composición de la reivindicación 2, en donde dicho polipéptido de lactoferrina contiene iones hierro, cobre, cromo, cobalto, manganeso, cinc o magnesio.

4. La composición de la reivindicación 3, en donde dicho … contiene iones hierro.

5. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde dicho polipéptido de lactoferrina es humano.

6. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde dicho polipéptido de lactoferrina es recombinante.

7. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde dicha composición comprende al menos 75% de polipéptido de lactoferrina.

8. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde dicha composición es al menos 85% de polipéptido de lactoferrina.

9. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde dicha composición es al menos 20 95% polipéptido de lactoferrina.

10. Una composición que comprende dicho polipéptido de lactoferrina de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde dicha composición es un nutriente farmacéutico.

11. Una composición que comprende dicho polipéptido de lactoferrina de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde dicha composición es farmacéutica.

12. Una composición de la reivindicación 10 ó 11, en donde dicha composición comprende adicionalmente un agente adicional mejorador del hueso.

13. La composición de la reivindicación 12, en donde dicho agente mejorador del hueso se selecciona de calcio, cinc, magnesio, vitamina C, vitamina D, vitamina E y vitamina K2.