Inhibidores de cinasa de la cadena ligera de miosina y su uso.

Un inhibidor de cinasa de la cadena ligera de miosina (MLCK) que tiene hasta 120 aminoácidos y quecomprende SEQ ID NO:

12 o SEQ ID NO: 13, en el que el 100% de los aminoácidos dentro de SEQ ID NO: 12 oSEQ ID NO: 13 son D-aminoácidos, en el que el inhibidor retiene sustancialmente la misma inhibición fisiológicade MLCK con respecto al mismo inhibidor que tiene todos los L-aminoácidos.

Inhibidores de cinasa de la cadena ligera de miosina y su uso.

REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS

La presente solicitud reivindica el beneficio de la solicitud provisional de EE.UU. nº 60/564.313 presentada el 21 de abril de 2004.

DECLARACIÓN REFERENTE A INVESTIGACIÓN FEDERALMENTE PATROCINADA

La presente invención se hizo con la ayuda del gobierno de los Estados Unidos concedida por el Instituto nacional de salud.

INTRODUCCIÓN

La presente invención se refiere a inhibidores de cinasa de la cadena ligera de miosina (“MLCK”) . La cinasa de la cadena ligera de miosina cataliza la fosforilación de la cadena ligera de miosina (MLC) en presencia de Ca2+/calmodulina y ATP, y regula la contracción de actomiosina, que participa en una amplia gama de actividades celulares, algunas de las cuales pueden participar en estados de enfermedad. Los inhibidores de MLCK pueden ser útiles en el tratamiento de o la mejora de tales estados de enfermedad.

LUKAS Y COL. (1999) J. MED. CHEM. 42, 910-919, describen la aplicación de un enfoque de descubrimiento basado en un mecanismo inhibidor intramolecular para una proteína cinasa regulada por calmodulina prototipo (CaM) con el fin de demostrar una prueba de principio para el desarrollo de inhibidores selectivos. El enfoque global usó análisis genómico funcional de cinasa de la cadena ligera de miosina (MLCK) para identificar secuencias autoinhibidoras cortas que carecen de actividad de reconocimiento de CaM, seguido de producción de bibliotecas de péptidos combinatorias recursivas y cribados de actividad comparativos.

ZOLOTAREVSKY Y COL., (2002) GASTROENTEROLOGY 123, 163-172, describe el uso MLC recombinante y cinasa MLC de Caco-2 en ensayos de cinasa. Monocapas de T84 y Caco-2 se trataron con Escherichia coli (EPEC) enteropatógena o factor de necrosis tumoral (TNF) -a e interferón (IFN) -y para inducir la disfunción de la barrera.

ADESSI Y COL. (2002) CURR. MED. CHEM. 9, 963-978, describen diferentes enfoques experimentales para transformar un péptido en un posible fármaco y proporcionan ejemplos de la utilidad de estas estrategias.

Chorev y Goodman (1995) TIBTECH 13, 438-445, describe peptidomiméticos de la cadena principal basados en inversión del enlace peptídico e inversión de quiralidad. También se describen las aplicaciones de estas alteraciones estructurales en, por ejemplo, el dímero VIH-D-proteasa y un opioide all-D-hexapéptido.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

En un aspecto, la presente invención proporciona un inhibidor de cinasa de la cadena ligera de miosina (MLCK) que tiene hasta 120 aminoácidos y que comprende SEQ ID NO: 12 o SEQ ID NO: 13, en el que el 100% de los aminoácidos dentro de SEQ ID NO: 12 o SEQ ID NO: 13 son D-aminoácidos, en el que el inhibidor retiene sustancialmente la misma inhibición fisiológica de MLCK con respecto al mismo inhibidor que tiene todos los Laminoácidos.

[0009] En algunas realizaciones, la secuencia de aminoácidos comprende SEQ ID NO: 12.

[0010] En algunas realizaciones, la secuencia de aminoácidos comprende SEQ ID NO: 13.

