Kit de detección de SRSV.

Un kit de detección de SRSV que consiste esencialmente en:

(a) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO:

1 o unanticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 1,y

(b) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 2 o unanticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 2,y

(c) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 3 o unanticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 3,y

(d) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 4 o unanticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 4, y

(e) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 5 o unanticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 5,y

(f) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 6 o unanticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 6,y

(g) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 7 o unanticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 7,y

(h) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 8 o unanticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 8,y

(i) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 9 o unanticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 9, y

(j) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 10 o unanticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO:, y

(k) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 11 oun anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ IDNO: 11.

Kit de detección de SRSV

Campo Técnico Esta invención se refiere a un kit para detectar y distinguir uno o más virus pequeños de estructura redonda (denominados en adelante "SRSV" por sus siglas en inglés) en un espécimen.

Técnica Anterior

Los SRSV son un grupo de virus causantes de la gastroenteritis viral humana, remontándose el descubrimiento del primero de los mismos a 1972. Son conocidos por causar la gastroenteritis aguda infantil y también brotes de intoxicaciones alimentarias o similares entre adultos y niños de preescolar o de escuela primaria. Debido a la incapacidad para hacer proliferar estos SRSV mediante cultivo celular y a la carencia de modelos animales capaces de mostrar sensibilidad a los mismos, apenas se encuentran disponibles antígenos de SRSV y anticuerpos anti-SRSV, dando como resultado un retraso en el desarrollo de métodos inmunoserológicos para la detección de los virus.

En tales circunstancias, se logró clonar con éxito el gen del virus de Norwalk, un SRSV, en 1993, conduciendo a la determinación de la secuencia de bases de su genoma completo [Patente Japonesa (PCT) 6-506823 A]. Con posterioridad, se desarrollaron métodos de PCR que son útiles para amplificar una parte de una región de ARN polimerasa, y hasta la fecha se han encontrado 14 virus relacionados con SRSV. Como resultado de los análisis de aproximadamente 120 aminoácidos en estas regiones de las ARN polimerasa, se considera que los SRSV están diferenciados grosso modo en dos genogrupos, esto es, el Genogrupo I que incluye la cepa del virus de Norwalk como prototipo y el Genogrupo II que incluye la cepa del Virus Snow Mountain como prototipo.

A medida que se desarrollaron análisis genéticos de virus relacionados con SRSV, se tuvo conocimiento de que existía una diversidad sustancial incluso en el mismo genogrupo. Por otra parte, se encontró que con un método de RT-PCR que hacía uso de cebadores para los genes de las cepas de virus de Norwalk y de virus Snow Mountain como prototipos de los respectivos genogrupos, ninguno de los SRSV es detectable y también que es muy difícil diseñar cebadores o ajustar las condiciones de la RT-PCT para lograr una amplificación eficaz de los SRSV.

Mientras tanto, se prepararon antígenos contra algunos de los virus, tales como la cepa del virus de Norwalk y la cepa del virus Snow Mountain, mediante expresión genética, se obtuvieron anticuerpos, y también se desarrollaron métodos de detección de SRSV dependientes de ELISA haciendo uso de tales anticuerpos. No obstante, todavía fue imposible detectar ninguno de los SRSV causantes de la gastroenteritis debido a la diversidad de los SRSV.

En Japón, por otra parte, en 1997 se determinó que los SRSV eran los factores causantes de las intoxicaciones alimentarias tal como de definieron en el Food Sanitation Act de manera que, si se desencadena una intoxicación alimentaria por SRSV, se requiere la determinación de su ruta de infección. Por consiguiente se desea un método que detecte fácilmente y de manera segura e identifique los SRSV en las heces de un sujeto o en los alimentos.

El documento de HALE A et al, "Expression and self-assembly of grimsby virus: Antigenic distinction from Norwalk and Mexico viruses" CLINICAL AND DIAGNOSTIC LABORATORY IMMUNOLOGY, vol. 6, núm. 1, Enero 1999, páginas 142-145 describe la secuencia que codifica la proteína de la cápsida de GRV, su uso en la preparación de VLP de GRV, el uso de estas últimas para preparar antisuero hiperinmunitario anti-GRV, y la especificidad del serotipo de dichos antisueros hiperinmunitarios anti-GRV, anti-MXV y anti-NV (véase p. ej. la Tabla 2) .

Descripción de la Invención

Por consiguiente, un objeto de la presente invención es proporcionar un kit que puede detectar fácilmente de un espécimen un virus relacionado con SRSV conocido hasta la fecha y pueda discriminar de manera segura su serotipo y genogrupo.

