Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas y sus utilizaciones.

Fosfotriesterasas (PTE) hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa derivadas de las PTEhipertermófilas que responden a la secuencia consenso SEC ID no 1,

y que comprenden una por lo menos de lascuatro mutaciones siguientes:

sustitución de la tirosina Y en la posición 98,

sustitución de la tirosina Y en la posición 100,

sustitución de la arginina R en la posición 224,

sustitución de la cisteína C en la posición 259,

de la SEC ID no 1 por cualquier otro aminoácido natural o no,

poseyendo dichas fosfotriesterasas (PTE) hipertermófilas mutadas una actividad lactonasa cuya actividad essuperior a la de las fosfotriesterasas (PTE) hipertermófilas no mutadas de las cuales se derivan.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/FR2008/000596.

Solicitante: Université de Lorraine.

Nacionalidad solicitante: Francia.

Dirección: 34 Cours Léopold CS 25233 54052 Nancy Cedex FRANCIA.

Inventor/es: CHABRIERE,ERIC, ELIAS,MICKAEL.

Fecha de Publicación: 20 de Noviembre de 2013.

Clasificación Internacional de Patentes:

A61K38/46 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 38/00 Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00). › Hidrolasas (3).
A61L15/00 A61 […] › A61L PROCEDIMIENTOS O APARATOS PARA ESTERILIZAR MATERIALES U OBJECTOS EN GENERAL; DESINFECCION, ESTERILIZACION O DESODORIZACION DEL AIRE; ASPECTOS QUIMICOS DE VENDAS, APOSITOS, COMPRESAS ABSORBENTES O ARTICULOS QUIRURGICOS; MATERIALES PARA VENDAS, APOSITOS, COMPRESAS ABSORBENTES O ARTICULOS QUIRURGICOS (conservación de cuerpos o desinfección caracterizada por los agentes empleados A01N; conservación, p. ej. esterilización de alimentos o productos alimenticios A23; preparaciones de uso medico, dental o para el aseo A61K). › Aspectos químicos de vendas, apósitos o compresas absorbentes o utilización de materiales para su fabricación (para vendas líquidas A61L 26/00; apósitos radiactivos A61M 36/14).
A61P39/02 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES. › A61P 39/00 Protectores generales o productos antitóxicos. › Antídotos.
C02F101/30 QUIMICA; METALURGIA. › C02 TRATAMIENTO DEL AGUA, AGUA RESIDUAL, DE ALCANTARILLA O FANGOS. › C02F TRATAMIENTO DEL AGUA, AGUA RESIDUAL, DE ALCANTARILLA O FANGOS (procedimientos para transformar las sustancias químicas nocivas en inocuas o menos perjudiciales, efectuando un cambio químico en las sustancias A62D 3/00; separación, tanques de sedimentación o dispositivos de filtro B01D; disposiciones relativas a las instalaciones para el tratamiento del agua, agua residual o de alcantarilla en los buques, p. ej. para producir agua dulce, B63J; adición al agua de sustancias para impedir la corrosión C23F; tratamiento de líquidos contaminados por radiactividad G21F 9/04). › C02F 101/00 Naturaleza del contaminante. › Compuestos orgánicos.
C02F3/00 C02F […] › Tratamiento biológico del agua, agua residual o de alcantarilla.
C07K14/195 C […] › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de origen bacteriano.
C09K3/32 C […] › C09 COLORANTES; PINTURAS; PULIMENTOS; RESINAS NATURALES; ADHESIVOS; COMPOSICIONES NO PREVISTAS EN OTRO LUGAR; APLICACIONES DE LOS MATERIALES NO PREVISTAS EN OTRO LUGAR. › C09K SUSTANCIAS PARA APLICACIONES NO PREVISTAS EN OTRO LUGAR; APLICACIONES DE SUSTANCIAS NO PREVISTAS EN OTRO LUGAR. › C09K 3/00 Sustancias no cubiertas en otro lugar. › para tratar los contaminantes líquidos, p. ej. petróleo, gasolina o grasas (procedimientos para transformar las sustancias químicas nocivas en inocuas o menos perjudiciales, efectuando un cambio químico en las sustancias A62D 3/00).
C12N15/55 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Hidrolasas (3).
C12N15/68 C12N 15/00 […] › Estabilización del vector.
C12N9/14 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Hidrolasas (3.).

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Fragmento de la descripción:

Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas y sus utilizaciones.

