Formulaciones proteicas estables.

Una formulación adecuada para administración subcutánea que comprende 125 mg/ml de moléculas CTLA4Ig,

un azúcar seleccionado del grupo que consiste en sacarosa, lactosa, maltosa, manitol y trehalosa y mezclas de losmismos, y un vehículo acuoso farmacéuticamente aceptable, en la que la formulación tiene un intervalo de pH de 6 a8 y una viscosidad de 9 a 20 mPa·s, y la relación en peso de azúcar:proteína es 1,1:1 o mayor.

Formulaciones proteicas estables Campo de la invención La presente invención se refiere en general a formulaciones estables que comprenden moléculas CTLA4Ig, incluyendo formulaciones líquidas adecuadas para administración por una vía subcutánea (SC) .

Antecedentes de la invención Durantes las últimas dos décadas, la tecnología de ADN recombinante ha conducido a la comercialización de muchos productos terapéuticos proteicos. La vía más convencional de suministro para fármacos proteicos ha sido la administración intravenosa (IV) debido a la escasa biodisponibilidad por la mayoría de las otras vías, mayor control durante la administración clínica, y desarrollo farmacéutico más rápido. Para productos que requieren administración frecuente y crónica, la vía subcutánea alternativa (SC) de suministro es más atractiva. Cuando se acompaña de jeringa precargada y tecnología de dispositivo autoinyector, el suministro SC permite la administración doméstica y mejor conformidad de administración.

Los tratamientos con dosis altas de más de 1 mg/kg o 100 mg por dosis con frecuencia requieren desarrollo de formulaciones a concentraciones que exceden 100 mg/ml debido al pequeño volumen (<1, 5 ml) que puede proporcionarse por las vías SC. Para proteínas que tienen una propensión a agregarse a las mayores concentraciones, conseguir dichas formulaciones de alta concentración es un reto de desarrollo. Incluso para la vía de suministro IV, en la que pueden administrarse grandes volúmenes, pueden ser necesarias concentraciones de proteína de decenas de miligramos por mililitro para regímenes de alta dosificación y esto puede presentar retos de estabilidad para algunas proteínas.

Los principios que gobiernan la solubilidad proteica son más complicados que los de moléculas sintéticas pequeñas, y por lo tanto superar el problema de la solubilidad proteica requiere diferentes estrategias. Operativamente, la solubilidad para proteínas podría describirse por la máxima cantidad de proteína en presencia de cosolutos por lo que la solución permanece visiblemente transparente (es decir, no muestra precipitados proteicos, cristales o geles) . La dependencia de la solubilidad proteica en la fuerza iónica, forma salina, pH, temperatura y ciertos excipientes se ha explicado mecánicamente por cambios en la tensión superficial de agua en bruto y unión proteica al agua e iones frente a autoasociación por Arakawa y col en Theor y of protein solubility, Methods of Enzymology, 114: 49- 77, 1985; Schein in Solubility as a function of protein structure and solvent components, BioTechnology 8 (4) : 308- 317, 1990; Jenkins en Three solutions of the protein solubility problem, Protein Science 7 (2) : 376- 382, 1998; y otros. La unión de proteínas con excipientes específicos o sales influye en la solubilidad mediante cambios en la conformación proteica o enmascaramiento de ciertos aminoácidos implicados en la autointeracción. Las proteínas también preferentemente se hidratan (y se estabilizan como conformaciones más compactas) por ciertas sales, aminoácidos y azúcares, lo que conduce a su solubilidad alterada.

Se espera que la agregación que requiere colisión bimolecular sea la principal ruta de degradación en soluciones proteicas. La relación de la concentración con la formación de agregados depende del tamaño de los agregados así como del mecanismo de asociación. La agregación proteica puede dar como resultado asociación covalente (por ejemplo, ligada a disulfuro) o no covalente (reversible o irreversible) . La agregación irreversible por asociación no covalente generalmente se produce mediante regiones hidrófobas expuestas por procesos térmicos, mecánicos o químicos que alteran la conformación nativa de una proteína. La agregación proteica puede influir en la actividad proteica, farmacocinética y seguridad, por ejemplo, debido a la inmunogenicidad.

Un enfoque típico para minimizar la agregación es restringir la movilidad de las proteínas para reducir el número de colisiones. La liofilización con excipientes apropiados puede mejorar la estabilidad proteica frente a agregación reduciendo la movilidad proteica y restringiendo la flexibilidad conformacional con el beneficio añadido de minimizar las reacciones hidrolíticas posteriores a la retirada del agua. La adición de excipientes apropiados, incluyendo lioprotectores, puede evitar la formación de agregados durante el procedimiento de liofilización así como durante el almacenamiento del producto final. Un parámetro clave para protección eficaz es la relación molar del lioprotector y la proteína. Generalmente se requieren relaciones molares de 300:1 o mayores para proporcionar estabilidad adecuada, especialmente para almacenamiento a temperatura ambiente. Dichas relaciones también pueden, sin embargo, conducir a un aumento indeseable de la viscosidad.

La liofilización permite diseñar una formulación con estabilidad y tonicidad apropiadas. Aunque no se requiere necesariamente isotonicidad para administración SC, puede ser deseable para minimizar el dolor tras su administración. La isotonicidad de un liófilo es difícil de conseguir porque tanto la proteína como los excipientes se concentran durante el proceso de reconstitución. Las relaciones molares de excipientes:proteína de 500:1 dará como resultado preparaciones hipertónicas si la concentración de proteína total se dirige a más de 100 mg/ml. Si se desea conseguir una formulación isotónica, entonces una elección de relación molar menor de excipiente:proteína dará como resultado una formulación potencialmente menos estable.

La determinación de la mayor concentración proteica obtenible sigue siendo un ejercicio empírico debido a la naturaleza lábil de la conformación proteica y la propensión a interaccionar consigo misma, con superficies y con solutos específicos.

Los ejemplos de sujetos que pueden beneficiarse de formulaciones SC son los que tienen afecciones que requieren administración frecuente y crónica tales como sujetos con la enfermedad del sistema inmunitario artritis reumatoide y trastornos inmunitarios asociados con trasplante de injertos. Los productos farmacológicos proteicos disponibles en el mercado para tratamiento de artritis reumatoide incluyen HUMERA®, ENBREL® y REMICADE®.

HUMIRA® (Abbott) se proporciona en jeringas de vidrio precargadas de 1 ml, de uso único, como una solución estéril, sin conservantes para administración subcutánea. La solución de HUMIRA® es transparente e incolora, con un pH de aproximadamente 5, 2. Cada jeringa suministra 0, 8 ml (40 mg) de producto farmacológico. Cada 0, 8 ml de HUMIRA® contiene 40 mg de adalimumab, 4, 93 mg de cloruro sólido, 0, 69 mg de fosfato sódico monobásico dihidrato, 1, 22 mg de fosfato sódico dibásico dihidrato, 0, 24 mg de citrato sódico, 1, 04 mg de ácido cítrico monohidrato, 9, 6 mg de manitol, 0, 8 mg de polisorbato 80 y Agua para inyección, USP. Se añade hidróxido sódico según sea necesario para ajustar el pH.

ENBREL® (Amgen) se proporciona en una jeringa de 1 ml precargada de uso único, como una solución estéril, sin conservantes para inyección subcutánea. La solución de ENBREL® es transparente e incolora y se formula a pH 6, 3 ± 0, 2. Cada jeringa precargada de uso único de ENBREL® contiene 0, 98 ml de una solución de 50 mg/ml de etanercept con sacarosa 10 mg/ml, cloruro sódico 5, 8 mg/ml, clorhidrato de L-arginina 5, 3 mg/ml, fosfato sódico monobásico monohidrato 2, 6 mg/ml y fosfato sódico dibásico anhídrido 0, 9 mg/ml. La administración de una jeringa precargada de ENBREL® 50 mg/ml proporciona una dosis equivalente a dos viales de 25 mg de ENBREL® liofilizado, cuando los viales se reconstituyen y administran como se recomienda. El vial de uso múltiple ENBREL® contiene polvo liofilizado estéril, blanco, sin conservantes. La reconstitución con 1 ml del Agua para Inyección Bacteriostática Estéril (BWFI) proporcionada, USP (que contiene alcohol bencílico 0, 9 %) produce una solución de uso múltiple, transparente e incolora con un pH d 7, 4 ± 0, 3 que contiene 25 mg de etanercept, 40 mg de manitol, 10 mg de sacarosa y 1, 2 mg de trometamina.