[0011] En algunas realizaciones, el inhibidor comprende además una secuencia que elige como diana el

transporte a membrana escindible. [0012] En algunas realizaciones, el inhibidor comprende además un vehículo diana. [0013] La invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende el inhibidor de la

invención. [0014] También se proporcionan procedimientos para inhibir cinasa de la cadena ligera de miosina en una célula in vitro que comprende cinasa de la cadena ligera de miosina que comprende poner en contacto la célula con el inhibidor de la invención en una cantidad eficaz para inhibir la actividad de cadena ligera de miosina cinasa en la

célula. [0015] En algunas realizaciones, la célula seleccionada es del grupo que consiste en una célula epitelial, una célula endotelial y una célula de músculo liso. En algunas realizaciones, la célula es una célula de mamífero.

La invención proporciona además la composición farmacéutica de la invención usada en un procedimiento para inhibir cinasa de la cadena ligera de miosina en una célula que comprende cinasa de la cadena ligera de miosina, comprendiendo el procedimiento poner en contacto la célula con dicha composición farmacéutica.

La invención aún proporciona además el inhibidor de la invención para su uso en un procedimiento para tratar un trastorno asociado a actividad de MLCK en un mamífero, comprendiendo el procedimiento administrar el inhibidor al mamífero que tiene el trastorno.

En algunas realizaciones, el trastorno es producido o agravado por contracción de actomiosina mediada por MLCK. [0019] En algunas realizaciones, el trastorno está seleccionado del grupo que consiste en una enfermedad intestinal, una enfermedad asociada a una falta vascular o endotelial, una enfermedad asociada a contracción de músculo liso, una enfermedad asociada a migración de células, una enfermedad asociada a angiogénesis, una enfermedad trombótica, y una enfermedad asociada a agregación de plaquetas.

En algunas realizaciones, la enfermedad intestinal está seleccionada del grupo que consiste en enfermedad de injerto frente a huésped, una enfermedad infecciosa, una enfermedad isquémica y una enfermedad inflamatoria.

En algunas realizaciones, el inhibidor inhibe migración de una célula. [0022] En algunas realizaciones, la célula es una célula inflamatoria. [0023] En algunas realizaciones, la célula es una célula de tumor. [0024] En algunas realizaciones, el inhibidor se administra a un mamífero que tiene un tumor, siendo el

inhibidor administrado en una cantidad eficaz para inhibir crecimiento tumoral. [0025] En algunas realizaciones, el trastorno es una enfermedad asociada a falta vascular o endotelial. [0026] En algunas realizaciones, la enfermedad está seleccionada del grupo que consiste en septicemia,

choque, anafilaxia y lesión pulmonar aguda. [0027] En algunas realizaciones, el trastorno es una enfermedad asociada a contracción de músculo liso. [0028] En algunas realizaciones, la enfermedad está seleccionada de asma y enfermedad hipertensiva. [0029] En algunas realizaciones se administra una cantidad de inhibidor eficaz para inhibir agregación de

plaquetas.

En algunas realizaciones se administra una cantidad del inhibidor eficaz para alterar cierre de heridas en bolsa de tabaco mediado por actomiosina de una célula epitelial. [0031] En algunas realizaciones, una cantidad del inhibidor se administra a un mamífero en necesidad de alterar la zona de oclusión epitelial, eficaz para alterar la permeabilidad de la zona de oclusión epitelial. [0032] En algunas realizaciones, la administración del inhibidor invierte una disfunción de la barrera epitelial. [0033] En algunas realizaciones, la disfunción de la barrera epitelial está asociada con una citocina pro

inflamatoria. [0034] En algunas realizaciones, el inhibidor es para administración por vía oral. [0035] En algunas realizaciones, la enfermedad intestinal es enfermedad de Crohn. [0036] En algunas realizaciones, la enfermedad intestinal es colitis ulcerosa

La invención proporciona el uso del inhibidor de la invención en la preparación de un medicamento para su uso en un procedimiento para inhibir crecimiento de un tumor, comprendiendo el procedimiento administrar dicho inhibidor al mamífero en una cantidad eficaz para inhibir el crecimiento del tumor.