A la vista de las circunstancias anteriores, los autores de la presente invención han continuado con una investigación genética e inmunológica sobre los virus relacionados con SRSV. Como resultado, se ha encontrado que el uso combinado de anticuerpos obtenidos a partir de péptidos de virus relacionados con SRSV, incluyendo péptidos de virus novedosos encontrados recientemente, puede detectar la mayor parte de los SRSV en los especímenes y pueden discriminar de manera segura los Serotipos y los genogrupos de los SRSV, conduciendo a la realización de la presente invención.

Específicamente, la presente invención proporciona: 1. Un kit de detección de SRSV que consiste esencialmente en:

(a) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 1 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 1, y

(b) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 2 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 2, y

(c) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 3 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 3, y

(d) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 4 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 4, y

(e) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 5 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 5, y

(f) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 6 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 6, y

(g) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 7 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 7, y

(h) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 8 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 8, y

(i) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 9 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 9, y

(j) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 10 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 10, y

(k) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 11 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 11.

2. Un kit de detección de SRSV de acuerdo con el apartado 1, en donde dichos anticuerpos han sido preparados mediante inmunización con partículas de tipo virus.

3. Un kit de detección de SRSV de acuerdo con el apartado 1, para distinguir los serotipos de los SRSV.

4. Un kit de detección de SRSV para discriminar el genogrupo de los SRSV, consistiendo el kit esencialmente en

(a) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 1 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 1, y

(b) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 2 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 2, y

(c) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 3 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 3, y

(d) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 4 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 4.

5. Un kit de detección de SRSV para discriminar el genogrupo de los SRSV, consistiendo el kit esencialmente en

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1. Un kit de detección de SRSV que consiste esencialmente en:

(a) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 1 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 1, y

(b) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 2 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 2, y

(c) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 3 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 3, y

(d) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 4 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 4, y

(e) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 5 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 5, y

(f) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 6 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 6, y

(g) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 7 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 7, y

(h) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 8 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 8, y

(i) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 9 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 9, y

(j) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 10 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 10, y

(k) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 11 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 11.

2. Un kit de detección de SRSV de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dichos anticuerpos han sido preparados mediante la inmunización con partículas de tipo virus.

3. Un kit de detección de SRSV de acuerdo con la reivindicación 1, para distinguir los serotipos de los SRSV.

4. Un kit de detección de SRSV para discriminar el genogrupo de los SRSV, consistiendo esencialmente el kit en

(a) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 1 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 1, y

(b) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 2 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 2, y

(c) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 3 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 3, y

(d) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 4 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 4.

5. Un kit de detección de SRSV para la discriminación del genogrupo de los SRSV, consistiendo esencialmente el kit en

(e) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 5 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 5, y

(f) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 6 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 6, y

(g) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 7 o un

anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 7, y

(h) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 8 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 8, y

(i) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 9 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 9, y

(j) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 10 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 10, y

(k) un anticuerpo contra un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 11 o un anticuerpo contra un péptido parcial del mismo que tiene una antigenicidad equivalente al péptido del SEQ ID NO: 11.

6. Un kit de detección de SRSV de acuerdo con las reivindicaciones1 a 5, en donde los anticuerpos se inmovilizan sobre portadores de anticuerpos en fase sólida adecuados para capturar los SRSV.

7. Un gen de Hu/NLV/Chiba/407/1987/JP que tiene

(a) una secuencia de bases representada por SEQ ID NO: 15; o

(b) una secuencia de bases que codifica un péptido con la secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 4.

8. Un gen de Hu/NLV/Kashiwa 47/1997/JP que tiene

(a) una secuencia de bases representada por SEQ ID NO: 20; o

(b) una secuencia de bases que codifica un péptido con la secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 9.

9. Un gen de Hu/NLV/Mie 7k/1994/JP que tiene

(a) una secuencia de bases representada por SEQ ID NO: 21; o

(b) una secuencia de bases que codifica un péptido con la secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 10.

10. Un gen de Hu/NLV/Osaka 10-25/1999/JP que tiene

(a) una secuencia de bases representada por SEQ ID NO: 22; o

(b) una secuencia de bases que codifica un péptido con la secuencia de aminoácidos representada por el SEQ ID NO: 11.

11. Un anticuerpo anti-SRSV específico para partículas de tipo virus que consisten en el péptido del SEQ ID NO: 4, el SEQ ID NO: 9, el SEQ ID NO: 10 o el SEQ ID NO: 11.