REMICADE® (Centocor) se proporciona como un polvo liofilizado, blanco, estéril para infusión intravenosa. Después de reconstitución con 10 ml de Agua Estéril para inyección, USP, el pH resultante es de aproximadamente 7, 2. Cada frasco de uso individual contiene 100 mg de infliximab, 500 mg de sacarosa, 0, 5 mg de polisorbato 80, 2, 2 mg de fosfato sódico monobásico, monohidrato, y 6, 1 mg de fosfato sódico dibásico, dihidrato. No están presentes conservantes.

Los productos farmacológicos proteicos disponibles en el mercado para el tratamiento de trastornos... [Seguir leyendo]

1. Una formulación adecuada para administración subcutánea que comprende 125 mg/ml de moléculas CTLA4Ig , un azúcar seleccionado del grupo que consiste en sacarosa, lactosa, maltosa, manitol y trehalosa y mezclas de los mismos, y un vehículo acuoso farmacéuticamente aceptable, en la que la formulación tiene un intervalo de pH de 6 a 8 y una viscosidad de 9 a 20 mPa·s, y la relación en peso de azúcar:proteína es 1, 1:1 o mayor.

2. La formulación de la reivindicación 1 en la que el azúcar es sacarosa, manitol o trehalosa.

3. La formulación de la reivindicación 1 en la que el azúcar es un disacárido.

4. La formulación de la reivindicación 1 en la que el azúcar es sacarosa.

5. La formulación de la reivindicación 4 en la que la relación en peso de sacarosa:proteína es de 1, 3:1 a 1, 5:1.

6. La formulación de la reivindicación 5 en la que la relación en peso de sacarosa:proteína es de aproximadamente 1, 4:1.

7. La formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 que tiene un intervalo de pH de 6 a 7, 8.

8. La formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 que comprende además un agente tamponante farmacéuticamente aceptable.

9. La formulación de la reivindicación 8 en la que el agente tamponante está en una cantidad de tampón fosfato de al menos 10 mM.

10. La formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 que comprende además un tensioactivo.

11. La formulación de la reivindicación 10 en la que el tensioactivo es Poloxamer 188 en una cantidad de aproximadamente 8 mg/ml.

12. La formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 en la que la molécula CTLA4Ig tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la Figura 1 que comienza en metionina en la posición 27 o alanina en la posición 26 y termina en lisina en la posición 383 o glicina en la posición 382.

13. La formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 que comprende las moléculas CTLA4Ig en una cantidad de aproximadamente 125 mg/ml, sacarosa en una cantidad de aproximadamente 170 mg/ml, al menos un agente tamponante, agua estéril para inyección y opcionalmente un tensioactivo, en la que la molécula CTLA4Ig tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la Figura 1 que comienza en metionina en la posición 27 o alanina en la posición 26 y que termina en lisina en la posición 383 o glicina en la posición 382.

14. La formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 en la que la formulación es estable cuando se almacena de 2 a 8 ºC durante al menos 12 meses.

15. La formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 en la que la formulación tiene una osmolalidad de 700 mOsm/kg de H2O a 800 mOsm/kg de H2O.

16. Un artículo de fabricación que comprende;

a) al menos un recipiente que contiene la formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 y b) instrucciones para administrar la formulación por vía subcutánea a un sujeto en necesidad de la misma.

17. El artículo de fabricación de la reivindicación 16 en el que el recipiente es un vial o jeringa.

18. Una formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 para su uso en el tratamiento de enfermedades del sistema inmunitario.

19. La formulación de acuerdo con la reivindicación 18 para su uso en la terapia de enfermedades del sistema inmunitario de acuerdo con la reivindicación 18 en la que las enfermedades del sistema inmunitario se seleccionan del grupo que consiste en enfermedades autoinmunitarias, enfermedades inmunoproliferativas y trastornos relacionados con injertos.

20. Una formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 para su uso en el tratamiento o prevención de enfermedad de injerto contra huésped, artritis reumatoide o inhibición de rechazos de trasplantes de órganos y/o tejido sólidos.