La invención proporciona un procedimiento in vitro para inhibir el crecimiento de una bacteria que comprende administrar a la bacteria el inhibidor de la invención.

En algunas realizaciones, la bacteria es destruida tras la administración del inhibidor de la reivindicación 1.

La invención proporciona el inhibidor de la invención para su uso en el tratamiento de infección bacteriana.

En algunas realizaciones, la infección es una infección bacteriana enteropatógena, por ejemplo, una infección producida por una bacteria enteropatógena seleccionada de la lista que consiste en: E. coli enteropatógena (EPEC) , E. coli enterohemorrágica (EHEC) , Vibrio cholerae, Yersinia, Clostridium difficile y Shigella flexneri.

La invención proporciona un kit que comprende una composición farmacéutica que comprende el inhibidor de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones, el kit comprende instrucciones para su uso.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS REALIZACIONES PREFERIDAS

La cinasa de la cadena ligera de miosina (MLCK) regula la contracción de actomiosina, que participa en una variedad... [Seguir leyendo]

1. Un inhibidor de cinasa de la cadena ligera de miosina (MLCK) que tiene hasta 120 aminoácidos y que comprende SEQ ID NO: 12 o SEQ ID NO: 13, en el que el 100% de los aminoácidos dentro de SEQ ID NO: 12 o SEQ ID NO: 13 son D-aminoácidos, en el que el inhibidor retiene sustancialmente la misma inhibición fisiológica de MLCK con respecto al mismo inhibidor que tiene todos los L-aminoácidos.

2. El inhibidor de la reivindicación 1, en el que la secuencia de aminoácidos comprende SEQ ID NO: 12.

3. El inhibidor de la reivindicación 1, en el que la secuencia de aminoácidos comprende SEQ ID NO: 13.

4. El inhibidor de la reivindicación 1, que comprende además una secuencia que elige como diana el transporte a membrana escindible.

5. El inhibidor de la reivindicación 1, en el que el inhibidor comprende además un vehículo diana.

6. Una composición farmacéutica que comprende el inhibidor de la reivindicación 1 o la reivindicación 5 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

7. Un procedimiento para inhibir cinasa de la cadena ligera de miosina en una célula in vitro que comprende cinasa de la cadena ligera de miosina que comprende poner en contacto la célula con el inhibidor de la reivindicación 1 en una cantidad eficaz para inhibir la actividad de cadena ligera de miosina cinasa en la célula.

8. El procedimiento de la reivindicación 7, en el que la célula seleccionada es del grupo que consiste en una célula epitelial, una célula endotelial y una célula de músculo liso.

9. El procedimiento de la reivindicación 7, en el que la célula es una célula de mamífero.

10. La composición farmacéutica de la reivindicación 6 para su uso en un procedimiento para inhibir cinasa de la cadena ligera de miosina en una célula que comprende cinasa de la cadena ligera de miosina, comprendiendo el procedimiento poner en contacto la célula con dicha composición farmacéutica.

11. El inhibidor de la reivindicación 1 para su uso en un procedimiento para tratar un trastorno asociado a actividad de MLCK en un mamífero, comprendiendo el procedimiento administrar el inhibidor al mamífero que tiene el trastorno.

12. El inhibidor de la reivindicación 11 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 11, en el que el trastorno es producido o agravado por contracción de actomiosina mediada por MLCK.

13. El inhibidor de la reivindicación 12 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 12, en el que el trastorno está seleccionado del grupo que consiste en una enfermedad intestinal, una enfermedad asociada a una falta vascular o endotelial, una enfermedad asociada a contracción de músculo liso, una enfermedad asociada a migración de células, una enfermedad asociada a angiogénesis, una enfermedad trombótica y una enfermedad asociada a agregación de plaquetas.

14. El inhibidor de la reivindicación 13 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 13, en el que la enfermedad intestinal está seleccionada del grupo que consiste en enfermedad de injerto frente a huésped, una enfermedad infecciosa, una enfermedad isquémica y una enfermedad inflamatoria.

15. El inhibidor de la reivindicación 13 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 13, en el que el inhibidor inhibe la migración de una célula.

16. El inhibidor de la reivindicación 15 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 15, en el que la célula es una célula inflamatoria.

17. El inhibidor de la reivindicación 15 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 15, en el que la célula es una célula de tumor.

18. El inhibidor de la reivindicación 12 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 12, en el que el inhibidor se administra a un mamífero que tiene un tumor, siendo el inhibidor administrado en una cantidad eficaz para inhibir crecimiento tumoral.

19. El inhibidor de la reivindicación 13 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 13, en el que el trastorno es una enfermedad asociada a falta vascular o endotelial.

20. El inhibidor de la reivindicación 19 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 19, en el que la enfermedad está seleccionada del grupo que consiste en septicemia, choque, anafilaxia y lesión pulmonar aguda.

21. El inhibidor de la reivindicación 12 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 12, en el que el trastorno es una enfermedad asociada a contracción de músculo liso.

22. El inhibidor de la reivindicación 21 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 21, en el que la enfermedad está seleccionada de asma y enfermedad hipertensiva.

23. El inhibidor de la reivindicación 12 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 12, en el que se administra una cantidad de inhibidor eficaz para inhibir agregación de plaquetas.

24. El inhibidor de la reivindicación 12 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 12, en el que se administra una cantidad del inhibidor eficaz para alterar el cierre de heridas en bolsa de tabaco mediado por actomiosina de una célula epitelial.

25. El inhibidor de la reivindicación 12 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 12, en el que una cantidad del inhibidor se administra a un mamífero en necesidad de alterar la zona de oclusión epitelial, eficaz para alterar la permeabilidad de la zona de oclusión epitelial.

26. El inhibidor de la reivindicación 25 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 25, en el que la administración del inhibidor invierte una disfunción de la barrera epitelial.

27. El inhibidor de la reivindicación 26 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 26, en el que la disfunción de la barrera epitelial está asociada a una citocina pro-inflamatoria.

28. El inhibidor de las reivindicaciones 12, 15, 21 ó 23 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 12, 15, 21 ó 23, en el que el inhibidor es para administración por vía oral.

29. El inhibidor de la reivindicación 14 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 14, en el que la enfermedad intestinal es enfermedad de Crohn.

30. El inhibidor de la reivindicación 14 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 14, en el que la enfermedad intestinal es colitis ulcerosa

31. Uso de un inhibidor de la reivindicación 1 en la preparación de un medicamento para su uso en un procedimiento para inhibir crecimiento de un tumor, comprendiendo el procedimiento administrar dicho inhibidor al mamífero en una cantidad eficaz para inhibir el crecimiento del tumor.

32. Un procedimiento in vitro para inhibir el crecimiento de una bacteria que comprende administrar a la bacteria el inhibidor de la reivindicación 1.

33. El procedimiento de la reivindicación 32, en el que la bacteria es destruida tras la administración del inhibidor de la reivindicación 1.

34. El inhibidor de la reivindicación 1 para su uso en el tratamiento de infección bacteriana.

35. El inhibidor de la reivindicación 34 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 34 para su uso en el tratamiento de infección por bacterias enteropatógenas.

36. El inhibidor de la reivindicación 35 para su uso en el procedimiento de tratamiento de la reivindicación 35, en el que la bacteria enteropatógena está seleccionada de la lista que consiste en: E. coli enteropatógena (EPEC) , E. coli enterohemorrágica (EHEC) , Vibrio cholerae, Yersinia, Clostridium difficile y Shigella flexneri.

37. Un kit que comprende:

38. El kit de la reivindicación 37 que comprende además instrucciones para su uso.

una composición farmacéutica que comprende el inhibidor de la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.