Método para diagnosticar enfermedades infecciosas midiendo el nivel de TREM-1 soluble en una muestra.

Un método para diagnosticar una enfermedad de origen bacteriano o fúngico en un sujeto,

en donde dichaenfermedad es neumonía o septicemia, comprendiendo dicho método la etapa de medir el nivel de sTREM-1(forma soluble del receptor desencadenante expresado en células-1 mieloides) en una muestra biológica delíquido corporal obtenida de dicho sujeto, comparar el nivel medido de sTREM-1 en la muestra con un nivelmedio en una población de control que no padece dicha enfermedad de origen bacteriano o fúngico, siendoindicativos los niveles elevados de sTREM-1 comparados con dicho control de la presencia o extensión dedicha enfermedad de origen bacteriano o fúngico en el paciente, en donde en donde dicha etapa de medir elnivel de sTREM-1 comprende a su vez las etapas de:

(a) poner en contacto dicha muestra biológica con un anticuerpo capaz de unirse específicamente asTREM-1; y

(b) detectar el nivel de sTREM-1 presente en la muestra observando el nivel de unión entre dichoanticuerpo y sTREM-1.

Método para diagnosticar enfermedades infecciosas midiendo el nivel de TREM-1 soluble en una muestra.

Esta invención se refiere en general al campo de la inmunología. Más particularmente, la presente invención se refiere a la inflamación y al uso de marcadores que permiten el diagnóstico precoz de enfermedades infecciosas (por ejemplo, de origen bacteriano o fúngico) y el seguimiento de los pacientes infestados durante el tratamiento farmacológico. Estos marcadores tienen aplicaciones particulares en el diagnóstico de neumonía y septicemia.

El diagnóstico y tratamiento de neumonía infecciosa en pacientes con ventilación (respiración) mecánica sigue siendo un reto para los profesionales clínicos. Frecuentemente se realiza un diagnóstico clínico probable de neumonía cuando un paciente desarrolla un nuevo infiltrado radiográfico asociado con fiebre, leucocitosis y secreciones traqueales purulentas y cuando se aíslan microorganismos de las vías respiratorias. Desafortunadamente muchos procesos no infecciosos pueden ser responsables de fiebre y nuevos infiltrados pulmonares en pacientes con ventilación mecánica y entonces los enfoques clínicos conducen a una sobreestimación de la incidencia de neumonía. Además, cualquiera que sea el método de diagnóstico microbiológico elegido, requiere más trabajo de laboratorio con plazos inevitables de 24 a 48 horas antes de obtener resultados de cultivos microbiológicos cuantitativos definitivos. Mientras tanto, los profesionales clínicos frecuentemente se sientes incómodos sobre el diagnóstico y, en muchos casos, se administran antibióticos innecesarios mientras se esperan los resultados del laboratorio. Por lo tanto, se han estudiado previamente muchos marcadores biológicos para mejorar la rapidez y realización del método de diagnóstico pero los resultados han sido "desalentadores".

En los Ejemplos de la presente memoria los inventores describimos un ensayo de detección rápido de la forma soluble del receptor TREM-1 humano (sTREM-1) en el líquido broncoalveolar de pacientes con ventilación mecánica para diagnosticar con precisión la neumonía bacteriana o fúngica.

Muchos procesos no infecciosos conducen a fiebre y a nuevos infiltrados pulmonares en los pacientes con ventilación mecánica, haciendo que el diagnóstico de la neumonía (y especialmente de la neumonía asociada a respiradores) sea muy desafiante. Los signos sistémicos de infección, tales como fiebre, taquicardia, y leucocitosis, son hallazgos no específicos y pueden ser causados por cualquier estado que libere citoquinas. Pugin et al. (Am. Rev. Respir. Dis. 1991;143:1121-9) combinaron la temperatura corporal, el recuento de leucocitos, el volumen y aspecto de las secreciones traqueales, la relación entre la presión parcial del oxígeno arterial y la fracción de oxígeno inspirado (PaO2/FiO2) , examen por rayos X del pecho, y cultivos de aspirados traqueales en una puntuación clínica de infección pulmonar (abreviadamente CPIS por la expresión inglesa Clinical Pulmonar y Infection Score) y describieron que una puntuación >6 estaba asociada con una alta probabilidad de neumonía. Esto fue confirmado por el estudio de los inventores puesto que una puntuación de infección pulmonar clínica >6 fue el mejor predictor clínico de neumonía con una relación de probabilidad de 2, 98. Sin embargo, sigue sin ser confirmada la precisión del diagnóstico de esta puntuación.

En términos de tomar decisiones clínicas en pacientes en los que se sospecha neumonía, el principal problema con el método de diagnóstico microbiológico elegido, que aún es materia de debate, es que requiere cultivo de muestras, lo que implica esperar al menos 24-48 horas después de la toma de muestras. Durante este plazo, la incertidumbre del profesional clínico hacia el diagnóstico del paciente frecuentemente conduce a la prescripción de antibióticos innecesarios. Sin embargo, el uso de antibióticos empíricos de amplio espectro en pacientes sin infección es potencialmente perjudicial, facilitando la colonización y superinfección con bacterias multirresistentes y se ha demostrado que está correlacionado con aumentos de las estancias hospitalarias y por tanto con mayores costes hospitalarios. Además, el uso excesivo de antibióticos en dichos pacientes críticamente enfermos retrasa el diagnóstico y tratamiento adecuados de la verdadera causa de la fiebre y el infiltrado pulmonar.

Se han estudiado muchos marcadores biológicos con la esperanza de mejorar la rapidez y prestaciones de los métodos de diagnóstico. Entre ellos, la proteína C reactiva del suero y la procalcitonina han sido decepcionantes en pacientes críticamente enfermos. Se han obtenido resultados similares en estudios de los inventores con diferencias no significativas entre pacientes infectados pulmonarmente y pacientes no infectados.

Cuando son superados los mecanismos anatómicos y mecánicos de defensa que impiden que los microorganismos alcancen los alveolos se desarrolla una respuesta compleja del hospedante. Esta respuesta comprende la activación, por los productos microbianos, de los macrófagos alveolares que localmente liberan múltiples mediadores endógenos. Entre estos mediadores, el factor de necrosis tumoral-a (TNFa) , la interleuquina-1º (IL-1º) y otras citoquinas han demostrado que están aumentadas en diversos tipos de problemas infecciosos pulmonares. Sin embargo, de acuerdo con otros estudios, (por ejemplo véase Monton C et al. Crit. Care Med. 1999; 9:1745-53) , los inventores fuimos incapaces de determinar el nivel umbral discriminatorio preciso de dichos mediadores para el diagnóstico de neumonía.

Los inventores, usando una técnica de inmunotransferencia fácil de realizar demuestran en la presente invención que una forma soluble de TREM-1 (sTREM-1) se libera localmente en líquido de lavado broncoalveolar de pacientes que sufren neumonía con una sensibilidad de al menos 98 por ciento. En llamativo contraste, el sTREM-1 se detectó solamente en 6 de 64 pacientes sin neumonía. Los niveles de líquido de lavado broncoalveolar de sTREM-1 no estaban correlacionados con ninguno de los parámetros clínicos o biológicos analizados y mantenidos como parámetro independiente de alta especificidad. En un análisis de regresión logística múltiple, la presencia de sTREM-1 en el líquido de lavado broncoalveolar demostró ser el mejor predictor de neumonía con una relación de probabilidad tan alta como 41, 52. La presencia de sTREM-1 por sí mismo fue más precisa que cualesquiera hallazgos clínicos o valores de laboratorio en identificar la existencia de neumonía bacteriana o fúngica. Por tanto, la rápida detección de sTREM-1 en líquido de lavado broncoalveolar es útil en establecer o excluir el diagnóstico de neumonía bacteriana o fúngica.

La septicemia es una causa común de morbilidad y mortalidad en las unidades de cuidados intensivos (UCI) . Los signos clínicos y de laboratorio de la inflamación sistémica incluyendo cambios en la temperatura corporal, taquicardia o leucocitosis no son suficientemente sensibles ni específicos para el diagnóstico de la septicemia y pueden ser mal interpretados debido a que pacientes críticamente enfermos presentan frecuentemente un síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (abreviadamente en lo sucesivo SIRS por la expresión inglesa Systemic

Inflammator y Response Syndrome) sin infección. Este problema es de importancia fundamental debido al hecho de que la terapia y el desenlace difieren grandemente entre los pacientes con septicemia y los pacientes sin septicemia. Además, el amplio uso de antibióticos para tales pacientes es probable que aumente la resistencia a los antibióticos, la toxicidad y los costes. Por tanto, hay hasta el presente una necesidad no satisfecha de herramientas clínicas y de laboratorio que permitan distinguir entre SIRS y septicemia. Entre los marcadores potencialmente útiles de la

septicemia, se ha sugerido la procalcitonina (en lo sucesivo abreviadamente a veces PCT) como el más prometedor. Se ha postulado que los niveles de procalcitonina son superiores a las variables clínicas o ensayos de laboratorio usados generalmente, tales como los niveles de la proteína C-reactiva (abreviadamente en lo sucesivo CRP por la expresión inglesa C-Reactive Protein) o el recuento de leucocitos, e incluso los correlacionan con la gravedad de la invasión microbiana. Sin embargo, diversos investigadores han cuestionado la precisión del diagnóstico y pronóstico

de medidas rutinarias de la PCT, describiendo resultados inconsistentes... [Seguir leyendo]

1. Un método para diagnosticar una enfermedad de origen bacteriano o fúngico en un sujeto, en donde dicha enfermedad es neumonía o septicemia, comprendiendo dicho método la etapa de medir el nivel de sTREM-1 (forma soluble del receptor desencadenante expresado en células-1 mieloides) en una muestra biológica de líquido corporal obtenida de dicho sujeto, comparar el nivel medido de sTREM-1 en la muestra con un nivel medio en una población de control que no padece dicha enfermedad de origen bacteriano o fúngico, siendo indicativos los niveles elevados de sTREM-1 comparados con dicho control de la presencia o extensión de dicha enfermedad de origen bacteriano o fúngico en el paciente, en donde en donde dicha etapa de medir el nivel de sTREM-1 comprende a su vez las etapas de:

(a) poner en contacto dicha muestra biológica con un anticuerpo capaz de unirse específicamente a sTREM-1; y

(b) detectar el nivel de sTREM-1 presente en la muestra observando el nivel de unión entre dicho anticuerpo y sTREM-1.

2. El método de la reivindicación 1, que comprende además las etapas adicionales de medir el nivel de sTREM1 en una segunda o más muestras del paciente, obteniéndose las muestras primera y segunda o más muestras en diferentes tiempos; y comparar los niveles de las muestras para indicar la evolución o remisión de la enfermedad de origen bacteriano o fúngico.

3. El método de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde dicha enfermedad de origen bacteriano o fúngico es neumonía.

4. El método de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde dicha enfermedad de origen bacteriano o fúngico es septicemia.

5. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde la muestra se selecciona del grupo que consiste en sangre completa, suero sanguíneo, plasma sanguíneo, orina y líquido de lavado broncoalveolar.

6. El método de la reivindicación 5, en donde la muestra es líquido de lavado broncoalveolar.

7. El método de la reivindicación 5, en donde la muestra es de suero sanguíneo o plasma sanguíneo.

8. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la muestra es una muestra humana.

9. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende la etapa adicional de medir el nivel de TREM-1-Ligando en una o más muestras biológicas obtenidas de dicho sujeto.

10. Uso de un anticuerpo capaz de unirse específicamente a sTREM-1 en un método de diagnóstico in vitro de una enfermedad de origen bacteriano o fúngico, como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.