La presente descripción tiene por objeto unas fosfotriesterasas (PTE) hipertermófilas mutadas, y sus utilizaciones como bio-depuradores en el marco de la descontaminación de las superficies de los materiales, de la piel o de las mucosas, contaminados por unos compuestos organosfoforados, o en el marco de la preparación de prendas, guantes, cartuchos, captadores de organofosforados, o en el marco de la preparación de medicamentos utilizables en el marco de la prevención o del tratamiento de una contaminación externa o de una intoxicación interna por ingestión o inhalación por unos compuestos organofosforados, o en el marco de la descontaminación de las aguas contaminadas por unos compuestos organofosforados, así como las secuencias nucleotídicas que codifican para estas PTE hipertermófilas mutadas y su utilización en el marco de la preparación de bacterias que expresan estas PTE, en particular en su superficie.

ORGANOFOSFORADOS

Los organofosforados (OP) son unas moléculas muy tóxicas, que componen algunos agentes químicos de guerra y pesticidas. Algunos de estos compuestos, como el paraoxón o el paratión se utilizan por su poder insecticida. En efecto, son fáciles de fabricar y están ampliamente extendidos en los cultivos de los países en vías de desarrollo. Desafortunadamente, estas fumigaciones masivas son responsables de muchísimas intoxicaciones en el mundo (200000 fallecimientos por año según la OMS) .

Los OP son, para la mayoría de los productos, inestables ya que se hidrolizan rápidamente. No persisten por lo tanto en el medio ambiente en su forma tóxica. Por el contrario, ciertos productos desarrollados por el ejército son mucho más estables y peligrosos, como el sarín, el somán, el tabún o el VX. Estos agentes químicos de guerra interesan actualmente cada vez más a los terroristas. El sarín en particular ha sido utilizado durante atentados perpetrados por la secta Aum, en 1994 en Matsumoto y en 1995 en el metro de Tokyo. Frente a estas amenazas cada vez mayores, el estudio y sobre todo el desarrollo de medios efectivos para la descontaminación están más que nunca de actualidad.

Los organofosforados actúan por absorción percutánea y por inhalación. Son unos líquidos muy frecuentemente incoloros e inodoros. La intoxicación por uno de estos agentes se manifiesta rápidamente (de menos de 1 minuto a 60 minutos) por unos síntomas característicos y extremadamente graves (hasta la muerte del sujeto intoxicado) . Estas moléculas, una vez ingeridas en el organismo humano, desempeñan el papel de neurotóxico. Atacan a una enzima muy importante para el buen funcionamiento del sistema nervioso: la acetilcolinesterasa. Esta enzima es esencial en la transmisión del mensaje nervioso. En efecto, durante el paso del influjo de neurona a neurona, la información eléctrica se transforma en mensaje químico en la hendidura sináptica. Las moléculas así liberadas se denominan neurotransmisor (por ejemplo: la acetilcolina) . Una vez liberada en la hendidura, la acetilcolina se fija mayoritariamente sobre los receptores de la neurona post-sináptica con el fin de asegurar la continuidad del mensaje nervioso. Las moléculas fijadas y no fijadas deben después ser re-captadas o degradadas, permitiendo así la regulación de la intensidad y de la duración del influjo. El papel de las acetilcolinesterasas es por lo tanto asegurar la interrupción del mensaje nervioso, degradando la acetilcolina en la hendidura sináptica.

Los OP reaccionan rápidamente con la serina del sitio activo de las acetilcolinesterasas, lo cual forma una fosfoenzima inactiva. El intermedio covalente así formado, la enzima ha perdido cualquier actividad. Estos compuestos constituyen por lo tanto unos inhibidores irreversibles de estas enzimas. La acetilcolina ya no se degrada entonces en la hendidura sináptica y se acumula.

Para prevenir estos peligros, están previstos unos protocolos de prevención y de descontaminación. El material, hoy día, se descontamina con la ayuda de sosa (NaOH) muy concentrada. Se han concebido unos trajes de protección y unas máscaras para evitar cualquier contacto con estos agentes. En caso de intoxicación humana, es imposible, por supuesto, un tratamiento con sosa. La víctima se descontamina simplemente con la ayuda de una solución de hipoclorita (lejía) y se lava abundantemente con agua y jabón. Unos guantes de Foulon permiten también absorber el líquido sobre la piel de la víctima. Para los casos de inhalación (percutánea o no) de neurotóxicos, existe un pretratamiento con pirostigmina, que puede ser tomado en tabletas. Esta molécula bloquea reversiblemente las acetilcolinesterasas e impide que los OP se fijen en las mismas. La vida del individuo está así preservada. Por otra parte, existe también un tratamiento sintomático de urgencia en forma de jeringas auto-inyectantes que contienen atropina (anticolinérgico) , diazepam (anticonvulsivo) y pralidoxima (reactivador de las acetilcolinesterasas inhibidas) . La inyección, para ser eficaz, se debe llevar a cabo sin embargo inmediatamente después de la intoxicación. Esto no impide no obstante la aparición de secuelas incapacitantes.

