Inmunomodulación usando células madre de la placenta.

Células madre de la placenta para uso en un método para inhibir una respuesta inmune,

en donde dichascélulas madre de la placenta inhiben de forma detectable la proliferación de linfocitos T estimulada por linfocitos Bque presentan antígenos del virus Epstein-Barr, en donde dichas células madre de la placenta no son trofoblastos, yen donde al menos 80% de dichas células madre de la placenta

expresan CD200 y HLA-G;

expresan CD73, CD105 y CD200;

expresan CD200 y OCT-4; o

expresan CD73, CD105 y HLA-G;

y

en donde dicha respuesta inmune es una respuesta inmune frente a un aloinjerto, una enfermedad autoinmune,diabetes, lupus eritematoso, artritis reumatoide o esclerosis múltiple.

Inmunomodulación usando células madre de la placenta 1. Campo de la invención En esta memoria se describen métodos para usar células madre de la placenta para modular el sistema inmune y las respuestas inmunes frente a antígenos. En esta memoria también se describen compuestos que comprenden células madre de la placenta para uso en inmunomodulación y métodos para el trasplante de tejidos y órganos que comprenden la administración de células madre de la placenta para evitar o inhibir el rechazo mediado por el sistema inmune 2. Antecedentes de la invención Las células madre humanas son células precursoras totipotentes o pluripotentes capaces de generar una diversidad de linajes de células humanas maduras. Existen pruebas que demuestran que las células madre se pueden emplear para repoblar muchos, si no todos, los tejidos y restaurar la funcionalidad fisiológica y anatómica.

Se han caracterizado muchos tipos diferentes de células madre de mamífero. Véase, por ejemplo, Caplan et al., documento de Patente de Estados Unidos nº 5.486.359 (células madre mesenquimatosas humanas) ; Boyse et al., documento de Patente de Estados Unidos nº 5.004.681 (células progenitoras y células madre hematopoyéticas fetales y neonatales) ; Boyse et al., documento U.S. nº 5.192.553 (lo mismo) ; Beltrami et al., Cell 114 (6) :763-766 (2003) (células madre cardiacas) ; Forbes et al., J. Pathol. 197 (4) :510-518 (2002) (células madre hepáticas) . En trasplantes se ha utilizado sangre del cordón umbilical y células nucleadas totales obtenidas a partir de la sangre del cordón para restaurar, parcial o totalmente, la función hematopoyética en pacientes que han sido sometidos a una terapia de ablación.

Zhang Yi et al., Experimental Hematology, vol. 32, nº 7 (julio 2004) y Li Chang Dong, et al., Cell Research - Yibao Yanjiu, vol. 15, nº 7 (julio 2005) describen una población de células aisladas a partir de la placenta que puede inhibir la proliferación de los linfocitos T en un ensayo de MLR. Roth I, et al., The Journal of Experimental Medicine, vol. 184, nº 2 (1 de Agosto, 1996) describen citotrofoblastos que expresan HLA-G, secretan citocinas e IL-10. McMaster

M. T., et al., Journal of Immunology, The Williams and Wilkins Co., vol. 154, nº 8 (15 de abril, 1995) describen un estudio sobre la producción de proteína HLA-G en trofoblastos humanos in vivo e in vitro, para determinar la importancia de la expresión de HLA-G en la diferenciación de citotrofoblastos. Clark David A., et al., American Journal of Reproductive Immunology, vol. 50, nº 3 (septiembre 2003) describen que los trofoblastos placentarios expresan CD200. Poetgens A. J. G., et al., Placenta, W.B. Saunders, vol. 24, nº 4 (abril 2003) describen un método para aislar trofoblastos placentarios que expresan CD105 en HLA-I. Ninguno de estos documentos describe o sugiere la invención reivindicada.

La placenta es una fuente particularmente atractiva de células madre. Como las placentas de mamífero son abundantes y normalmente se desechan como residuo médico, representan una fuente excepcional de células madre útiles para fines médicos. En la presente invención se proporcionan tales células madre aisladas de la placenta, poblaciones de células madre de la placenta y métodos para utilizarlas.

3. Compendio de la invención La presente invención proporciona células madre de la placenta para uso en un método para inhibir una respuesta inmune, en donde dichas células madre de la placenta inhiben de forma detectable la proliferación de los linfocitos T estimulada por linfocitos B que presentan antígenos del virus Epstein-Barr, en donde dichas células madre de la placenta no son trofoblastos, y en donde al menos 80% de dichas células madre de la placenta expresan CD200 y HLA-G; expresan CD73, CD105 y CD200; expresan CD200 y OCT-4; o expresan CD73, CD105 y HLA-G; y en donde dicha respuesta inmune es una respuesta inmune frente a un alotrasplante, una enfermedad autoinmune, diabetes, lupus eritematoso, artritis reumatoide o esclerosis múltiple. La presente invención proporciona adicionalmente un método para producir in vitro una población de células madre de la placenta que comprende (a) someter a ensayo una pluralidad de células madre de la placenta en un ensayo de reacción linfocitaria mixta (MLR, del inglés “mixed lymphocyte reaction”) ; y (b) seleccionar dicha pluralidad de células madre de la placenta, si dicha pluralidad de células madre de la placenta inhibe de forma detectable la proliferación de linfocitos T CD4+ o CD8+, estimulada por linfocitos B que presentan antígenos del virus Epstein-Barr, en donde dichas células madre de la placenta se adhieren a un sustrato; en donde dichas células madre de la placenta no son trofoblastos; y en donde al menos 80% de dichas células madre de la placenta expresan CD200 y HLA-G; expresan CD73, CD105 y CD200; expresan CD200 y OCT-4; o expresan CD73, CD105 y HLA-G. Además, la presente invención también proporciona una población aislada de células madre de la placenta producida de acuerdo con el método de la presente invención. La presente invención proporciona adicionalmente una población aislada de células madre de la placenta, en donde dichas células madre de la placenta no son trofoblastos, en donde al menos 80% de dichas células madre de la placenta expresan CD200 y HLA-G; expresan CD73, CD105 y CD200; expresan CD200 y OCT-4; o expresan CD73, CD105 y HLA-G, en donde dichas células madre de la placenta inhiben de forma detectable la proliferación de linfocitos T estimulada por linfocitos B que presentan antígenos del virus Epstein-Barr.

En esta memoria se describen métodos de inmunosupresión que emplean una variedad de células madre placentarias o células madre del cordón umbilical, poblaciones de células madre de la placenta o células madre del cordón umbilical, y composiciones que comprenden y/o producidas por las células madre. En esta memoria también se describen composiciones, incluyendo composiciones que comprenden células madre placentarias o células madre del cordón umbilical, que tienen propiedades inmunosupresoras. En esta memoria también se describen poblaciones de células placentarias o células madre del cordón umbilical seleccionadas basándose en su capacidad para modular una respuesta inmune, y composiciones que tienen propiedades inmunomoduladoras.

En un aspecto, en esta memoria se describe un método para inhibir o reducir una respuesta inmune que comprende poner en contacto una pluralidad de células inmunes con una pluralidad de células madre de la placenta durante un tiempo suficiente para que dichas células madre de la placenta supriman de forma detectable una respuesta inmune, en donde dichas células madre de la placenta inhiben de forma detectable la proliferación de linfocitos T en una reacción mixta linfocitaria (MLR) . En una realización específica, dichas células madre de la placenta: expresan CD200 y HLA-G; expresan CD73, CD105 y CD200; expresan CD200 y OCT-4; expresan CD73, CD105 y HLA-G; expresan CD73 y CD105 y facilitan la formación de uno o varios cuerpos de tipo embrioide en una población de células de la placenta que comprende la pluralidad de células madre de la placenta cuando dicha población se cultiva en condiciones que permiten la formación de cuerpos de tipo embrioide y/o expresa OCT-4 y facilita la formación de uno o varios cuerpos de tipo embrioide en una población de células de la placenta que comprende la pluralidad de células madre placentarias, cuando dicha población se cultiva en condiciones que permiten la formación de cuerpos de tipo embrioide. En otra realización específica, dicha pluralidad de células inmunes son linfocitos T o células NK (citotóxicas, del inglés “natural killer”) . En una realización más específica, dichos linfocitos T son linfocitos T CD4+. En otra realización más específica, dichos linfocitos T son linfocitos T CD8+. En otra realización específica, dicha puesta en contacto se lleva a cabo in vitro. En otra realización específica, dicha puesta en contacto se realiza in vivo. En una realización más específica, dicha puesta en contacto in vivo se realiza en un sujeto mamífero, por ejemplo, un sujeto humano. En otra realización más específica, dicha puesta en contacto comprende administrar dichas células placentarias por vía intravenosa, por vía intramuscular o en un órgano en dicho sujeto (por ejemplo, un páncreas) . El método para inhibir una respuesta inmune, particularmente in vivo, puede comprender adicionalmente administrar (por ejemplo, a un mamífero) , p. ej., una anti-proteína inflamatoria de macrófago (MIP) -1α o un anticuerpo anti-MIP-1β a dicho sujeto, en donde dicho anticuerpo se administra en una cantidad suficiente para... [Seguir leyendo]

1. Células madre de la placenta para uso en un método para inhibir una respuesta inmune, en donde dichas células madre de la placenta inhiben de forma detectable la proliferación de linfocitos T estimulada por linfocitos B que presentan antígenos del virus Epstein-Barr, en donde dichas células madre de la placenta no son trofoblastos, y en donde al menos 80% de dichas células madre de la placenta expresan CD200 y HLA-G;

expresan CD73, CD105 y CD200;

expresan CD200 y OCT-4; o expresan CD73, CD105 y HLA-G;

y

en donde dicha respuesta inmune es una respuesta inmune frente a un aloinjerto, una enfermedad autoinmune,

diabetes, lupus eritematoso, artritis reumatoide o esclerosis múltiple.

2. Las células madre de la placenta para uso según la reivindicación 1, en donde dichos linfocitos T son linfocitos T CD4+ o linfocitos T CD8+.

3. Las células madre de la placenta para uso según la reivindicación 1, en donde dicho método comprende adicionalmente el uso de un anticuerpo anti-proteína inflamatoria de macrófagos (MIP) -1α o anti-MIP-1β, en donde dicho anticuerpo está presente en una cantidad suficiente para causar una disminución detectable de la cantidad de MIP-1α o anti-MIP-1β en la sangre de un sujeto que recibe dicho medicamento.

4. Las células madre de la placenta para uso según la reivindicación 1, en donde dicho método comprende adicionalmente el uso de células CD34+, o células madre mesenquimatosas obtenidas a partir de la médula ósea.

5. Las células madre de la placenta para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde dicho al menos 80% de dichas células madre de la placenta son OCT-4+.

6. Las células madre de la placenta para uso según la reivindicación 1, en donde dicho al menos 80% de dichas células madre de la placenta expresan CD73, CD105 y CD200.

7. Las células madre de la placenta para uso según la reivindicación 1, en donde dicho al menos 80% de dichas células madre de la placenta expresan CD200 y OCT-4.

8. Las células madre de la placenta para uso según la reivindicación 1-7, en donde dicha respuesta inmune es una respuesta inmune contra la esclerosis múltiple.

9. Un método para producir una población de células madre de la placenta in vitro que comprende

(a) someter a ensayo una pluralidad de células de la placenta en un ensayo de reacción linfocitaria mixta (MLR) ; y

(b) seleccionar dicha pluralidad de células madre de la placenta si dicha pluralidad de células madre de la placenta inhibe de forma detectable la proliferación de linfocitos T CD4+ o CD8+ estimulada por linfocitos B que presentan antígenos del virus Epstein-Barr, en donde dichas células madre de la placenta se adhieren a un sustrato; en donde dichas células madre de la placenta no son trofoblastos; y en donde al menos 80% de dichas células madre

expresan CD200 y HLA-G; expresan CD73, CD105 y CD200; expresan CD200 y OCT-4; o expresan CD73, CD105 y HLA-G.

10. El método según la reivindicación 9, en donde dichas células madre de la placenta se obtienen a partir del amnios o amnios y corion.

11. El método según la reivindicación 9, en donde dichas células madre de la placenta inhiben la proliferación de linfocitos T CD4+ o CD8+ en al menos un 50%, en al menos un 75%, en al menos un 90% o en al menos un 95% en comparación con una cantidad de proliferación de linfocitos T en ausencia de dichas células madre de la placenta.

12. El método según la reivindicación 9, en donde dichas células madre de la placenta inhiben de forma detectable una actividad de las células citotóxicas naturales (NK) .

13. Una población aislada de células madre de la placenta producida según el método de la reivindicación 9.

14. Una población aislada de células madre de la placenta, en donde dichas células madre de la placenta no son trofoblastos, en donde al menos 80% de dichas células madre de la placenta expresan CD200 y HLA-G; 5 expresan CD73, CD105 y CD200; expresan CD200 y OCT-4; o expresan CD73, CD105 y HLA-G, en donde dichas células madre de la placenta inhiben de forma detectable la proliferación de linfocitos T estimulada por linfocitos B que presentan antígenos del virus Epstein-Barr.

15. La población aislada de células madre de la placenta según la reivindicación 14, en donde dicho al menos 80% de dichas células madre de la placenta son OCT-4+.

16. La población aislada de células madre de la placenta según la reivindicación 14, en donde dicho al menos 80% de dichas células madre de la placenta expresan CD73, CD105 y CD200.

17. La población aislada de células madre de la placenta según la reivindicación 14, en donde dicho al menos 15 80% de dichas células madre de la placenta expresan CD200 y OCT-4.

18. La población aislada de células madre de la placenta según la reivindicación 14, en donde dichas células madre de la placenta inhiben una respuesta inmune.

19. La población aislada de células madre de la placenta según la reivindicación 18, en donde dicha respuesta inmune es una respuesta inmune contra un aloinjerto.

20. La población aislada de células madre de la placenta según la reivindicación 18, en donde dicha respuesta inmune es una enfermedad autoinmune.

21. La población aislada de células madre de la placenta según la reivindicación 20, en donde dicha enfermedad autoinmune es diabetes.

22. La población aislada de células madre de la placenta según la reivindicación 20, en donde dicha 25 enfermedad autoinmune es lupus eritematoso.

23. La población aislada de células madre de la placenta según la reivindicación 20, en donde dicha enfermedad autoinmune es artritis reumatoide.

24. La población aislada de células madre de la placenta según la reivindicación 20, en donde dicha enfermedad autoinmune es esclerosis múltiple