Aunque desde hace veinte años se han llevado a cabo unos progresos en la profilaxis con las técnicas citadas anteriormente, los tratamientos de estas intoxicaciones y las protecciones existentes siguen siendo sin embargo insatisfactorios. Todas las pistas farmacológicas exploradas parecen desafortunadamente conducir a un fracaso. Sin embargo, la aparición del concepto de depurador biocatalítico o "bioscavenger" ha reanimado la esperanza de un arsenal terapéutico más efectivo. En efecto, es particularmente interesante la idea de utilizar unas enzimas capaces

de atrapar y/o degradar los OP sobre la piel y en la sangre antes de que alcancen sus objetivos biológicos neuromusculares y centrales.

La butirilcolinesterasa (BuChe) humana es una enzima parecida a la acetilcolinesterasa cuyo papel fisiológico no está claramente establecido. A pesar de ello, representa una gran esperanza ya que atrapa en la vía sanguínea los organofosforados antes de que alcancen sus objetivos (Raveh et al., 1993) . Además, la enzima natural inyectada al ser humano es particularmente estable, con una vida media de 11 días. Sin embargo, este atrapador natural está en una cantidad demasiado baja en la sangre para protegernos naturalmente de los peligros de los OP. Actúa realmente como fijador estequiométrico de los OP: una enzima puede neutralizar sólo una molécula. Un cálculo rápido permite mostrar que se necesitan cantidades enormes de enzima para obtener un tratamiento eficaz. Los medios a utilizar parecen entonces desproporcionados, y corresponderían a una dosis de 200 mg de proteína por inyección y por soldado. Sin embargo, y a falta de algo mejor, la BuChe representa un proyecto concreto, especialmente para la armada americana que, a finales de 2006, propuso poner un millón de dosis a disposición para sus soldados. La producción de la enzima está asegurada por ingeniería genética gracias a cabras transgénicas. La necesidad de dicha cantidad de proteína resulta sin embargo muy caro, y a pesar de los medios utilizados, esta empresa constituye un reto tecnológico principal. Existen algunas variantes de BuChe que tienen una actividad OPhidrolásica pero su catálisis es muy lenta en comparación con unas enzimas capaces de hidrolizar naturalmente los OP.

La paraoxonasa humana (HPON1) es una OPhidrolasa que presenta numerosas ventajas. Su papel protector contra la intoxicación OP se ha establecido en el ratón. Además, su origen humano debería evitar que las inyecciones múltiples de los protocolos terapéuticos induzcan una respuesta inmune. HPON1 es una proteína del plasma asociada principalmente a los HDL. La estructura tridimensional de la enzima natural no está resuelta, sólo la estructura de una quimera entre PON1 humano, de ratón, de rata y de conejo (Harel et al., 2004) . Sin embargo, esta estructura no ha permitido obtener unos mutantes más activos. Además, por ahora es imposible una utilización farmacológica. En efecto, todas las tentativas para obtener una gran cantidad de paraoxonasa humana activada han fracasado por razones técnicas.

Se han aislado otras OP-hidrolasas prometedoras. Se trata de enzimas de la familia de las fosfotriesterasas (PTE) . Estas enzimas constituyen verdaderos depuradores catalíticos descubiertos en las bacterias del suelo: en particular Pseudomonas diminuta y Flavobacterium sp. (Munnecke, 1976) para el gen opd, y Agrobacterium radiobacter para el gen opdA (Jackson et al., 2005) . Las PTE son unas enzimas extremadamente prometedoras para el desarrollo de un bioscavenger... [Seguir leyendo]

Reivindicaciones:

1. Fosfotriesterasas (PTE) hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa derivadas de las PTE hipertermófilas que responden a la secuencia consenso SEC ID no 1, y que comprenden una por lo menos de las 5 cuatro mutaciones siguientes:

sustitución de la tirosina Y en la posición 98, sustitución de la tirosina Y en la posición 100, sustitución de la arginina R en la posición 224, sustitución de la cisteína C en la posición 259,

de la SEC ID no 1 por cualquier otro aminoácido natural o no,

poseyendo dichas fosfotriesterasas (PTE) hipertermófilas mutadas una actividad lactonasa cuya actividad es 15 superior a la de las fosfotriesterasas (PTE) hipertermófilas no mutadas de las cuales se derivan.

2. Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa según la reivindicación 1, derivadas de la PTE hipertermófila de Sulfolobus solfataricus que corresponde a la secuencia SEC ID no 3, o de la PTE hipertermófila de Sulfolobus acidocaldarius que corresponde a la secuencia SEC ID no 5, perteneciendo dichas secuencias SEC ID no 3 y SEC ID no 5 a la secuencia consenso SEC ID no 1, faltando en la SEC ID no 3 el aminoácido en posición 2 en la SEC ID no 1.

3. Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa según la reivindicación 1 o 2, que comprenden por lo menos las cuatro mutaciones siguientes: 25 sustitución de la tirosina Y en la posición 98, sustitución de la tirosina Y en la posición 100, sustitución de la arginina R en la posición 224, sustitución de la cisteína C en la posición 259,

de la SEC ID no 1 por cualquier otro aminoácido natural o no.

4. Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizadas porque comprenden asimismo una por lo menos de las mutaciones siguientes: 35 sustitución de la valina V en la posición 28, sustitución de la prolina P en la posición 68, sustitución de la treonina T en la posición 69, sustitución de la leucina L en la posición 73, sustitución del aspartato D en la posición 142, sustitución de la glicina G en la posición 226, sustitución de la leucina L en la posición 227, sustitución de la fenilalanina F en la posición 230, sustitución del triptófano W en la posición 264, 45 sustitución del triptófano W en la posición 279,

de la SEC ID no 1 por cualquier otro aminoácido natural o no.

5. Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizadas porque comprenden las cinco mutaciones siguientes:

sustitución de la valina V en la posición 28, sustitución de la leucina L en la posición 73, sustitución del aspartato D en la posición 142,

sustitución de la glicina G en la posición 226, sustitución de la leucina L en la posición 227,

de la SEC ID no 1 por cualquier otro aminoácido natural o no.

6. Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizadas porque comprenden las cinco mutaciones siguientes:

sustitución de la prolina P en la posición 68, sustitución de la treonina T en la posición 69,

sustitución de la fenilalanina F en la posición 230, sustitución del triptófano W en la posición 264, sustitución del triptófano W en la posición 279,

de la SEC ID no 1 por cualquier otro aminoácido natural o no.

7. Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa según una de las reivindicaciones 1 a 4, derivadas de las PTE hipertermófilas que responden a la secuencia consenso SEC ID no 1, caracterizadas porque comprenden por lo menos una de las cuatro mutaciones siguientes:

sustitución de la tirosina Y en la posición 98 por un triptófano W,

sustitución de la tirosina Y en la posición 100 por una fenilalanina F, sustitución de La arginina R en la posición 224 por una histidina H, sustitución de la cisteína C en la posición 259 por una leucina L,

y, llegado el caso, una por lo menos de las mutaciones siguientes:

sustitución del aspartato D en la posición 142 por una treonina T, sustitución de la glicina G en la posición 226 por una prolina P, sustitución de la leucina L en la posición 227 por una histidina H, sustitución de la fenilalanina F en la posición 230 por una serina S, sustitución del triptófano W en la posición 264 por una alanina A,

sustitución del triptófano W en la posición 279 por una isoleucina I.

8. Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa según una de las reivindicaciones 1 a 7, derivadas de la PTE hipertermófila de Sulfolobus solfataricus que corresponde a la secuencia SEC ID no 3, y que comprenden por lo menos una de las cuatro mutaciones siguientes:

sustitución de la tirosina Y en la posición 97, sustitución de la tirosina Y en la posición 99, sustitución de la arginina R en la posición 223, sustitución de la cisteína C en la posición 258,

de la SEC ID no 3 por cualquier otro aminoácido natural o no.

9. Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa según la reivindicación 8, que comprenden por lo menos las cuatro mutaciones siguientes:

de la SEC ID no 3 por cualquier otro aminoácido natural o no.

10. Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa según la reivindicación 8 o 9, caracterizadas porque comprenden asimismo una por lo menos de las mutaciones siguientes:

sustitución de la valina V en la posición 27, sustitución de la prolina P en la posición 67, sustitución de la treonina T en la posición 68, sustitución de la leucina L en la posición 72,

sustitución del aspartato D en la posición 141, sustitución de la glicina G en la posición 225, sustitución de la leucina L en la posición 226, sustitución de la fenilalanina F en la posición 229, sustitución del triptófano W en la posición 263,

sustitución del triptófano W en la posición 278,

de la SEC ID no 3 por cualquier otro aminoácido natural o no.

11. Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa según una de las reivindicaciones 65 8 a 10, caracterizadas porque comprenden las cinco mutaciones siguientes:

sustitución de la valina V en la posición 27, sustitución de la leucina L en la posición 72, sustitución del aspartato D en la posición 141, sustitución de la glicina G en la posición 225, sustitución de la leucina L en la posición 226,

de SEC ID no 3 por cualquier otro aminoácido natural o no.

12. Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa según una de las reivindicaciones 8 a 11, caracterizadas porque comprenden las cinco mutaciones siguientes:

sustitución de la prolina P en la posición 67, sustitución de la treonina T en la posición 68, sustitución de la fenilalanina F en la posición 229, sustitución del triptófano W en la posición 263, sustitución del triptófano W en la posición 278,

de la SEC ID no 3 por cualquier otro aminoácido natural o no.

13. Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa según una de las reivindicaciones 8 a 12, caracterizadas porque comprenden por lo menos una de las cuatro mutaciones siguientes:

sustitución de la tirosina Y en la posición 97 por un triptófano W, sustitución de la tirosina Y en la posición 99 por una fenilalanina F, sustitución de la arginina R en la posición 223 por una histidina H, sustitución de la cisteína C en la posición 258 por una leucina L,

y, llegado el caso, una por lo menos de las mutaciones siguientes:

sustitución de la valina V en la posición 27 por una alanina A, sustitución de la prolina P en la posición 67 por una valina V, sustitución de la treonina T en la posición 68 por una serina S, sustitución de la leucina L en la posición 72 por una isoleucina I, sustitución del aspartato D en la posición 141 por una treonina T, sustitución de la glicina G en la posición 225 por una prolina P, sustitución de la leucina L en la posición 226 por una histidina H, sustitución de la fenilalanina F en la posición 229 por una serina S, sustitución del triptófano W en la posición 263 por una alanina A, sustitución del triptófano W en la posición 278 por una isoleucina I.

14. Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa según una de las reivindicaciones 8 a 13, caracterizadas porque corresponden a las secuencias siguientes:

SEC ID no 7 que corresponde a la secuencia SEC ID no 3 que comprende las cuatro mutaciones siguientes:

SEC ID no 9 que corresponde a la secuencia SEC ID no 7 que comprende además las cinco mutaciones siguientes:

sustitución de la valina V en la posición 27 por una alanina A, sustitución de la leucina L en la posición 72 por una isoleucina I, sustitución del aspartato D en la posición 141 por una treonina T, sustitución de la glicina G en la posición 225 por una prolina P, sustitución de la leucina L en la posición 226 por una histidina H,

SEC ID no 11 que corresponde a la secuencia SEC ID no 9 que comprende además las cinco mutaciones siguientes:

sustitución de la prolina P en la posición 67 por una valina V, sustitución de la treonina T en la posición 68 por una serina S, sustitución de la fenilalanina F en la posición 229 por una serina S, sustitución del triptófano W en la posición 263 por una alanina A,

sustitución del triptófano W en la posición 278 por una isoleucina I.

15. Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa según una de las reivindicaciones 8 a 14, caracterizadas porque comprenden por lo menos una mutación que corresponde a la sustitución de por lo menos uno de los aminoácidos de los pares de aminoácidos siguientes, cuyas posiciones en la SEC ID no 3 están indicadas a continuación por otro aminoácido natural o no: 2R/314S, 14K/12E, 26R/75D, 26R/42E, 33R/42E, 33R/45E, 55R/52E, 55R/285E, 74R/121D, 81K/42E, 81K/43D, 84K/80E, 109R/113E, 123K/162E, 147K/148D, 151K/148D, 154R/150E, 154R/187E, 154R/188E, 161K/188E, 183R/150E, 183R/187E, 183R/180E, 210K/245D, 215K/214D, 223R/256D, 223R/202D, 234K/204D, 235R/202D, 241R/245D, 245D/244K, 250K/249D, 277R/286D, 292K/298E, 310K/307E.

16. Fosfotriesterasas hipertermófilas mutadas que poseen una actividad lactonasa según una de las reivindicaciones 1 a 7, derivadas de la PTE hipertermófila de Sulfolobus acidocaldarius que corresponde a la secuencia SEC ID no 5, y que comprenden por lo menos una de las cuatro mutaciones siguientes: